HCV感染患者中的冷球蛋白血癥性血管炎和B細胞惡性腫瘤的預測標志物制造技術

本發提供了通過采用檢測一種特異抗體上的交叉獨特型表位(cross-idiotypic?epitope)來檢測在產生疾病的臨床癥狀之前產生該抗體的細胞的用于與一種特異性抗體相關的疾病的早期診斷和治療的方法和組合物。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】HCV感染患者中的冷球蛋白血癥性血管炎和B細胞惡性腫瘤的預測標志物相關申請本申請要求于2010年3月1日提交的美國臨時申請號61/309,161的優先權的權益，通過引用以其全部內容結合在此。
本專利技術總體上涉及用于與丙型肝炎病毒感染相關的疾病的早期診斷和治療的方法。
技術介紹
丙型肝炎病毒(HCV)感染的一種不常見的表現是與II型冷球蛋白血癥(冷球蛋白血癥性血管炎)有關的系統性血管炎，一種增殖性B細胞紊亂，其中5％-10％的患者轉化為B細胞惡性腫瘤。產生冷球蛋白血癥性血管炎所需要的HCV感染的持續時間尚不明確，但似乎為10年或更長的時間。由于大多數感染者在冷球蛋白血癥性血管炎癥狀發作之前的這段延長的時間期間不表現出任何癥狀，很少做出冷球蛋白血癥性血管炎或相關的B細胞惡性腫瘤的早期診斷。由于丙型肝炎患者在其有癥狀前不太可能進行治療，本領域中對于發現有助于HCV感染患者中的冷球蛋白血癥性血管炎和相關的B細胞惡性腫瘤的早期診斷的預后標志物存在著需要。
技術實現思路
本專利技術包括通過采用檢測一種特異抗體上的交叉獨特型表位(cross-idiotypicepitope)來檢測在產生疾病的臨床癥狀之前產生該抗體的細胞的用于與一種特異性抗體相關的疾病的早期診斷和治療的方法。具體而言，本專利技術提供了一種在這樣的患者產生該感染的這些并發癥之前利用丙型肝炎病毒(HCV)感染患者的B細胞克隆擴增(BCE)分析的用于與II型冷球蛋白血癥相關的冷球蛋白血癥性血管炎或B細胞惡性腫瘤的早期診斷的方法。在此還描述的是采用針對檢測到的交叉獨特型抗原的抗體進行治療的方法。本專利技術是基于以下令人驚奇的發現：即，在無癥狀HCV感染患者中檢測到的WAB細胞是產生冷球蛋白血癥性血管炎和相關的B細胞惡性腫瘤的一個標志物。在此描述的是用于鑒定具有產生與HCV相關的冷球蛋白血癥性血管炎和B細胞惡性腫瘤的風險的受試者的方法。首先，提供了一種來自感染有HCV的受試者的樣品。適合的樣品是一種包括全血的生物流體。如果在樣品中檢測到WA交叉獨特型陽性(Xid+)B細胞，則該受試者被鑒定為具有產生與HCV相關的冷球蛋白血癥性血管炎和B細胞惡性腫瘤的風險的人。一方面，該受試者是被早期鑒定的。優選地，該早期鑒定的受試者是在初次HCV感染之后、但在表現與冷球蛋白血癥性血管炎或B細胞惡性腫瘤相關的癥狀之前被鑒定的。一方面，這些WAXid+B細胞是通過鑒定來自一個克隆擴增的B細胞群的一種免疫球蛋白核酸序列而檢測的，其中該免疫球蛋白核酸序列與WAXid相關。該與WAXid相關的免疫球蛋白核酸序列包含IgHV1-69、或IgHVV3-7或相關的種系基因、VK325或VK328、JH4或JH3、Jk1、以及一個D區共有序列，D區共有序列包括SEQIDNO：1(共有序列1)或SEQIDNO：2(共有序列2)。可替代地，這些WAXid+B細胞是用一種分離的抗WAXid的抗體檢測的。任選地，該分離的抗WAXid的抗體附著到一種標記上。一方面，該標記是一種異硫氰酸熒光素(FITC)標記或一種藻紅蛋白(PE)標記。這些WAXid+B細胞是通過免疫染色或流式細胞分析進行檢測的。一方面，該方法進一步包括用一種抗CD11c抗體來檢測該樣品中的CD11C+的細胞。還提供了用于鑒定具有產生與HCV感染相關的冷球蛋白血癥性血管炎或B細胞惡性腫瘤的風險的受試者的方法。首先，提供了來自一位HCV感染患者的克隆擴增的B細胞的一種核酸樣品來檢測與WAXid相關的免疫球蛋白核酸序列，其中所述免疫球蛋白核酸序列包括IgHV1-69或IgHV3-7或有關的種系基因、VK325或VK328、JH4或JH3、以及Jk1。隨后，檢測該樣品中的包含SEQIDNO：1或SEQIDNO：2的一個序列。如果SEQIDNO：1或SEQIDNO：2存在于含有與WAXid相關的IgH和VK序列的源于HCV感染患者的核酸中，則預測HCV感染相關性冷球蛋白血癥性血管炎或B細胞惡性腫瘤的產生。一方面，該患者缺乏冷球蛋白血癥性血管炎或B細胞惡性腫瘤的臨床癥狀。本專利技術還提供了早期治療在受試者中的與HCV相關的冷球蛋白血癥性血管炎和B細胞惡性腫瘤的方法。首先，獲得一種來自感染有HCV的受試者的樣品。適合的樣品是一種包括全血的生物流體。如果該樣品含有WAXid+B細胞，則將一種抗WA的抗體給予該受試者，從而治療受試者中的與HCV相關的冷球蛋白血癥性血管炎和B細胞惡性腫瘤。優選地，該早期治療是在初次HCV感染之后、但在表現出與冷球蛋白血癥性血管炎或B細胞惡性腫瘤相關的癥狀之前進行的。