本發(fā)明專利技術(shù)提供一種miRNA-539及其反義核苷酸的用途和其藥物組合物，具體為所述miRNA-539反義核苷酸在制備用于預(yù)防或治療心臟疾病的藥物或試劑盒中的用途，所述miRNA-539反義核苷酸的序列為下述SEQ?ID?NO:1所示的核苷酸序列：5’-CCUCUUUAAUAGGAACCACACA-3’，其中每一個(gè)堿基均進(jìn)行了2′-O-甲基修飾；及miRNA-539在制備用于診斷和/或預(yù)后評(píng)估心臟疾病的藥物或試劑盒中的用途。本發(fā)明專利技術(shù)說(shuō)明miRNA-539反義核苷酸通過(guò)抑制心肌細(xì)胞凋亡對(duì)心臟具有保護(hù)作用，miRNA-539反義核苷酸對(duì)許多心臟疾病具有潛在的預(yù)防和治療價(jià)值。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種內(nèi)源性的非編碼小RNAs的新藥用途，尤其涉及miRNA-539及其反義核苷酸在預(yù)防或治療心臟疾病中的用途，屬于心臟疾病的診斷、預(yù)防和治療領(lǐng)域。
技術(shù)介紹
心血管疾病是人類健康和生命的主要威脅，是人類健康的頭號(hào)殺手，全世界范圍內(nèi)每年有一千七百萬(wàn)人死于心血管疾病，其死亡率已接近所有癌癥死亡 率的總和。在我國(guó)，隨著人民生活水平日益提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，心血管疾病死亡率呈明顯上升趨勢(shì)，已超過(guò)癌癥成為第一大致死原因。根據(jù)國(guó)家衛(wèi)生部2004年底公布的最新統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，我國(guó)18歲及以上居民高血壓患病率為18. 8%，估計(jì)全國(guó)患病人數(shù)I. 6億多，由此造成的心肌肥大、心肌梗死、冠心病、以及心力衰竭等凋亡相關(guān)心臟疾病的病人達(dá)幾千萬(wàn)。目前關(guān)于心臟疾病發(fā)病機(jī)理尚不完全清楚，心臟疾病的預(yù)防、診斷和治療尚不能達(dá)到讓人滿意的效果，急需開(kāi)發(fā)新的技術(shù)、方法用于心臟病的診斷、防治。miRNA是新近研究發(fā)現(xiàn)的一類內(nèi)源性非編碼小RNA分子，許多研究表明miRNA對(duì)于維持心臟正常生理功能具有重要作用，心臟中的miRNA異常表達(dá)與許多心臟疾病的發(fā)生相關(guān)。因此，將miRNA作為心臟疾病治療的靶點(diǎn)，開(kāi)發(fā)相關(guān)藥物具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。單一的miRNA可以同時(shí)作用于多個(gè)祀基因的mRNA的表達(dá),這樣藥物作用于一個(gè)miRNA可以調(diào)節(jié)多個(gè)參與心臟發(fā)病基因的表達(dá)，影響多個(gè)信號(hào)通路，從整體上達(dá)到治療疾病的目的。由于miRNA在心臟病理狀態(tài)下表達(dá)水平不同，因此可以通過(guò)檢測(cè)miRNA的表達(dá)水平來(lái)預(yù)測(cè)診斷疾病。細(xì)胞凋亡(apoptosis)，又稱程序性細(xì)胞死亡，是指細(xì)胞在一定的生理或病理?xiàng)l件下，遵循自身的程序，自己結(jié)束生命的過(guò)程。它是一個(gè)主動(dòng)的、高度有序的、由基因控制及一系列酶參與的過(guò)程，對(duì)正常胚胎發(fā)育，維持細(xì)胞群體及惡性病變過(guò)程中均起重要作用，在保證多細(xì)胞生物的健康生存過(guò)程中扮演著關(guān)鍵的角色。在許多心肌損傷或心臟病理狀態(tài)下，如心肌缺血再灌注損傷、心肌肥大、心力衰竭等，心肌細(xì)胞會(huì)發(fā)生凋亡。