本發明專利技術涉及一種香菇L952菌種的SSR標記指紋圖譜與應用，該指紋圖譜由7對基于香菇基因組序列開發的SSR標記的特異等位片段組合而成。應用包括：對香菇菌種進行SSR標記擴增，將得到的帶型與指紋圖譜對照，與該指紋圖譜一致即為香菇L952菌種。本發明專利技術與常規形態學檢測、拮抗試驗、出菇試驗相比，具有檢測時間短、準確性高、可重復性好的優點，在收集的我國25個國審的香菇主栽菌種中具有香菇L952菌種的專一性。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于香菇菌種的檢測領域，特別涉及一種香菇L952菌種的SSR標記指紋圖譜與應用。
技術介紹
我國香菇產量已從1983年的I. 95萬噸迅速發展到2005年的242萬噸，占全球香菇總產量的70%以上，改寫了世界食用菌產量的排行榜，并不斷縮小與排行第一的雙孢蘑菇產量差距，有專家預測，由于中國香菇產業的迅猛發展，在近10年內其將成為世界產量 最高的食用菌。中國香菇以其驚人的發展速度，優質的品質及低廉的成本為世界菇業人士矚目，中國香菇已風靡世界。優質菌種在香菇單產和質量中的貢獻率舉足輕重，這決定了香菇菌種在香菇產業中的重要地位。1999年我國簽署了《國際植物新品種保護法》，這不僅要求我們尊重其它國家的品種知識產權，同時也要加強保護我們國家自己的品種知識產權，為了建立食用菌新品種登記制度來真正保護我國的品種產權，必須首先建立成熟的品種鑒定技術，為新品種登記奠定基礎。尤其日本2004年4月I日開始實行《種苗法修正案》，對我國食用菌尤其是香菇的出口構成了極大的威脅。就國內而言，香菇栽培菌種“同種異名，異種同名”的現象，不僅給菇農帶來了極大的損失，影響了他們的栽培積極性，也極大地影響了中國香菇的快速發展；而且，隨著大規模的工廠化栽培方式的出現，對香菇栽培菌株質量的要求越來越高，需要發展更為簡便、快速、準確的菌株鑒定技術，以保證每批次的用種都準確無誤。面對這種局勢，就需要我們進一步加快菌種鑒定技術的研究，在香菇的研究中引進更為有效的菌種鑒定體系。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是提供一種香菇L952菌種的SSR標記指紋圖譜及其構建方法與應用，該指紋圖譜與常規形態學檢測、拮抗試驗、出菇試驗相比，具有檢測時間短，準確性高，重復性好的優點。本專利技術的一種香菇L952菌種的SSR標記指紋圖譜，該指紋圖譜由7對SSR標記組成，是基于香菇基因組簡單重復序列片段開發SSR引物，擴增帶型好，重復性高的SSR引物，標記詳細信息如表I。表ISSR標記詳細信息列表引物名稱擴增的重復序列正/反_引物 Tm(°°)LefpOOO I (CT)7 ACGCGTATCCTCCCCTAAGT7 OU_A AGCG ATATGG ATTTGACGC_Le_fp0002 (CGAQ6GGGCGAAACAAITTCAGGTA/60 —ATGCCATCGTAAGGAACTCGLe fp0()03 (CT)9ATTGTGACTCGACCACCTCC/GU —TCATAATGCATCCCGTGAGAI.e_fp0004 (AGGT)5 CCCAAAAAGGATTTCAGCAA/60 ~AACCGGAGTGGTGTAAGTGCLe_fp0005 (TAC')7tatgiaga(GGAT)6 C ATCAACCAAA(.:CAAGATTC:AA/ 60TTCCAATTTCCTCCGAGTCALefpOOOC (TCA )6CATGGGAGAGATTCGGAAAA/OU —CGAGACCGACGACTTTGACTLe_fp0007 (CTC)6 CATTGCTCGGATCCTTCATT/60 —_TACCTCGTGCGGACTTTGAT_本專利技術的一種香菇L952菌種的SSR標記指紋圖譜的應用，是利用香菇基因組簡單重復序列片段開發的7對SSR引物，通過對收集的25份國審香菇栽培品種的SSR引物帶型擴增，本專利技術確定了 7對SSR引物在香菇L952菌種中擴增出的等位片段的數量并編號(表2)，通過不同SSR等位片段的編號組合可有效識別L952菌種(圖2_8)。通過對照50bpDNAladder可確定各SSR引物擴增的等位片段的相對分子量，存在L952菌種特異SSR等位片段組合的菌種，即是香菇L952菌種，該菌種的編號組合為1 (1+4)12 (1+3)21。