本專利技術還提供了一種用于早期檢測和治療具有產生B細胞惡性腫瘤(由WAB細胞引起的那些除外)風險的一位受試者的方法。首先，提供了一種來自感染有HCV的受試者的樣品。任選地，該特異性非WAXid+B細胞是用一種分離的抗非WAXid抗體檢測的。一方面，該受試者是早期被鑒定的。優選地，該早期被鑒定的受試者是在初次HCV感染之后、但在表現出與冷球蛋白血癥性血管炎或B細胞惡性腫瘤相關的癥狀之前被鑒定的。本專利技術還提供了一種試劑盒，該試劑盒包含一套第一引物和第二引物，以及用于基于與WAXid相關的免疫球蛋白核酸序列的檢測來預測與HCV感染相關的冷球蛋白血癥血管炎和B細胞惡性腫瘤的說明書，這些免疫球蛋白核酸序列包括IgHV1-69或VIgHV3-7或相關的種系基因、VK325或VK328、JH4或JH3、Jk1、以及SEQIDNO：1或SEQIDNO：2。該套第一和第二引物包括位于互補決定區3(CDR3)序列的兩側的一種第一引物和一種第二引物、位于VH-D-JH序列的兩側的一種第一引物和一種第二引物、以及位于Ig編碼轉錄本中的VK-JK序列的兩側的一種第一引物和一種第二引物。根據本專利技術的以下優選實施方案的描述并且根據權利要求書，本專利技術的其他特征和優點將是明顯的。除非另有規定，在此使用的所有科技術語具有與本專利技術所屬領域的普通技術人員通常所理解的相同的含義。雖然與在此描述的那些相似或等同的方法和材料可以被用于本專利技術的實踐或試驗中，以下描述了適合的方法和材料。將所有出版物、專利申請、專利、Genbank/NCBI登錄號、以及其他在此提及的參考文獻以其全部內容通過引用進行結合。在發生沖突的情況下，將以本說明書(包括定義)為準。另外，材料、方法和實例僅僅是說明性的而不旨在進行限制。根據以下詳細描述和權利要求書，本專利技術的其他特征和優點將是明顯的。附圖說明圖1是一個B細胞克隆擴增分析凝膠的化學發光圖(chemilumigraph)?；颊叩暮颂呛怂?RNA)被擴增。患者27、45、71、72、80、84和88被考慮為陽性(白色箭頭表示BCE)并且患者17、50、83、85、86和87被考慮為陰性。通過凝膠圖像的光密度掃描證實了這些分類。圖2顯示了患者127的另外研究結果。圖2A是外周血瑞氏染色的顯微照片，顯示了絨毛淋巴細胞。圖2B是一個流式細胞術直方圖，顯示了一個CD11c+、WA+B細胞群。圖2C和2D是描繪了用異硫氰酸熒光素(FITC)標記的抗WAXid(C)和藻紅蛋白(PE)標記的抗CD11c(D)的CD11C分離的細胞的雙重染色的顯微照片。具體實施方式在美國，感染有丙型肝炎病毒(本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2010.03.01 US 61/309,1611.一種用于檢測WAXid+B細胞的試劑在制造診斷試劑中的應用，所述診斷試劑用在鑒定具有產生與丙型肝炎病毒相關的冷球蛋白血癥性血管炎或B細胞惡性腫瘤的風險的受試者的方法中，該方法包括：提供一種來自感染有丙型肝炎病毒的受試者的樣品；使用所述診斷試劑檢測在所述樣品中的WAXid+B細胞；從而鑒定具有產生與丙型肝炎病毒相關的冷球蛋白血癥性血管炎或B細胞惡性腫瘤的風險的受試者。2.如權利要求1所述的應用，其中所述WAXid+B細胞是通過鑒定來自一個克隆擴增的B細胞群的一種免疫球蛋白核酸序列而檢測的，其中該免疫球蛋白核酸序列與WAXid相關。3.如權利要求1所述的應用，其中所述WAXid+B細胞是用一種分離的抗WAXid抗體檢測的。4.如權利要求1所述的應用，其中所述受試者缺乏冷球蛋白血癥性血管炎或B細胞惡性腫瘤的臨床癥狀。5.如權利要求4所述的應用，其中所述受試者是在初次丙型肝炎病毒感染之后、但在表現出與冷球蛋白血癥性血管炎或B細胞淋巴瘤相關的癥狀之前被鑒定的。6.如權利要求1所述的應用，其中所述樣品是一種包括全血的生物流體。7.如權利要求2所述的應用，其中與WAXid相關的所述免疫球蛋白核酸序列包含：IgHV1-69或IgHV3-7；VK325或VK328；JH4或JH3；Jk1；以及編碼D區共有序列的核酸序列。8.如權利要求3所述的應用，其中所述分離的抗WAXid抗體附著到一種標記上，該標記選自下組，該組由異硫氰酸熒光素標記和藻紅蛋白標記組成。9.如權利要求1所述的應用，其中所述WAXid+B細胞是通過流式細胞分析進行檢測的。10.如權利要求1所述的應用，其中所述方法進一步包括用一種抗CD11c抗體來檢測在所述樣品中的一種CD11C+細胞。11.一種用于檢測預測標志物的試劑在制造診斷試劑中的應用，所述診斷試劑用在鑒定具有產生與丙型肝炎病毒感染相關的冷球蛋白血癥性血管炎或B細胞惡性腫瘤的風險的受試者的方法中，該方法包括...

【專利技術屬性】
技術研發人員：文森特·阿格內洛，
申請(專利權)人：文森特·阿格內洛，
類型：
國別省市：