由于成熟的心肌細(xì)胞不能分裂增殖，心肌細(xì)胞過(guò)度凋亡必然會(huì)使心肌細(xì)胞數(shù)目減少，這一點(diǎn)可能是一些心臟疾病發(fā)病的機(jī)理。目前研究發(fā)現(xiàn)許多miRNA通過(guò)調(diào)控凋亡相關(guān)靶蛋白的表達(dá)參與細(xì)胞凋亡的發(fā)生，這些miRNA有促凋亡的，也有抑凋亡的。尋找心臟中特異表達(dá)的、參與心肌細(xì)胞凋亡的miRNA，闡明其作用機(jī)理，對(duì)于開(kāi)發(fā)以miRNA為策略的心臟疾病的診斷、治療具有及其重要的意義和應(yīng)用前景。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
因此，本專利技術(shù)的目的是確定或發(fā)現(xiàn)調(diào)控心肌細(xì)胞凋亡的心臟特異性性表達(dá)的miRNA，進(jìn)一步確定其在心肌缺血再灌、心肌梗死、冠心病、心肌肥大和心肌纖維化等心臟疾病中的關(guān)鍵作用，將其應(yīng)用到這些心臟疾病的診斷、防治中。針對(duì)上述目的，本專利技術(shù)的技術(shù)方案如下一方面，本專利技術(shù)提供一種miRNA-539反義核苷酸，所述反義核苷酸的序列為下述SEQ ID NO: I所示的核苷酸序列5 ’ -CCUCUUUAAUAGGAACCACACA-3 ’，其中每一個(gè)堿基均進(jìn)行了 2' -O-甲基修飾。又一方面，本專利技術(shù)提供本專利技術(shù)所述的miRNA-539反義核苷酸在制備用于預(yù)防或治療心臟疾病的藥物或試劑盒中的用途。還一方面，本專利技術(shù)提供一種miRNA-539在制備用于診斷和/或預(yù)后評(píng)估心臟疾病的藥物或試劑盒中的用途，所述miRNA-539的序列為下述SEQ ID NO: 2所示的核苷酸序列5，-UGUGUGGUUCCUAUUAAAGAGG-3，。優(yōu)選地，所述心臟疾病選自肌梗死、心肌缺血損傷、心肌肥大和心肌纖維化中的一種或多種。另一方面，本專利技術(shù)提供一種用于預(yù)防或治療心臟疾病的藥物組合物，所述藥物組合物含有本專利技術(shù)所述的miRNA-539反義核苷酸和藥學(xué)上可接受的載體、病毒或輔料。優(yōu)選地，所述miRNA-539反義核苷酸的含量為O. 5 lg/ml。優(yōu)選地，所述載體選自殼聚糖、膽固醇、納米顆粒和脂質(zhì)體中的一種或多種。優(yōu)選地，所述藥物組合物以口服或注射方式給藥。優(yōu)選地，所述注射為靜脈注射、肌肉注射、冠狀動(dòng)脈內(nèi)注射或直接心肌注射。再一方面，本專利技術(shù)提供一種用于預(yù)防或治療心臟疾病的心臟疾病的試劑盒，所述試劑盒含有本專利技術(shù)所述的miRNA-539反義核苷酸。還一方面，本專利技術(shù)提供一種用于診斷和/或預(yù)后評(píng)估心臟疾病的試劑盒，所述試劑盒含有miRNA-539核苷酸或用于特異性檢測(cè)miRNA-539的探針或引物；所述miRNA-539的序列為下述SEQ ID NO: 2所示的核苷酸序列5，-腳⑶G⑶UCCUAUUAAAGAGG-3，；所述探針或引物為SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列。優(yōu)選地，所述心臟疾病選自肌梗死、心肌缺血損傷、心肌肥大和心肌纖維化中的一種或多種。本專利技術(shù)通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)miRNA-539在心肌缺血損傷及缺氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡過(guò)程中miRNA-539表達(dá)顯著上調(diào)。通過(guò)轉(zhuǎn)染和注射miRNA-539反義核苷酸抑制miRNA-539的表達(dá)可以抑制心肌細(xì)胞凋亡及心肌缺血損傷，心肌梗死面積減少。以上實(shí)驗(yàn)說(shuō)明miRNA-539反義核苷酸通過(guò)抑制心肌細(xì)胞凋亡對(duì)心臟具有保護(hù)作用，miRNA-539反義核苷酸對(duì)許多心臟疾病具有潛在的預(yù)防和治療價(jià)值。