本發明專利技術的目的在于提供具有優異的抗凍活性的抗凍蛋白質，其可在工業水平高效且廉價地進行生產，安全并適于實用。此外，本發明專利技術的目的在于提供作為所述抗凍蛋白質的活性部分的多肽、包含所述抗凍蛋白質或多肽的組合物、食品、生物體樣品保護劑和化妝品、以及與所述抗凍蛋白質或多肽特異性反應的抗體。本發明專利技術的抗凍蛋白質來源于植物，且具有特定的氨基酸序列，或者，其為植物種子蛋白質。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及抗凍蛋白質、作為其活性部分的多肽、包含所述抗凍蛋白質或多肽的組合物、食品、生物體樣品保護劑和化妝品、以及與所述抗凍蛋白質或多肽特異性反應的抗體。
技術介紹
抗凍蛋白質是亦稱作不凍蛋白質或AFP(抗凍蛋白質(antifreeze protein))的物質。常規的抗凍蛋白質顯示出抑制冰結晶化和控制冰結晶形狀等的效果，并伴有熱滯活性。在此，熱滯是指在蛋白質水溶液中，即使在平衡融點以下的溫度、冰也不能生長的溫度范圍，如果將冰在水溶液中開始生長的溫度定義為凝固點，則熱滯作為平衡融點和凝固點之間的差被測出。 抗凍蛋白質是吸附在冰結晶表面上發揮上述作用的物質，用于在生物體中保護自身免受細胞凍結。這種抗凍蛋白質已經在例如魚類、昆蟲、植物、菌類、微生物等中被發現(專利文獻廣2，非專利文獻廣4)。然而，至今為止報道的抗凍蛋白質在魚類、昆蟲、植物、菌類、細菌等生物體內僅微量存在，提取效率非常差，即使大量存在，也存在著生物體本身難以捕獲和培養的問題，因此難以通過工業生產并作為食品用途而使用。因此，作為提供在一整年內穩定且廉價的具有抗凍活性的抗凍蛋白質的方法，提出用水等對低溫保存的蘿卜苗進行提取的方法(專利文獻3)。但是，用專利文獻3中公開的方法得到的抗凍蛋白質，未必具有足夠的抗凍活性?，F有技術文獻專利文獻專利文獻I :日本特開2004-24237號公報專利文獻2 日本特開2004-275008號公報專利文獻3 :日本特開2007-153834號公報非專利文獻非專利文獻I :生物物理，第43卷，第3號，第13(Tl35頁(2003年)非專利文獻2 :Plant Physiology (Plant Physiology),第 119 卷，第 1361 1369 頁(1999 年)非專利文獻3 Biochem. J. (Biochemcal. Journal)，第 340 卷，第 385 391 頁(1999年)非專利文獻4 :Can. J. Microbiol. (Canadian Journal of Microbiology),第 144卷，第6頁(1998年)
技術實現思路
專利技術要解決的問題本專利技術的目的在于提供具有優異的抗凍活性的抗凍蛋白質，其可在工業水平高效且廉價地進行生產，安全且適于實用。此外，本專利技術的目的在于提供作為所述抗凍蛋白質的活性部分的多肽、包含所述抗凍蛋白質或多肽的組合物、食品、生物體樣品保護劑和化妝品、以及與所述抗凍蛋白質或多肽特異性反應的抗體。解決問題的方法本專利技術人等為了解決上述問題進行了深入研究，結果發現了具有非常高的抗凍活性的、來源于植物的蛋白質，由此完成本專利技術。本專利技術涉及的第一抗凍蛋白質來源于植物，并且包含下述(1Γ(4)中的任意蛋白質中的至少一種，(I)具有序列號I的氨基酸序列、并且通過SDS-PAGE測定的分子量為19，000±200Da 的蛋白質， (2)具有序列號2的氨基酸序列、并且通過SDS-PAGE測定的分子量為22，000±250Da 的蛋白質，(3)通過SDS-PAGE測定的分子量為59，000±600Da、其N末端接受了修飾的蛋白質，(4)上述(1) (3)中的任意蛋白質的氨基酸序列中缺失、取代或添加了一個或多個氨基酸、并且具有抗凍活性的蛋白質。本專利技術涉及的第二抗凍蛋白質，其為植物種子蛋白質。本專利技術涉及的多肽為將上述的本專利技術涉及的抗凍蛋白質解離所得到的物質，并且具有抗凍活性。本專利技術涉及的抗體與上述的本專利技術涉及的抗凍蛋白質和/或上述的本專利技術涉及的多肽特異性反應。