本發明專利技術公開了一種以臍帶沃頓膠制作新型生物軟骨支架的方法，包括首先對臍帶標本進行處理制作出新型生物軟骨支架的流程；支架材料經石蠟包埋切片后，行HE染色，光鏡下觀察材料的孔性結構；取制備的三維多孔支架切成約50um薄片，于表面噴鉑金處理后，于掃描電鏡下觀察，選擇合適倍數拍攝掃描照片，觀察復合支架材料的形貌；通過對人臍帶沃頓膠結合物理和化學兩種方法進行脫細胞處理，再經冷凍干燥成型后成功地制備了三維多孔海綿樣支架，去細胞徹底，且不破壞膠原結構。本方法通過對人臍帶沃頓膠結合物理和化學兩種方法進行脫細胞處理，再經冷凍干燥成型后成功地制備了三維多孔海綿樣支架，去細胞徹底，且不破壞膠原結構，適合作為軟骨組織工程的支架載體。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物軟骨支架
，尤其涉及一種以臍帶沃頓膠為材料制作新型生物軟骨支架。
技術介紹
由于創傷、腫瘤、感染及退行性變等各種原因導致的關節軟骨損傷在臨床上常見，然而關節軟骨細胞屬于終末分化細胞，且在軟骨組織中軟骨細胞所占比例較小(少于1%),軟骨本身又缺乏血管、神經及淋巴管分布，因此軟骨組織自我修復能力低下。傳統上修復軟骨損傷常用的方法有關節腔清理術、關節磨削成形術、軟骨下骨鉆孔術及微骨折術等，但利用這些技術修復軟骨損傷，到目前為止效果一直都不理想，因為其形成的修復組織往往并不是透明軟骨，而是纖維軟骨，從而影響修復效果及關節功能。而自體骨軟骨、骨膜或軟骨膜移植取材時可造成附加損傷，且其來源有限；異體組織雖來源廣泛 但存在難以解決的排斥反應問題。
技術實現思路
本技術針對現有修復軟骨損傷常用方法中存在的缺點，如關節腔清理術、關節磨削成形術、軟骨下骨鉆孔術及微骨折術形成的修復組織往往并不是透明軟骨，而是纖維軟骨，從而影響修復效果及關節功能；自體骨軟骨、骨膜或軟骨膜移植取材時可造成附加損傷，且其來源有限；異體組織雖來源廣泛但存在難以解決的排斥反應問題，提出一種以臍帶沃頓膠制作新型生物軟骨支架的方法。本專利技術實施例是這樣實現的，一種以臍帶沃頓膠制作新型生物軟骨支架的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟對臍帶標本進行處理制作出新型生物軟骨支架；支架材料經石蠟包埋切片后，行HE染色，光鏡下觀察材料的孔性結構；取制備的三維多孔支架切成約50um薄片，于表面噴鉬金處理后，掃描電鏡下觀察，選擇合適倍數拍攝掃描照片，觀察復合支架材料的形貌；通過對人臍帶沃頓膠結合物理和化學兩種方法進行脫細胞處理，再經冷凍干燥成型后成功地制備了三維多孔海綿樣支架，去細胞徹底，且不破壞膠原結構。進一步，對臍帶標本進行處理制作出新型生物軟骨支架的流程包括以下步驟(I)將臍帶取下后，磷酸鹽緩沖液反復沖洗，沖凈臍帶表面及臍血管中的臍血，手術剪將臍血管及臍帶外膜小心分離后去除，分離出沃頓膠，將臍帶沃頓膠剪成長約2cm小段備用；(2)再次用含青、鏈霉素PBS液沖洗沃頓膠，5分鐘X 3次；(3)三蒸水浸泡沃頓膠；(4)胰酶37°C消化30分鐘，反復震蕩；(5)三蒸水反復震蕩漂洗；(6)將漂洗后的沃頓膠裝入凍存管中，置入含-196 °C液氮的液氮罐中冷凍15分鐘，取出37°C水浴快速復溫解凍，重復3次；(7)再次予PBS液清洗數次； (8)三蒸水浸泡5小時，并震蕩數次；(9)低溫冰箱，-80°C預凍I小時成型；(10)真空冷凍干燥機中真空冷凍干燥16小時；(11)將經過冷凍干燥處理后制備出的支架分裝在雙層塑料袋中；(12)使用環氧乙烷滅菌12小時；(13)放置于4°C冰箱中密封條件下保存備用。進一步，支架呈三維多孔網狀結構，孔隙分布較均勻，材料內空隙相互連通，適合作為軟骨組織工程的支架載體。本專利技術提供的以臍帶沃頓膠制作新型生物軟骨支架的方法，通過對人臍帶沃頓膠結合物理和化學兩種方法進行脫細胞處理，再經冷凍干燥成型后成功地制備了三維多孔海綿樣支架，去細胞徹底，且不破壞膠原結構。支架呈三維多孔網狀結構，孔隙分布較均勻，材料內空隙相互連通，適合作為軟骨組織工程的支架載體。附圖說明圖I是本專利技術實施例提供的以臍帶沃頓膠制作新型生物軟骨支架的流程圖。具體實施例方式為了使本專利技術的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合附圖及實施例，對本專利技術進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本專利技術，并不用于限定本專利技術。圖I示出了本專利技術實施例提供的以臍帶沃頓膠制作新型生物軟骨支架的流程圖。