雞產蛋性狀相關基因—BMP15基因SNP分型試劑盒制造技術

雞產蛋性狀相關基因—BMP15基因SNP分型試劑盒，屬于生物技術領域。其特征是所述的試劑盒由盒體，盒體內的襯墊，襯墊的各孔腔內分別置入的引物混合物P、DNATag酶、擴增緩沖液、dNTP、Buffer和內切酶組成。本實用新型專利技術通過設計特異性引物，PCR擴增和RFLP方法，使得產物更具特異性，保證了SNP分型的準確性。本實用新型專利技術設計合理，使用方便、結果可靠且成本低廉。（*該技術在2022年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本技術屬于生物
，利用PCR-RFLP技術檢測提供一種雞產蛋性狀相關基因一骨形態發生蛋白15 (BMP15)SNP分型的試劑盒。
技術介紹
骨形態發生蛋白15 (bone morphogenetic protein 15, BMP15)是 β -轉化生長因子(TGF-β )超家族的成員之一，是一種在卵巢中優先表達的卵母細胞衍生因子(Ostukaat el 2001)，對卵泡發育、優質卵泡的選擇及排卵等雌性生殖過程的許多環節都起著關鍵作用(Patricia at el 2000 ；Shimasaki at el 2004)。研究表明，BMP15 基因在雞的卵巢 中優先表達，并能啟動信號轉導因子的信息通路，對促性腺激素誘導孕酮生成具有強烈的抑制作用(Elis at el 2007)，說明BMP15基因對雞的產蛋性能起著重要的調控作用。單核苷酸多態性(single nucleotide polymorphism, SNP),作為第三代遺傳標記已得到飛速發展，目前已經有多種發展成熟的檢測技術，如單鏈構象多態性(SSCP)、限制性酶切片段長度多態性(RFLP)、DNA芯片以及Taqman探針等技術手段。限制性片段長度多態性聚合酶鏈反應(PCR-RFLP)技術就是利用PCR擴增目的DNA，擴增產物再用特異性內切酶消化切割成不同大小片段，直接在凝膠電泳上分型。該技術具有特異性高、檢測快速、通用性強、適用范圍廣、成本低廉等特點，目前已成功應用于人類疾病及禽病相關基因分子標記的SNP檢測和基因診斷試劑盒的研發。經過對現有國內外文獻和專利的檢索，至今未見有BMP15基因多態性位點與雞產蛋性狀相關性的報道。
技術實現思路
本技術的目的是為了給雞產蛋性狀相關基因一BMP15基因C397T的檢測提供一種準確性高、快速、價格低廉的基因分型試劑盒。本技術的目的是通過以下技術方案實現的，雞產蛋性狀相關基因一BMP15基因SNP分型試劑盒，其特征是所述的試劑盒由盒體，盒體內的襯墊，襯墊的各孔腔內分別置入的引物混合物P、DNA Tag酶、擴增緩沖液、dNTP、Buffer和內切酶組成。其中引物混合物P詳細信息如下引物混合物P表示用于BMP15基因PCR擴增的上下游引物混合物，引物信息如下上游引物5’GGGTTTTAGCCCTGATCTTGCACTC 3’下游引物5’ATCACCCATTGCCACCACCTTACCT 3，。本試劑盒使用方法I、PCR擴增SNP位點所在片段I) PCR擴增反應體系準備PCR的反應體系為20μ1，其中包括擴增緩沖液(IOXbuffer)2. 5 μ 2. 5mM dNTP2. Ομ 引物P (5uM) μ 模板DNA (約 δΟ ng )IM-I5U/ul TaqO. 5M-I加水補至20μ1在200μ1的PCR薄壁管中，按照以上反應體系加入試劑，充分混勻后短暫離心。2 ) PCR擴增反應程序設置在^pendorf PCR儀上設置如表I所述，程序設置完畢后，將PCR反應管放入PCR儀進行反應擴增。表I PCR擴增反應程序 94!C5分鐘 94;C__IJf_SS1C30秒35循琢 72;C15 秒 72CC10分鐘 4 cC_ 保存_3)反應結束后，取5μ1反應產物在2%瓊脂糖膠，I X TBE中電泳，檢測反應是否成功。