本發明專利技術公開了一種提高烤煙上部煙葉質量的生物制劑及其制備方法和應用，屬于微生物技術領域和卷煙技術領域。所述的生物制劑是一種菌懸液，所述的菌懸液中含有枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)3-10菌株，即枯草芽孢桿菌3-10菌株CCTCC?No.M2011100。將所述菌懸液，按煙葉總重量7％～13％的比例噴灑；進行人工陳化：溫度32℃～42℃、濕度50％～70％，時間13～18天；人工陳化后的煙葉送往卷煙生產線。本發明專利技術菌株是一種優良的烤煙上部煙葉陳化增香提質菌，特別是人工陳化后上部煙的刺激性和雜氣減輕，香氣質和香氣量得到一定程度的改善，同時較自然陳化縮短烤煙上部煙葉的陳化周期。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于微生物
和卷煙
，具體涉及一種用以提烤煙上部煙葉質量的微生物制劑，及該制劑的制備方法和在烤煙上部煙葉中的應用。
技術介紹
現有技術中，煙葉陳化是煙草初加工過程中的一個重要加工過程，同時陳化也是煙葉吸食品質形成的一個重要環節。由于當年收獲的煙葉(原煙)在品質上尚存在著不同程度的缺陷，如香氣不突出，青腥雜氣較重，刺激性大，吸味辛辣，余味不干凈，煙氣不夠細膩，煙葉色澤及燃燒性也不符合加工要求等缺點，必須經過陳化以促使煙葉內在化學成分的轉化(楊虹琦等，2003)。煙葉陳化是一個與物理變化相伴隨的復雜的生理生化和化學反應過程，在這個過程中，煙葉內大分子有機物質和化學成分在氧化反應、酶促反應以及微生物作用下不斷分解、轉化和消耗，小分子有機物香氣成分不斷形成，促進煙葉主要化學成分 發生變化，青雜氣、刺激性和異味大大減輕，香氣質和香氣量變佳，吸味醇和。煙葉陳化包括自然陳化和人工陳化，自然發酵主要是借助自然氣候的變化進行發酵，也稱為季節性發酵，主要特點是在煙葉儲存期間，利用一年一度的春季溫度上升，促進煙葉內酶的活動，使煙葉經過緩慢的發酵過程，以達到改善煙葉品質的目的。自然陳化的優點是工藝簡單、操作方便、發酵后煙葉色澤鮮明，比較均勻。缺點是時間長，一般為I 2年，占用倉庫面積大，煙葉周轉慢，不夠經濟。人工陳化烤煙煙葉的工作也有開展，主要是針對煙葉等級相對較高的中部煙的，而且其效果不顯著，無法推廣應用。這些方法對于質量和可用性差的上部煙葉就更無應用價值。上部煙葉占整株煙葉的三分之一，占產量30-40%左右。目前我國的煙葉質量與國際優質煙葉相比，仍然存在著一定的差距，主要表現在上部煙葉葉片偏厚、顏色較深、組織結構緊密、煙堿含量偏高、還原糖及糖堿比低，內在化學成分不協調，在感官評吸方面表現為勁頭大，刺激性大，雜氣重，余味不干凈，上部煙葉的質量和可用性差的問題尤為突出。
技術實現思路
針對現有技術的上述不足，本專利技術要解決的技術問題是提供一種提高烤煙上部煙葉質量的生物制劑及其制備方法和應用。針對烤煙上部煙葉質量次、可用性差的問題，尋找一種能夠顯著提高烤煙上部煙葉品質的優勢菌株，制成含有該優勢菌株的菌懸液生物制齊U，將其在烤煙上部煙葉的人工陳化中應用，大大提高了上部煙葉的質量。本專利技術的技術方案是一種提高烤煙上部煙葉質量的生物制劑，其特別之處在于所述的生物制劑是一種菌懸液，所述的菌懸液中含有枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) 3-10菌株，即枯草芽孢桿菌 3-10 菌株 CCTCC No. M2011100。所述的提高烤煙上部煙葉質量的生物制劑的制備方法按以下步驟進行(I)取所述枯草芽孢桿菌CCTCC No. M2011100菌株進行發酵培養，發酵培養基組成為:蛋白胨10，酵母粉5，NaCl 10，以上單位為g/L，pH7. 2 7. 4 ;(2)所述枯草芽孢桿菌CCTCC No. M2011100菌株的發酵培養的條件為180rpm，37°C, 16h ；(3)所述枯草芽孢桿菌CCTCC No. M2011100菌株的發酵菌體的收集在發酵培養結束后，8000rpm 8min離心沉淀菌體；(4)所述枯草芽孢桿菌CCTCC No. M2011100菌株的發酵菌體通過麥云度法制備成108CFU/mL的菌懸液。所述的提高烤煙上部煙葉質量的生物制劑的應用，其特別之處在于首先，將所述枯草芽孢桿菌CCTCC No. M2011100菌株制備的108CFU/mL的菌懸液， 按烤煙上部煙葉總重量7% 13%的比例噴灑在烤煙上部煙葉上，噴灑所述菌懸液后的煙葉處于手捏不成團的狀態；然后，進行人工陳化，所述人工陳化時將烤煙上部煙葉封存在下列條件的環境中溫度32°C 42°C、濕度50% 70%，時間13 18天；所述人工陳化加速了烤煙上部煙葉發酵過程，縮短了發酵周期，經人工陳化后的烤煙上部煙葉經檢測，其主要化學成分的變化已完成，達到了可用標準，作為原料送往卷煙生產線。