本發明專利技術涉及作為免疫刺激劑的寡核苷酸在免疫治療應用中的治療用途。更特別的，本發明專利技術提供一種免疫刺激性寡核苷酸，所述寡核苷酸在用于產生免疫應答或者用于治療需要免疫刺激的患者的方法中使用。本發明專利技術的免疫刺激性寡核苷酸優選的包括新嘌呤。本發明專利技術的免疫刺激性寡核苷酸還包括至少兩個寡核苷酸，所述至少兩個寡核苷酸在其3'端、核苷間聯結或者官能化的核堿基或者糖處與非核苷酸接頭連接，其中至少一個寡核苷酸是免疫刺激性寡核苷酸并具有易接近的5'端。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及利用寡核苷酸作為免疫刺激劑的免疫學和免疫治療應用。相關領域的概述在現代分子生物學中寡核苷酸已經成為不可或缺的工具，應用于各種技術，包括 從診斷探針方法到PCR到基因表達的反義抑制和免疫治療應用。寡核苷酸的這種廣泛使用導致對快速、廉價和高效合成寡核苷酸方法的需求不斷増加。用于反義和診斷應用的寡核苷酸的合成現在可以常規地實現。參見，例如，Methods in Molecular Biology, Vo丄 20:Protocols for Oligonucleotides andAnalogs pp. 165-189 (S.Agrawal, ed. , Humana Press, 1993) ;01igonucleotides andAnalogues, A Practical Approach, pp. 87-108(F. Eckstein, ed. , 1991);和 Uhlmann andPeyman, supra;Agrawal and Iyer, Curr. Op. in Biotech.6:12(1995);和 AntisenseResearch and Applications(Crooke and Lebleu, eds. , CRC Press, Boca Raton, 1993)。早期的合成方法包括磷酸ニ酯和磷酸三酯化學法。例如，Khorana等人，J. Molec.Biol. 72:209 (1972)公開了用于寡核苷酸合成的磷酸ニ酯化學法。Reese, TetrahedronLett. 34:3143-3179(1978),公開了用于寡核苷酸和多核苷酸合成的磷酸三酯化學法。這些早期方法大部分已經被更有效的亞磷酰胺和H-膦酸酯(H-phosphonate)合成途徑所取代。例如，Beaucage 和 Caruthers, Tetrahedron Lett. 22:1859-1862 (1981)，公開了脫氧核糖核苷亞磷酰胺在多核苷酸合成中的用途。Agrawal和Zamecnik,美國專利5，149，798 (1992)，公開了通過H-膦酸酯化合物方法的寡核苷酸優化合成。這兩種現代方法已經用于合成具有各種修飾的核苷酸間聯結的寡核苷酸。Agrawal和Goodchild, Tetrahedron Lett. 28:3539-3542 (1987),教導了利用亞憐酸胺化學法的寡核苷酸甲基膦酸酯合成。Connolly等人，Biochem. 23:3443(1984)，公開了利用亞磷酰胺化學法的寡核苷酸硫代磷酸酯合成。Jager等人，Biochem. 27:7237 (1988)，公開了利用亞磷酰胺化學法的寡核苷酸氨基磷酸酯合成。Agrawal等人，Proc. Natl. Acad. Sci.(USA) 85:7079-7083 (1988)，公開了利用H-膦酸酯化合物化學法的寡核苷酸氨基磷酸酯和硫代磷酸酯的合成。最近，若干研究人員已經證明寡核苷酸在免疫治療應用中用作免疫刺激劑的有效性。磷酸ニ酯和硫代磷酸酯寡核苷酸能夠誘導免疫刺激的觀察結果引起了人們將這種副作用發展成為治療手段的興趣。這些努力聚焦于包含二核苷酸——天然CpG的硫代磷酸酯寡核苷酸。Kuramoto 等人，Jpn. J. Cancer Res. 83:1128-1131 (1992)教導了包含含有CpG 二核苷酸的回文結構的磷酸二酯寡核苷酸能夠誘導干擾素-alpha和ga_a的合成并增強天然殺傷活性。Krieg等人，Nature 371:546-549(1995)公開了包含硫代磷酸酯CpG的寡核苷酸具有免疫刺激活性。Liang等人，J. Clin. Invest. 