并且，本專利技術涉及的組合物、食品、生物體樣品保護劑和化妝品包含上述的本專利技術涉及的抗凍蛋白質和/或上述本專利技術涉及的多肽。本專利技術涉及的抗凍方法包含如下工序將上述的本專利技術涉及的抗凍蛋白質和/或上述的本專利技術涉及的多肽添加至溶液中。本專利技術涉及的上述本專利技術涉及的抗凍蛋白質和/或上述本專利技術涉及的多肽用于抑制冰結晶化的用途。具體實施例方式以下，對本專利技術涉及的抗凍蛋白質進行說明。需要說明的是，在本申請中，本專利技術涉及的第一抗凍蛋白質和第二抗凍蛋白質有時均被稱作本專利技術涉及的抗凍蛋白質。本專利技術涉及的第一抗凍蛋白質來源于植物，并且包含下述(1Γ(4)中的任意蛋白質中的至少一種，(I)具有序列號I的氨基酸序列、并且通過SDS-PAGE測定的分子量為19，000±200Da 的蛋白質，(2)具有序列號2的氨基酸序列、并且通過SDS-PAGE測定的分子量為22，000±250Da 的蛋白質，(3)通過SDS-PAGE測定的分子量為59，000±600Da、其N末端接受了修飾的蛋白質，(4)上述(1Γ(3)中的任意蛋白質的氨基酸序列中缺失、取代或添加了一個或多個氨基酸、并且具有抗凍活性的蛋白質。在本專利技術中，抗凍蛋白質廣義上是指具有阻礙冰結晶生長的功能的蛋白質。只要是通過冰結晶結構的觀察、測定抑制冰結晶生長的特性等公知的任意方法，表現出抗凍活性的抗凍蛋白質，則包含在本專利技術范圍內。以下，對本專利技術涉及的第一抗凍蛋白質的性狀進行詳細地說明。所述抗凍蛋白質包含用 SDS-PAGE 測量分子量為 19，000±200Da、22, 000±250Da、或 59，000±600Da 的蛋白質中的至少一種。分子量為19，000±200Da的蛋白質具有與序列號I的氨基酸序列實質相同的氨基酸序列，分子量為22，000±250Da的蛋白質具有與序列號2的氨基酸序列實質相同的氨基酸序列，分子量為59，000 土 600Da的蛋白質接受了某些N末端修飾。在此，氨基酸序列實質相同是指氨基酸序列的至少80%以上，優選90%以上，進一步優選95%以上，進一步優選 98%以上，最優選100%重復。另外，本專利技術涉及的第一抗凍蛋白質也可包含上述任意蛋白質的氨基酸序列中缺失、取代或添加了一個或多個氨基酸、并且具有抗凍活性的蛋白質。在上述氨基酸序列中，作為缺失、取代或添加的氨基酸數，優選I以上且3以下，進一步優選I或2，特別優選I。只要包含上述氨基酸序列，蛋白質可以為由單一亞基構成的單體，由多個亞基構成的復合物，或包含復合物一部分的物質。在此，亞基是指例如在二硫蘇糖醇等還原劑的存在下，用SDS-PAGE對蛋白質進行分析時，以各個低分子帶的形式被確認，是由蛋白質解離得到的多肽。本專利技術中的具有抗凍活性是指在該蛋白質溶液中，通過阻礙冰結晶化而控制冰結晶形狀，從而具有抑制冰結晶生長或粗大化的活性。更具體而言，本專利技術涉及的抗凍蛋白質通過結合到冰結晶的結晶面上而抑制冰結晶的生長。這時，與不存在本專利技術涉及的抗凍蛋白質的情況相比，冰結晶的形狀可能會有變化。另外，該結合通過阻礙自由水進一步結合在冰結晶上，從而抑制冰的結晶化。本專利技術涉及的第一抗凍蛋白質，在pH8. O的條件下，作為通過使用了陰離子交換樹脂的色譜法的吸附級分而獲得。另外，在丙酮濃度30體積％以下，適當地沉淀。在此作為陰離子交換體并無特別限定，例如，可列舉DEAE(二乙氨基乙基)和Q(季銨離子)等。此夕卜，丙酮沉淀的上限濃度優選為80體積％以下，進一步優選60體積％以下，非常優選40體積％以下，最優選30體積％以下。本專利技術涉及的第一抗凍蛋白質，可從植物中獲得。作為植物并無特別限定，例如，可列舉屬于十字花科、傘形科、百合科和菊科的植物。屬于本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：福岡讓一，河原秀久，毛笠秀昭，荒井直樹，友野潤，橫田真一，
申請(專利權)人：株式會社鐘化，
類型：
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。