本專利技術的優點本專利技術提供的枯草芽孢桿菌CCTCC NO.M2011100菌株，是一種優良的烤煙上部煙葉陳化增香提質菌，對烤煙上部煙葉的人工陳化有促進作用，特別是人工陳化后上部煙的刺激性和雜氣減輕，香氣質和香氣量得到一定程度的改善，同時較自然陳化縮短烤煙上部煙葉的陳化周期。附圖說明附圖I是枯草芽孢桿菌CCTCC No. M2011100菌株的顯微照片；附圖2是枯草芽孢桿菌CCTCC NO.M2011100菌株在蛋白平板上的透明圈測定照片。菌種保藏信息本專利技術所涉及的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) 3_10菌株保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC)。保藏日期是2011年3月30日。保藏號為枯草芽孢桿菌CCTCCNo. M2011100。具體實施例方式下面結合實施例及附圖對本專利技術的具體實施方式作進一步詳細的描述。實施例I :本專利技術提供的枯草芽孢桿菌CCTCC No. M2011100菌株的選育。將不同產地及不同陳化條件下的烤煙煙葉用已滅菌的剪刀剪碎，浸泡在IOOmL無菌水中，于200rpm搖床上震蕩30min，震蕩均勻后取O. ImL,稀釋涂布于蛋白培養基平板上(培養基組成脫脂奶粉30g，蛋白胨15g，酵母粉7g，NaCl 7g，pH7. 2 7. 4)，培養16h后，對各種不同菌落進行編號，并接種于液體培養基中(培養基組成蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl 10g, IOOOmL水，pH7. 2 7. 4)，培養12h，并利用接種針穿刺接種于蛋白培養基平板上(培養基組成脫脂奶粉30g，蛋白胨15g，酵母粉7g，NaCl 7g，IOOOmL水，ρΗ7· 2 7. 4)，培養24h后測定蛋白平板上透明圈與菌落直徑比。通過蛋白平板透明圈法進行初篩，從烤煙煙葉表面獲得9株降解蛋白質效果較好的細菌(表I)。表I不同菌種產蛋白酶活的能力權利要求1.一種提高烤煙上部煙葉質量的生物制劑，其特征在于所述的生物制劑是一種菌懸液，所述的菌懸液中含有枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)3-10菌株，即枯草芽孢桿菌3-10 菌株 CCTCC No. M2011100。2.—種權利要求I所述的提高烤煙上部煙葉質量的生物制劑的制備方法，其特征在于所述的制備方法按以下步驟進行 (1)取所述枯草芽孢桿菌CCTCCNo. M2011100菌株進行發酵培養，發酵培養基組成為蛋白胨10，酵母粉5，NaCl 10，以上單位為g/L，ρΗ7· 2 7· 4 ; (2)所述枯草芽孢桿菌CCTCCΝΟ.Μ2011100菌株的發酵培養的條件為180rpm，37°C，16h ； (3)所述枯草芽孢桿菌CCTCCNO.M2011100菌株的發酵菌體的收集在發酵培養結束后，8000rpm 8min離心沉淀菌體； (4)所述枯草芽孢桿菌CCTCCNO.M2011100菌株的發酵菌體通過麥云度法制備成108CFU/mL的菌懸液。3.—種權利要求I所述的提高烤煙上部煙葉質量的生物制劑的應用，其特征在于 首先，將所述枯草芽孢桿菌CCTCC No. M2011100菌株制備的108CFU/mL的菌懸液，按烤煙上部煙葉總重量7% 13%的比例噴灑在烤煙上部煙葉上，噴灑所述本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種提高烤煙上部煙葉質量的生物制劑，其特征在于：所述的生物制劑是一種菌懸液，所述的菌懸液中含有枯草芽孢桿菌(Bacillus？subtilis)3？10菌株，即枯草芽孢桿菌3？10菌株CCTCC？No.M2011100。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：李琳，何結望，吳風光，劉洋，王豹祥，閆鐵軍，陳守文，冀志霞，
申請(專利權)人：湖北中煙工業有限責任公司，華中農業大學，
類型：發明
國別省市：
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