98:1119-1129 (1996)公開了這類寡核苷酸活化人B細胞。Moldoveanu等人，Vaccine 16:1216-124 (1998)教導了包含CpG的硫代磷酸酯寡核苷酸增強抗流感病毒的免疫應答。McCluskie和Davis，J.Immunol. 161:4463-4466(1998)教導了包含CpG的寡核苷酸作為強力的佐劑，增強抗乙型肝炎表面抗原的免疫應答。Hartman等人，J. Immunol 164:1617-1624(2000)教導了免疫刺激序列是種屬特異的，在小鼠和靈長類動物之間是不同的。對含CpG的硫代磷酸酯寡核苷酸的其他修飾還可能影響它們作為免疫應答調節劑的能力。參見，例如，Zhao 等人，Biochem. Pharmacol. (1996) 51:173-182; Zhao 等人，Biochem Pharmacol. (1996) 52:1537-1544; Zhao 等人，Antisense Nucleic Acid DrugDev. (1997)7:495-502;Zhao 等人,Bioorg. Med. Chem. Lett. (1999) 9:3453-3458;Zhao 等人，Bioorg. Med. Chem. Lett. (2000) 10:1051-1054; Yu 等人，Bioorg. Med. Chem. Lett.(2000) 10:2585-2588;Yu 等人，Bioorg. Med. Chem.Lett. (2001) 11:2263-2267;和 Kandimalla 等人,Bioorg. Med. Chem. (2001) 9:807-813。這些報道清楚表明仍然存在一種需要，以便能夠調節免疫刺激性寡核苷酸造成的免疫應答并克服免疫刺激性序列的種屬特異性。專利技術簡述本專利技術提供用于調節寡核苷酸化合物造成的免疫應答的方法。本專利技術的方法能夠用來改變免疫刺激性寡核苷酸產生的細胞因子分布譜(profile)，用于免疫治療應用。本專利技術人出人意料地發現免疫刺激二核苷酸的修飾使產生的免疫應答性質可以具有靈活性，而且某些修飾克服了迄今為止觀察到的免疫刺激序列的種屬特異性。在第一個方面中，本專利技術提供具有來自下列組的結構的免疫刺激性寡核苷酸5’ -Tcg1Aacg1Ttcg1-X-G1Cttg1Caag1Ct-S ’ ；5，-TCAGTCG2TTAG-X-GATTG2CTGACT-5’ ;5，-TCG2TCG2TTAGA-X-AGATTG2CTG2CT-5’ ;5，-CAGTCG2TTCAG-X-GACTTG2CTGAC-5，;5，-TCAGTCGiTTAG-X-GATTGfTGACT-5’ ;5，-TCGJCGJTAGA-X-AGATTGfTGfT-5，和5，-CAGTCGJTCAG-X-GACTTGiCTGAC-5J ;其中Gi=〗’-脫氧-7-脫氮鳥苷；G2=阿糖鳥苷(arabinoguanosine);和X=甘油接頭。在第二個方面中，本專利技術提供藥物組合物。這些組合物包括本專利技術第一個方面公開的任意一種組合物和藥學上可接受的載體。在第三個方面中，本專利技術提供一種在脊椎動物中產生免疫應答的方法，該方法包括對脊椎動物施用具有來自下列組的結構的免疫刺激性寡核苷酸5’ -Tcg1Aacg1Ttcg1-X-G1Cttg1Caag1Ct-S ’ ；5，-TCAGTCG2TTAG-X-GATTG2CTGACT-本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種免疫刺激性寡核苷酸，由下述結構組成：5’？CAGTC？Gx？TTCAG？3’？X？3’？GACTT？Gx？CTGAC？5’其中Gx是2’？脫氧？7？脫氮鳥苷或阿糖鳥苷，且X為甘油接頭。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：薩德希爾阿格雷沃爾，郁東，埃坎巴R坎迪馬拉，
申請(專利權)人：艾德拉藥物股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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