表2SSR引物擴增的等位片段信息匯總表 序a—,等位片段編號及其相對于號』丨物福正反向j丨物J 50bp DNA ladder的分子量I~Le_fp0001 ACGCGTATCCTCCCCTAAGT/' HOObp; AAGCGATATGGATTTGACGC2Le_fp0002 GGGCGAAACAi-VTTTCAGGTA/l—290bp: ATGCC ATCGTA AGG A ACTCG2 4^260bp；3Le fp0003 ATTGTGACTCGACCACCTCC/1^900bp； TCATAATGCATCCCGTGAGA4Le_ip0004 CCCAAAAAGGATTTCAGCAA/2—390bp; AACCGGAGTGGTGTAAGTGC5Le_fp0005 CATCAACCAAACCAAGATTCAA/1^720bp； ~TTCCAATTTCCTCCGAGTCA2 3^540bp；6Le_fp0006 C1Ai CiCiCiACiACiAI IXXiCiAAAA/2-^780bp~CGAGACCGACGACTTTGACT7Le_Q)0007 CATTGCTCGGATCCTTCATT/1^700bp；_TACCTCGTGCGGACTTTGAT____3] 有益.效果本專利技術與常規形態學檢測、拮抗試驗、出菇試驗相比，具有檢測時間短，準確性高，重復性好的優點。檢測所需時間只需要3 4天，而常規的拮抗試驗所需時間至少需要兩周時間，出菇試驗則需要至少3個月的時間；該方法在所收集的我國25個通過國審的香菇主栽菌種中具有L952菌種的專一性，具有良好的應用前景。附圖說明圖I為香菇L952菌種SSR標記指紋圖譜，其中M是50bp DNA ladder，數字代表的是所用的7對SSR引物，NC是空白對照，箭頭所指的是香菇L952菌種的特異性SSR等位片段組合；圖2為引物Le_fp0001在所選國審香菇栽培材料中的擴增圖譜；圖3為引物Le_fp0002在所選國審香菇栽培材料中的擴增圖譜；圖4為引物Le_fp0003在所選國審香菇栽培材料中的擴增圖譜；圖5為引物Le_fp0004在所選國審香菇栽培材料中的擴增圖譜；圖6為引物Le_fp0005在所選國審香菇栽培材料中的擴增圖譜； 圖7為引物Le_fp0006在所選國審香菇栽培材料中的擴增圖譜；圖8為引物Le_fp0007在所選國審香菇栽培材料中的擴增圖譜。具體實施例方式下面結合具體實施例，進一步闡述本專利技術。應理解，這些實施例僅用于說明本專利技術而不用于限制本專利技術的范圍。此外應理解，在閱讀了本專利技術講授的內容之后，本領域技術人員可以對本專利技術作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。實施例I(I)菌絲培養將香菇菌種轉接到馬鈴薯葡萄糖培養基中，23°C 25°C下避光搖瓶培養，3cT4d后收集菌絲；(2)基因組DNA的提取用CTAB (十六烷基三甲基溴化銨)法提取上述菌絲的基因組DNA，紫外分光光度法檢測總基因組DNA濃度和純度，調整樣品DNA的濃度一致；CTAB法提取菌絲的基因組DNA工藝包括①將液氮冷凍干燥的香菇菌絲研磨成粉末，加入65°C預熱的2XCTAB抽提液，于65°C保溫45 60min，間或輕搖混勻；②12000rpm、4°C離心 20min,取上清液；③在上述上清液中加入體積比為25 24 1的酚、氯仿和異戊本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種香菇L952菌種的SSR標記指紋圖譜，其特征在于：該指紋圖譜由7對基于香菇基因組序列開發的SSR標記的特異等位片段組合而成，7對SSR標記在香菇L952菌種上擴增的等位片段信息具體為：Le_fp0001的等位片段的數量為1，等位片段1相對于50bp？DNA？ladder的分子量為600bp；Le_fp0002的等位片段的數量為2，等位片段1相對于50bp？DNA？ladder的分子量為290bp，等位片段4相對于50bp？DNA？ladder的分子量為260bp；Le_fp0003的等位片段的數量為1，等位片段1相對于50bp？DNA？ladder的分子量為900bp；Le_fp0004的等位片段的數量為1，等位片段2相對于50bp？DNA？ladder的分子量為390bp；Le_fp0005的等位片段的數量為2，等位片段1相對于50bp？DNA？ladder的分子量為720bp，等位片段3相對于50bp？DNA？ladder的分子量為540bp；Le_fp0006的等位片段的數量為1，等位片段2相對于50bp？DNA？ladder的分子量為780bp；Le_fp0007的等位片段的數量為1，等位片段1相對于50bp？DNA？ladder的分子量為700bp。...
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：尚曉冬，譚琦，宋春艷，鮑大鵬，章爐軍，張丹，楊慧，巫萍，
申請(專利權)人：上海市農業科學院，
類型：發明
國別省市：
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