利用抗體使人類紅細胞功能化的方法技術

本發明專利技術涉及功能化更密集的指示細胞的制備，通過使用具有比常規D抗原更高的表達程度的A、B、AB和MNS抗原來標記帶有IgG的指示細胞，可以使用所述指示細胞與其他組分一起來檢測抗體或抗原的存在或不存在。本發明專利技術抗原系統具有接近100萬抗原/細胞的表達水平，這與約10,000至30,000抗原/細胞的常規D抗原位點形成鮮明的對照。抗原系統表達水平中的這種顯著增加在指示細胞和固相的結合的動力學和量級中能夠形成加強，這改善了測定法的效率。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及用于利用抗體使人類紅細胞(red blood cell, RBC)功能化的方法和裝置，并且在固相抗體篩查測定法的背景中是相關的。本專利技術制備出功能化更密集的指示細胞，通過靶向具有比常用的D抗原的表達程度更高的A、B、AB和麗S抗原，可以使用所述指示細胞與其他組分一起來檢測抗體或抗原的存在或不存在。而且，本專利技術可以延及希望檢測特異性結合的免疫球蛋白的任意免疫測定。
技術介紹
常規的固相抗體篩查測定法通過借助于粘附或凝聚至特異性地結合到例如固相上的免疫球蛋白的抗-IgG包被紅細胞來檢測IgG抗體。例如參見授予Sinor等的美國專利 4，816，413。常規的固相抗體篩查測定法通常借助于使用單克隆或多克隆抗-D抗體11初敏人類紅細胞10(0+血型)而產生的指示劑。如果D抗原12存在于紅細胞10上，則由于紅細胞10的敏化發生而使用D抗原12。然后將IgG敏化細胞暴露于抗-IgG，使得細胞10呈抗-IgG包被。通常使用D抗原12的原因是高親和抗-D抗體11的可用性。但是，D抗原12的表達不高(10，000至30，000抗原12/細胞10)。在固相幾何學中，細胞10和平坦表面之間的相互作用區域可能會限制相互作用的區域，使得只有10至100個抗-IgG分子與底物相互作用。這種限制可能會強烈影響這些指示細胞與固相的結合的動力學和量級。因此，需要制備可以用來檢測抗體或抗原存在或不存在的功能化更密集的指示細胞的方法和裝置。
技術實現思路
本專利技術涉及功能化更密集的指示細胞的制備，所述指示細胞可以通過利用表達程度比D抗原更高的A、B、AB和MNS抗原而被用來檢測抗體或抗原的存在或不存在。這些抗原系統具有接近100萬抗原/細胞的表達水平，這與10，000至30，000抗原/細胞的常規D抗原位點形成非常鮮明的對比。抗原系統表達水平的這種顯著增加是出乎預料的，在指示細胞和固相的結合的動力學和量級中能夠形成加強(boost)，這影響測定法的效率(例如靈敏性、檢測時間等)。在本專利技術的一個例示性實施方式中，可以使用柱親和純化法(即免疫親和純化法)來純化(具有高的親和性和濃度的)抗-A抗體。在該實施方式中，將帶有胺柄(aminehandle)的合成A抗原包被在可商購獲得的親和柱上。然后將來自具有血型B的人類供體的源血漿暴露于所述親和柱，其中抗-A抗體附接在固體支持物上的A抗原上。然后從親和柱上將抗-A抗體洗脫，并且可以再通過已知的沉淀或親和技術進一步純化抗-A抗體。然后將(具有A抗原的)血型A紅細胞暴露于這種純化產物(即IgG)，并且該純化的抗-AIgG抗體結合至紅細胞并且包被紅細胞。由于抗-IgG抗體對IgG抗體具有特異性，因此它們附接至IgG抗體(部分或全部包被它們)。于是制得功能化更密集的指示細胞，通過利用A、B、AB和MNS抗原，可以使用該指示細胞與其他組分一起來檢測抗體或抗原的存在或不存在。在本專利技術的另一個例示性實施方式中，由于人類紅細胞具有眾多的抗原系統，因此可以同時靶向多個抗原系統以增加IgG包層的密度。在另一個例示性實施方式中，本專利技術降低了對洗滌循環的約束。為了確保抗-IgG抗體不被殘留IgG抗體所飽和，選擇高表達的抗原系統，使得即使一定量的抗-IgG被飽和(并且因此使得其不具有活性)，仍保留足夠數量的抗-IgG，從而可以檢測特異性結合。在另一個例示性實施方式中，將血漿、蛋白等導入到固相系統，并在37°C溫育。