2、RFLP酶切并鑒定基因型第一步所得PCR產物取7ul，加入2ullOXbuffer (內切酶配套)，內切酶(Bar I )0. 5ul，超純水10. 5μ1，充分混勻后短暫離心，然后放入37°C水浴鍋中水浴10小時，最后取6ul酶切產物在3%瓊脂糖凝膠，I X TBE中電泳，用凝膠成像分析系統顯像，鑒定基因型。本技術通過設計特異性引物，PCR擴增和RFLP方法，使得產物更具特異性，保證了 SNP分型的準確性。本技術設計合理，使用方便、結果可靠且成本低廉。附圖說明圖I為本技術的結構示意圖。圖2為本技術中BMP15基因PCR產物擴增圖。圖3為本技術BMP15基因PCR產物RFLP分型。圖中I、盒體；2、襯墊；3、引物混合物P ;4、DNA Tag酶；5、擴增緩沖液;6、dNTP ;7、Buffer ;8、內切酶。具體實施方式本技術結合具體實施例和附圖作進一步說明。應理解，這些實施例僅用于說明目的，而不用于限制本技術的范圍。雞產蛋性狀相關基因一BMP15基因SNP分型試劑盒，由盒體，盒體內的襯墊，襯墊的各孔腔內分別置入的引物混合物P、DNA Tag酶、擴增緩沖液、dNTP、Buffer (內切酶緩沖液)和內切酶組成。運用本試劑盒對260只邵伯雞母系母雞BMP15基因C397T SNP位點進行分型。I、樣品采集260只邵伯雞母系母雞的血液，應用傳統的苯酚/氯仿法提取DNA，并將DNA 濃度稀釋到50ng/ μ I。2、PCR擴增反應及結果PCR擴增及檢測結果按照試劑盒使用方法進行 PCR擴增SNP位點所在片段I) PCR擴增反應體系準備PCR的反應體系為20μ1，其中包括擴增緩沖液(IOXbuffer)2. 5μ12. 5mM dNTP2. Ομ 引物P (5uM) μ 模板DNA (約 50 ng ) μ 5U/ul Taq0. 5M-I加水補至20μ1在200μ1的PCR薄壁管中，按照以上反應體系加入試劑，充分混勻后短暫離心。2) PCR擴增反應程序設置在^pendorf PCR儀上設置如表I所述，程序設置完畢后，將PCR反應管放入PCR儀進行反應擴增。表I PCR擴增反應程序權利要求1.一種雞產蛋性狀相關基因一BMP15基因SNP分型試劑盒，其特征是所述的試劑盒由盒體，盒體內的襯墊，襯墊的各孔腔內分別置入的引物混合物P、DNA Tag酶、擴增緩沖液、dNTP、Buffer和內切酶組成。專利摘要雞產蛋性狀相關基因—BMP15基因SNP分型試劑盒，屬于生物
其特征是所述的試劑盒由盒體，盒體內的襯墊，襯墊的各孔腔內分別置入的引物混合物P、DNATag酶、擴增緩沖液、dNTP、Buffer和內切酶組成。本技術通過設計特異性引物，PCR擴增和RFLP方法，使得產物更具特異性，保證了SNP分型的準確性。本技術設計合理，使用方便、結果可靠且成本低廉。文檔編號C12Q1/68GK202671540SQ201220222519公開日2013年1月16日 申請日期2012年5月17日 優先權日2012年5月17日專利技術者黃華云, 黎壽豐, 趙振華, 李春苗 申請人:江蘇省家禽科學研究所本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種雞產蛋性狀相關基因—BMP15基因SNP分型試劑盒，其特征是所述的試劑盒由盒體，盒體內的襯墊，襯墊的各孔腔內分別置入的引物混合物P、DNA？Tag酶、擴增緩沖液、dNTP、Buffer和內切酶組成。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：黃華云，黎壽豐，趙振華，李春苗，
申請(專利權)人：江蘇省家禽科學研究所，
類型：實用新型
國別省市：