該方法包括SlOl :對臍帶標本進行處理制作出新型生物軟骨支架。(I)將臍帶取下后，磷酸鹽緩沖液(PBS液)反復沖洗，沖凈臍帶表面及臍血管中的臍血，手術剪將臍血管及臍帶外膜小心分離后去除，分離出沃頓膠，將臍帶沃頓膠剪成長約2cm小段備用；(2)再次用含青、鏈霉素PBS液沖洗沃頓膠，5分鐘X 3次；(3)三蒸水浸泡沃頓膠；(4)胰酶(2. 5g/l) 37°C消化30分鐘(反復震蕩)；(5)三蒸水反復震蕩漂洗；(6)將漂洗后的沃頓膠裝入凍存管中，置入含-196 °C液氮的液氮罐中冷凍15分鐘，取出37°C水浴快速復溫解凍，重復3次；(7)再次予PBS液清洗數次；(8)三蒸水浸泡5小時，并震蕩數次；(9)低溫冰箱(_80°C )預凍I小時成型；(10)真空冷凍干燥機中真空冷凍干燥16小時；(11)將經過冷凍干燥處理后制備出的支架分裝在雙層塑料袋中；(12)使用環氧乙烷滅菌12小時；(13)放置于4°C冰箱中密封條件下保存備用。S102 :支架材料經石蠟包埋切片后，行HE染色，光鏡下觀察材料的孔性結構。S103 :取制備的三維多孔支架切成約50um薄片，于表面噴鉬金處理后，掃描電鏡下觀察，選擇合適倍數拍攝 掃描照片，觀察復合支架材料的形貌支架材料的掃描電鏡觀察。S104 :結果。通過對人臍帶沃頓膠結合物理和化學兩種方法進行脫細胞處理，再經冷凍干燥成型后成功地制備了三維多孔海綿樣支架，去細胞徹底，且不破壞膠原結構。支架呈三維多孔網狀結構，孔隙分布較均勻，材料內空隙相互連通，適合作為軟骨組織工程的支架載體。本專利技術實施例提供的以臍帶沃頓膠制作新型生物軟骨支架的方法，主要包括以下步驟第一步、對臍帶標本進行處理制作出新型生物軟骨支架。(I)將臍帶取下后，磷酸鹽緩沖液(PBS液)反復沖洗，沖凈臍帶表面及臍血管中的臍血，手術剪將臍血管及臍帶外膜小心分離后去除，分離出沃頓膠，將臍帶沃頓膠剪成長約2cm小段備用；(2)再次用含青、鏈霉素PBS液沖洗沃頓膠，5分鐘X 3次；(3)三蒸水浸泡沃頓膠；(4)胰酶(2. 5g/l) 37°C消化30分鐘(反復震蕩)；(5)三蒸水反復震蕩漂洗；(6)將漂洗后的沃頓膠裝入凍存管中，置入含-196 °C液氮的液氮罐中冷凍15分鐘，取出37°C水浴快速復溫解凍，重復3次；(7)再次予PBS液清洗數次；(8)三蒸水浸泡5小時，并震蕩數次；(9)低溫冰箱(_80°C )預凍I小時成型；(10)真空冷凍干燥機中真空冷凍干燥16小時；(11)將經過冷凍干燥處理后制備出的支架分裝在雙層塑料袋中；(12)使用環氧乙烷滅菌12小時；(13)放置于4°C冰箱中密封條件下保存備用。第二步、支架材料經石蠟包埋切片后，行HE染色，光鏡下觀察材料的孔性結構。第三步、取制備的三維多孔支架切成約50um薄片，于表面噴鉬金處理后，掃描電鏡下觀察，選擇合適倍數拍攝掃描照片，觀察復合支架材料的形貌支架材料的掃描電鏡觀察支架材料的掃描電鏡觀察。第四步、結果。通過對人臍帶沃頓膠結合物理和化學兩種方法進行脫細胞處理，再經冷凍干燥成型后成功地制備了三維多孔海綿樣支架，去細胞徹底，且不破壞膠原結構。支架呈三維多孔網狀結構，孔隙分布較均勻，材料內空隙相互連通，適合作為軟骨組織工程的支架載體。本專利技術實施例提供的以臍帶沃頓膠制作新型生物軟骨支架的方法，通過對人臍帶沃頓膠結合物理和化學兩種方法進行脫細胞處理，再經冷凍干燥成型后成功地制備了三維多孔海綿樣支架，去細胞徹底，且不破壞膠原結構。支架呈三維多孔網狀結構，孔隙分布較均勻，材料內空隙相互連通，適合作為軟骨組織工程的支架載體。以上所述僅為本發本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種以臍帶沃頓膠制作新型生物軟骨支架的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：對臍帶標本進行處理制作出新型生物軟骨支架；支架材料經石蠟包埋切片后，行HE染色，光鏡下觀察材料的孔性結構；取制備的三維多孔支架切成約50um薄片，于表面噴鉑金處理后，掃描電鏡下觀察，選擇合適倍數拍攝掃描照片，觀察復合支架材料的形貌；通過對人臍帶沃頓膠結合物理和化學兩種方法進行脫細胞處理，再經冷凍干燥成型后成功地制備了三維多孔海綿樣支架，去細胞徹底，且不破壞膠原結構。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：吳鴻，
申請(專利權)人：吳鴻，
類型：發明
國別省市：
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