使用帶有已知抗原譜系的人類紅細胞包被固相底物。對存在于固相上的抗原中的一種抗原(例如Kell血型的K抗原)具有特異性的存在于檢測血漿中的抗體(在該情況中為IgG類)將變得特異性地結合至底物上的紅細胞。然后使用溶液洗滌該系統以移除未結合的蛋白。導入具有很多結合位點的指示紅細胞(上面包被有抗-IgG抗體的探針紅細胞)，并且抗-IgG抗體(預包被在指示劑上或者只是添加有IgG包被指示劑)結合至底物上的紅細胞上的IgG。本專利技術還可以在溶液中使用，其中尋查凝集以確定是否存在結合。至此，概述了根據本專利技術的一些特征，以便可以更好地理解本專利技術隨后的具體實 施方式，以及以便更好地認識到本專利技術對現有技術的貢獻。當然，還有將在下文進行說明的并且將形成本專利技術所附權利要求書的主題的根據本專利技術的其他特征。在這一方面，在詳細解釋根據本專利技術的至少一個實施方式之前要理解的是，本專利技術不限于其在下文描述給出的或者在附圖中示出的構成細節和組分配置中的應用。符合本專利技術的方法和裝置能夠成為其他實施方式，并且以各種方式實踐和實施。同樣要理解的是，本文中使用的措辭和術語以及所包括的摘要僅出于說明目的，不應被看作是對本專利技術的限制。同樣，本領域的技術人員應當理解的是，本公開內容所根據的構想可以容易被用作設計用于實現本專利技術的若干目的的其他結構、方法和系統的基礎。因此重要的是，權利要求書應當被看作包括這種等同結構，只要它們不偏離根據本專利技術的方法和裝置的實質和范圍。附圖說明圖Ia顯示一種常規方法，其中，抗原系統使用D抗原。圖Ib顯示根據本專利技術的一個實施方式，其中，抗原系統使用A、B、AB和MNS抗原。圖2(a)至(e)顯示根據本專利技術的一個實施方式，其中，在從血漿中純化抗體時使用免疫親和色譜法。該方法使用A、B、AB和MNS抗原。圖3(a)至(C)顯示根據本專利技術的另一個實施方式，其中，將血漿、蛋白等導入固相系統，并使用帶有已知抗原譜系的人類紅細胞包被底物。帶有抗-IgG抗體的指示紅細胞結合至底物上的紅細胞上的IgG。具體實施例方式在本專利技術中，本專利技術人著眼于存在高表達水平的抗原系統，以制備功能化更密集的指示細胞，所述指示細胞能夠用于指示特定抗體或抗原的存在或不存在，這是因為使用具有顯著高于常用的抗原D的表達程度的A、B、AB和MNS抗原的緣故。本專利技術的這種抗原系統可以包括A、B、AB抗原或麗S抗原。如本領域的技術人員應當知道的，ABO血型系統是最重要的人類血型系統，并且包括血型A、B、AB和O。ABO抗原在主要附接于條帶3蛋白上的聚乳糖胺(polyactosamine)長鏈的末端上表達,紅細胞(RBC)膜的陰離子交換器和少量的表位表達在中性鞘糖脂上。 MNS抗原系統是基于染色體4上的血型糖蛋白A和B基因的人類血型系統。46個抗原中最重要的是M、N、S、s和U抗原。本專利技術的抗原系統(其中例如有對抗-A 13等抗體具有高親和力(見圖Ib))具有接近100萬抗原/紅細胞10的顯著表達水平(具有將IgG位點的數量提高100倍的潛力)。因此，約100萬抗原14的A抗原位點/紅細胞10與約10，000至30，000抗原12的常規D抗原位點/細胞10形成鮮明的對比(見圖Ia)。抗原系統表達水平中的這種顯著增加在指示細胞和固相的結合的動力學和量級上可以形成加強，這能夠改善測定法的效率。在本專利技術的一個例示性實施方式中，(具有高親和力和濃度的)抗-A抗體可以如圖2所示使用柱親和純化法(即，免疫親和色譜法)進行純化。在免疫親和色譜法中，可以通過柱色譜法實現與固相的結合，由此將固體介質填充至柱15，使初始混合物16通過柱15以允許固定(圖2(a))，使洗滌緩沖液17通過柱15(圖2(b))，并且隨后使洗脫緩沖液18施加至柱15(圖2(c))并收集。這些步驟通常在常壓下進行。在該程序本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：克里斯托弗·克努特松，德里克·戴維·多爾內維爾德，
申請(專利權)人：阿爾利克斯公司，
類型：
國別省市：