本發(fā)明專利技術屬于生物領域，特別涉及產乳酸枯草芽孢桿菌發(fā)酵工藝及配方，按重量份計具體由以下組分組成：蛋白胨1-5份，牛肉膏1-3份，酵母提取物1-10份，氯化鈉5-15份，果寡糖10-100份；發(fā)酵工藝為：將生產產乳酸枯草芽孢桿菌種子液接種到裝有所述培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中進行發(fā)酵，發(fā)酵條件為：30-37℃連續(xù)培養(yǎng)24-72小時后靜置培養(yǎng)96-120小時，得產乳酸枯草芽孢桿菌合生元飼料添加劑用菌液；基于所述培養(yǎng)基的培養(yǎng)方法，可用于規(guī)模化生產產乳酸枯草芽孢桿菌合生元飼料添加劑用菌液，其工藝穩(wěn)定，益生菌含量高，生產成本低。
【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術屬于生物領域，特別涉及產乳酸枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)方法。
技術介紹
隨著國民經(jīng)濟的快速發(fā)展和人民生活水平的日益提高，人們對養(yǎng)殖環(huán)境及安全、健康的動物產品提出了更高、更新的要求。而近些年來，頻頻曝光的動物食品安全事件，如“瘦肉精事件”、“三聚氰胺奶事件”等等，無一不對動物養(yǎng)殖業(yè)造成了沉重地打擊，引發(fā)了嚴重的信任危機。中國作為世界第一動物養(yǎng)殖大國，動物產品出口在國民經(jīng)濟中舉足輕重，但近年來歐洲、日本等一些國家以食品安全問題為壁壘，拒絕中國動物產品的部分進入，給我 國經(jīng)濟造成不應有的損失。這一系列的問題都是“動物產品安全”問題所致，已成為制約中國養(yǎng)殖業(yè)科學健康和可持續(xù)發(fā)展的瓶頸。國際上目前普遍認為，微生態(tài)制劑在未來的動物養(yǎng)殖中將有巨大的應用前景，對解決動物產品安全性將起到較大的作用。我國雖然在微生態(tài)制劑的研究和開發(fā)方面比歐美起步晚，但近20年來發(fā)展相當迅速。生產微生態(tài)制劑的廠家由2000年的十幾家發(fā)展到2004年的1600家。據(jù)不完全統(tǒng)計，到2004年止，我國的各種微生態(tài)制劑的產量已達到15萬噸。產業(yè)化程度高、規(guī)模較大的有四川何明清用芽孢桿菌研制的8501、8701、8801、8901、901系列，分別用于仔豬、育肥豬、魚、禽、肉雞。大連醫(yī)學院研制劑的“促菌生”，南京農大研的“促康生”，松江制藥廠生產的DM423菌粉，黑龍江獸醫(yī)研究所生產的“痢康粉劑”，北京營養(yǎng)研究所生產的“增菌素”，杭州商學院生產的乳酸菌復合劑等等。市場上應用較多、效果較好的大多是以芽孢桿菌和乳酸桿菌為主的復合益生菌口服制劑。對產乳酸枯草芽孢桿菌進行發(fā)酵生產，綜合枯草芽孢桿菌和乳酸桿菌的優(yōu)點，可以使微生態(tài)制劑性能得到質的飛躍，達到更新?lián)Q代的目的。大規(guī)模發(fā)酵生產乳酸枯草芽孢桿菌菌液是新型微生態(tài)制劑生產的基礎和關鍵之一，但目前未有工廠化大規(guī)模發(fā)酵生產乳酸枯草芽孢桿菌菌液的發(fā)酵工藝。
技術實現(xiàn)思路
本專利技術的目的在于提供一種培養(yǎng)基配方、培養(yǎng)基制備方法及其獲得的培養(yǎng)基，該配方及培養(yǎng)基成本低，取材方便，適用于產乳酸枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)；該培養(yǎng)基的制備方法簡單，適用于大規(guī)模制備。為實現(xiàn)上述目的，本專利技術的技術方案為產乳酸枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)基配方，按重量份計具體由以下組分組成蛋白胨1-5份，牛肉膏1-3份，酵母提取物1-10份，氯化鈉5-15份，果寡糖10-100份。進一步，產乳酸枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)基配方，按重量份計具體由以下組分組成蛋白胨3份，牛肉膏2份，酵母提取物7份，氯化鈉11份，果寡糖75份。果寡糖，又稱為果聚糖、低聚果糖、藤果二糖族低聚糖，分子式為G-F-Fn (其中G為匍甸糖，F(xiàn)為果糖，η = 13)。所述的培養(yǎng)基配方制備培養(yǎng)基的方法，取配方量的蛋白胨、牛肉膏、酵母提取物及氯化鈉，加入適量的水使蛋白胨的質量體積分數(shù)為l_5g/L，并使各組分充分溶解，得混合液體；將所述混合液體滅菌，加入配方量的果寡糖混合均勻，得培養(yǎng)基。所述的方法制備的培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基為產乳酸枯草芽孢桿菌的專用培養(yǎng)基，在特定的發(fā)酵條件下，可得到較好的發(fā)酵效果。本專利技術的目的之二在于提供生產產乳酸枯草芽孢桿菌合生元飼料添加劑用菌液的方法，該方法操作簡單，穩(wěn)定性高，產率高。為實現(xiàn)上述目的，本專利技術的技術方案為所述的培養(yǎng)基生產產乳酸枯草芽孢桿菌合生元飼料添加劑用菌液的方法，具體包括以下步驟將生產產乳酸枯草芽孢桿菌種子液接種到裝有所述培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中進行動態(tài)發(fā)酵，動態(tài)發(fā)酵條件為30-37°C條件下連續(xù)培養(yǎng)24-72小時，通氣量為O. 1-0. 5V/V -min,靜置培養(yǎng)96-120小時，得產乳酸枯草芽孢桿菌合生元飼料添加劑用菌液。 進一步，所述動態(tài)發(fā)酵條件為在2-20轉/分鐘條件下動態(tài)攪拌發(fā)酵。