而給予miRNA-539升高miRNA-539的表達(dá)則可以誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，心肌缺血損傷會(huì)更加嚴(yán)重。具體的，本專利技術(shù)人發(fā)現(xiàn)miRNA-539 反義核苷酸(5’ -CCUCUUUAAUAGGAACCACACA-3’ )通過(guò)抑制心肌細(xì)胞凋亡對(duì)心臟具有保護(hù)作用。心肌細(xì)胞缺氧或心肌缺血損傷過(guò)程miRNA-539表達(dá)顯著上調(diào)，miRNA-539的上調(diào)可能誘導(dǎo)了心肌細(xì)胞凋亡的發(fā)生。miRNA-539在缺血再灌注動(dòng)物模型的心肌組織中表達(dá)上調(diào)，miRNA-539可作為診斷心臟病的標(biāo)志，抑制內(nèi)源性的miRNA-539小鼠，可以抵抗心肌缺血再灌注損傷，心肌梗死面積減少，心功能顯著改善。將miRNA-539反義核苷酸與適當(dāng)?shù)妮d體結(jié)合形成藥物,導(dǎo)入心臟或體內(nèi)，對(duì)許多心臟疾病將具有預(yù)防及治療作用。可以考慮將miRNA-539反義核苷酸與殼聚糖、膽固醇、脂質(zhì)體、納米顆粒等包裝形成藥物分子，通過(guò)口服、靜脈注射、肌肉注射、冠狀動(dòng)脈內(nèi)注射或直接心肌注射的方式，用于防治心臟疾病、改善心臟功能、阻止心肌纖維化及心肌重構(gòu)的發(fā)生。附圖說(shuō)明以下，結(jié)合附圖來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本專利技術(shù)的實(shí)施方案，其中圖I表明心肌缺血損傷及缺氧處理(Anoxia)的心肌細(xì)胞凋亡過(guò)程中miRNA-539表達(dá)水平的變化，其中圖IA表明原代心肌細(xì)胞缺氧處理miRNA-539表達(dá)水平，其中縱坐標(biāo)表示以O(shè)分鐘的miRNA-539表達(dá)量為基準(zhǔn)，在心肌缺血損傷及缺氧處理過(guò)程中不同時(shí)間下miRNA-539的表達(dá)量；圖IB表明小鼠心肌缺血損傷miRNA-539表達(dá)水平，其中縱坐標(biāo)表示以O(shè)分鐘的miRNA-539表達(dá)量為基準(zhǔn)，在心肌缺血損傷及缺氧處理過(guò)程中不同時(shí)間下miRNA-539的表達(dá)量；圖2表明抑制內(nèi)源性的miRNA-539對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的抵抗作用，其中圖2A表示原代心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)染miRNA-539反義核苷酸(anta_539)抑制內(nèi)源性的miRNA-539的表達(dá)；圖2B 表示對(duì)缺氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡的影響，轉(zhuǎn)染NC作為陰性對(duì)照，其中縱坐標(biāo)表示，在心肌細(xì)胞凋亡過(guò)程中以未加任本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種miRNA？539反義核苷酸，所述反義核苷酸的序列為下述SEQ？ID？NO:1所示的核苷酸序列：5’？CCUCUUUAAUAGGAACCACACA？3’，其中每一個(gè)堿基均進(jìn)行了2′？O？甲基修飾。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李培峰，王昆，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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