黃尾密鲴與翹嘴紅鲌亞科間遠緣雜交的方法技術

本發明專利技術公開了一種黃尾密鲴與翹嘴紅鲌亞科間遠緣雜交的方法，包括以下步驟：以黃尾密鲴作為母本親魚，以翹嘴紅鲌作為父本親魚，先對母本親魚和父本親魚進行人工催產，對催產效果良好的母本親魚和父本親魚進行人工干法授精，授精后在培養皿中流水孵化，待魚苗孵化完成后進行飼養，飼養后經檢測獲得黃尾密鲴和翹嘴紅鲌的雜交后代。本發明專利技術的遠緣雜交方法具有步驟簡單、操作方便、受精率和孵化率高、后代性狀優良等優點。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種魚類亞科間遠緣雜交的方法，尤其涉及一種黃尾密鲴與翹嘴紅舶亞科間的遠緣雜交方法。
技術介紹
魚類遠緣雜交是兩種不同種魚類之間的雜交，可以是同屬魚不同種魚類的雜交、也可以是不同屬間、不同亞科間、不同科間甚至不同目間魚類個體之間的雜交。雜交能整合雙親的優點，使雜交后代在外形、生長速度、存活率以及抗病能力等方面均表現出雜種優勢，是一種重要的魚類遺傳育種和性狀改良方法。黃尾密鲴(Jenocypris davidiBleeker )屬于鯉科、鲴亞科中的二倍體魚(2n=48)，具有肉質好、食性廣等優點，翹嘴紅舶{Erythrocul ter iIishaeformis Bleeker )屬于鯉科、舶亞科中的二倍體魚(2n=48 ),為大型淡水經濟魚類，具有生長迅速、耐低氧、適應性與抗病力極強等優點。這兩種魚在分類、體·形等生物學特性方面存在較大差異，因此這二者間的遠緣雜交存在較大困難。如何利用并改進現有的生物學技術以成功獲得具有優良性狀的新型雜交魚已成為科學研究工作者長期面臨和亟待解決的問題。
技術實現思路
本專利技術要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種步驟簡單、操作方便、受精率和孵化率高、后代性狀優良的黃尾密鲴與翹嘴紅舶亞科間遠緣雜交的方法。為解決上述技術問題，本專利技術提出的技術方案為一種黃尾密鲴與翹嘴紅舶亞科間遠緣雜交的方法，包括以下步驟以雌性黃尾密鲴作為母本親魚，以雄性翹嘴紅舶作為父本親魚，先對所述母本親魚和父本親魚進行人工催產，對催產效果良好的母本親魚和父本親魚進行人工干法授精，授精后在培養皿中流水孵化，待魚苗孵化完成后進行飼養，飼養后經檢測獲得黃尾密鲴和翹嘴紅舶的雜交后代。該雜交后代為黃尾密鲴與翹嘴紅舶亞科間遠緣雜交F1代(簡稱鲴舶F1代)，具有較高受精率、孵化率和存活率；通過進一步利用流式細胞DNA含量檢測技術、外周血細胞染色體制備方法對鲴舶F1代進行檢測，確證獲得黃尾密鲴與翹嘴紅舶亞科間遠緣雜交二倍體鲴舶F1代，這為后續鲴舶的遺傳育種奠定了基礎。上述的黃尾密鲴與翹嘴紅舶亞科間遠緣雜交的方法，所述人工催產的具體操作優選包括在每年6月下旬(即黃尾密鲴與翹嘴紅舶繁殖季節的交叉時間)，選取兩齡以上、性成熟特征明顯、體征良好的雌性黃尾密鲴和雄性翹嘴紅舶，首先為雌性黃尾密鲴注射黃體素釋放激素類似物(LRH-A)與絨毛膜促性腺激素(HCG)的混合催產劑進行催產，黃體素釋放激素類似物的用量為20 μ g/kg，絨毛膜促性腺激素的用量為1500IU/kg ;經過4h 5h后再對雄性翹嘴紅舶進行注射；雄性翹嘴紅舶的注射劑量相比雌性黃尾密鲴減半；注射后按I (2 3)的數量比將雌性黃尾密鲴、雄性翹嘴紅舶放入同一產卵池中，直至催產完成。上述的黃尾密鲴與翹嘴紅舶亞科間遠緣雜交的方法，所述流水孵化的具體操作優選包括挑選產卵量大、產卵質量高的母本親魚和產精量大的父本親魚進行人工干法授精后，將人工干法授精后的受精卵均勻鋪于培養皿(例如直徑為22cm的玻璃培養皿)中進行流水孵化，每個培養皿中受精卵的卵粒數目控制為1500 2000，水溫保持在22°C 26°C。