作為優(yōu)選，所述種子液和培養(yǎng)基的體積比為1-4 10，所述發(fā)酵罐的裝液量為10-20ml/100mL，所述種子液的濃度為3_15 X 108cfu/mL,發(fā)酵罐的裝液量優(yōu)選為20mL/100mL。其中，所述種子液為二級種子液。其中，所述二級種子液的獲得方法具體包括以下步驟A—級種子液的獲得將產乳酸枯草芽孢桿菌菌種接入營養(yǎng)肉湯，37°C培養(yǎng)24小時；然后劃線接種在營養(yǎng)瓊脂平板上，在生化培養(yǎng)箱中，經(jīng)37°C、24-48小時培養(yǎng)后選典型菌落接種營養(yǎng)瓊脂斜面若干支，置37°C、生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，作為一級種子；產乳酸枯草芽孢桿菌菌種接入營養(yǎng)肉湯時，接種量優(yōu)選lml/lOOmL ；B 二級種子液的獲得取一級種子接種于營養(yǎng)肉湯，置37°C生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，得二級種子，一級種子接種于營養(yǎng)肉湯接種量優(yōu)選2ml/100mL ；營養(yǎng)肉湯的制備方法為蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，蒸餾水至IOOOmL,調節(jié)PH7. 4 ;按上述成分混合，溶解后校正pH，分裝燒瓶，每瓶225mL，121°C高壓滅菌15min，得營養(yǎng)肉湯。本專利技術的有益效果在于基于所述培養(yǎng)基的培養(yǎng)方法，可用于規(guī)模化生產產乳酸枯草芽孢桿菌合生元飼料添加劑用菌液，其工藝穩(wěn)定，益生菌含量高，生產成本低。具體實施例方式以下結合具體實施例，對本專利技術進行詳細說明。實施例中，產乳酸枯草芽孢桿菌CSY1-3-10-1株作為菌種。實施例I培養(yǎng)基的制備配方一產乳酸枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)基配方，按重量份計具體由以下組分組成蛋白胨I份，牛肉膏I份，酵母提取物I份，氯化鈉15份，果寡糖100份。配方二 產乳酸枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)基配方，按重量份計具體由以下組分組成蛋白胨5份，牛肉膏3份，酵母提取物10份，氯化鈉5份，果寡糖10份。配方三產乳酸枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)基配方，按重量份計具體由以下組分組成蛋白胨3份，牛肉膏2份，酵母提取物7份，氯化鈉11份，果寡糖75份。將上述 三種配方按以下步驟制備取配方量的蛋白胨、牛肉膏、酵母提取物及氯化鈉，加入適量的水使蛋白胨的質量體積分數(shù)為3g/L(l-5g/L均可)，并使各組分充分溶解，得混合液體；將所述混合液體滅菌，加入配方量的果寡糖混合均勻，配方一、二和三依次得培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基二和培養(yǎng)基三O實施例2培養(yǎng)基的應用一所述的培養(yǎng)基生產產乳酸枯草芽孢桿菌合生元飼料添加劑用菌液的方法，具體包括以下步驟將生產產乳酸枯草芽孢桿菌種子液(濃度為3X108cfu/mL)接種到裝有所述培養(yǎng)基(配方三)的發(fā)酵罐中進行10轉/分鐘動態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵條件為30°C連續(xù)培養(yǎng)24小時后，再靜置培養(yǎng)96小時，得產乳酸枯草芽孢桿菌合生元飼料添加劑用菌液。經(jīng)計數(shù)，產乳酸枯草芽孢桿菌合生元飼料添加劑用菌液中產乳酸枯草芽孢桿菌的含菌數(shù)大于I. 80X10lclCFU/mL。二將產乳酸枯草芽孢桿菌菌種接入所述培養(yǎng)基(配方二 )，37± 1°C培養(yǎng)24小時；然后劃線接種在營養(yǎng)瓊脂平板上，在生化培養(yǎng)箱中，在37土1°C條件下培養(yǎng)24-48小時，選典型菌落接種營養(yǎng)瓊脂斜面，置37± I°C、生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，作為一級種子。三取一級種子接種于所述培養(yǎng)基(配方一)，置37± I°C生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，得二級種子。實施例3生產產乳酸枯草芽孢桿菌合生元飼料添加劑用菌液的方法I 二級種子液的獲得方法具體包括以下步驟A) 一級種子液的獲得將產乳酸枯草芽孢桿菌菌種接入營養(yǎng)肉湯(接種量lml/lOOmL)，37±1°C培養(yǎng)24小時；然后劃線接種在營養(yǎng)瓊脂平板上，在生化培養(yǎng)箱本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術保護點】
產乳酸枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)基配方，其特征在于，按重量份計具體由以下組分組成：蛋白胨1？5份，牛肉膏1？3份，酵母提取物1？10份，氯化鈉5？15份，果寡糖10？100份。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：楊金龍，劉作華，黃勇，付利芝，鄭華，張素輝，楊睿，沈克飛，
申請(專利權)人：重慶市畜牧科學院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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