上述的黃尾密鲴與翹嘴紅舶亞科間遠緣雜交的方法，所述飼養的具體操作優選包括待魚苗全部孵出后，先于清水箱中培育I 2天，期間定時換水，待魚苗出現腰點、開始平游后，將魚苗轉入預先培肥的池塘中飼養，3 4天后潑灑豆漿，2 3次/天，沿池潑灑，直至魚苗長成。上述的黃尾密鲴與翹嘴紅舶亞科間遠緣雜交的方法，所述檢測優選是采用外周血細胞培養染色體制備方法(外周血細胞培養法)、流式細胞DNA含量測定法(流式細胞測定法)對雜交后代進行染色體數目、DNA含量的檢測。與現有技術相比，本專利技術的優點在于本專利技術通過反復試驗最終選擇黃尾密鲴作為母本、選擇翹嘴紅舶作為父本，進行亞科間的遠緣雜交，最終成功獲得了一種在外形、生長速度、存活率以及抗病能力等方面均表現出雜種優勢的二倍體鲴舶。比較同類試驗，黃尾密鲴與翹嘴紅舶間雜交的受精率和孵化率都得到了明顯提高，可以穩定重復獲得大量雜交 后代，雜交F1代性狀整齊一致。同時，遠緣雜交整合了黃尾密鲴和翹嘴紅舶的優點，在同等條件下，雜交后代相對其父母本在外形、生長速度、存活率以及抗病能力等方面均表現出雜種優勢。另外，以本專利技術的遠緣雜交方法為基礎，還有望通過多代選育從二倍體鲴舶中獲得四倍體鲴舶群體。已有的研究表明，在紅鯽(2n=100，早)X湘江野鯉(2n = 100， )的雜交后代中，F1 - F2為二倍體(2η=100)，而在二倍體F2個體中存在能分別產生二倍體卵子和二倍體精子的雌、雄個體，二倍體卵子和二倍體精子結合，形成了兩性可育的四倍體魚F3(4η= 200)。目前四倍體鯽鯉已連續繁殖了 20代(F3-F22)，形成了一個遺傳性狀穩定的四倍體魚群體。據此，本專利技術二倍體鲴舶的獲得在魚類育種和生物進化方面具有重要意義。附圖說明圖I為本專利技術實施例中黃尾密鲴(早)X翹嘴紅舶U )后代的外形照片。圖2為本專利技術實施例中黃尾密鲴(早)X翹嘴紅舶U)后代的染色體圖(2η=48)。圖3為本專利技術實施例中測得的紅鯽的DNA含量圖。圖4為本專利技術實施例中測得的黃尾密鲴(早)X翹嘴紅舶U )后代的DNA含量圖。具體實施例方式以下結合說明書附圖和具體優選的實施例對本專利技術作進一步描述，但并不因此而限制本專利技術的保護范圍。實施例 一種本專利技術的黃尾密鲴與翹嘴紅舶亞科間遠緣雜交的方法，具體包括以下步驟 I.人工催產以雌性黃尾密鲴作為母本親魚，以雄性翹嘴紅舶作為父本親魚，在每年6月下旬，選取兩齡以上、性成熟特征明顯、體征良好的雌性黃尾密鲴和雄性翹嘴紅舶進行催產。先為母本親魚注射黃體素釋放激素類似物(LRH-A)與絨毛膜促性腺激素(HCG)的混合催產劑進行催產，LRH-A的注射用量為20 μ g/kg, HCG的注射用量為1500IU/kg，采用胸鰭基部凹陷無鱗處傾斜45°胸腔注射；經4h 5h后再注射父本親魚，父本親魚的注射劑量相比母本親魚減半，注射方法同母本親魚；注射后按I : (2 3)的數量比將母本親魚、父本親魚放入同一產卵池中，活水刺激，在繁殖前3h 4h停止加水，讓魚在靜水中催產。2.人工干法授精和孵化當發現產卵池內的親魚出現相互追逐的現象時，開始拉網打撈親魚進行檢測(注意要用軟質網，操作要輕，水中檢測)，挑選產卵量大、產卵質量高的母本親魚和產精量大的父本親魚進行人工干法授精，把精卵擠入干凈的瓷盆中，用干凈的羽毛迅速不停地攪拌，然后將受精卵均勻鋪于直徑為22cm的玻璃培養皿中進行流水孵化，每個培養皿中的卵粒數目為1500 2000，水溫保持在22°C 26°C。3.飼養魚苗全部孵出后，先于清水箱中培育I 2天，在這期間定時換水，待魚苗出現腰點、開始平游后將魚苗轉入預先培肥的池塘中飼養，3 4天后潑灑豆漿，2 3次/天，沿池潑灑，直至魚苗長成。孵化期間進行人工計數，統計胚胎的受精率和孵化率。本實施例中，黃尾密鲴與翹嘴紅舶雜交魚的受精率和孵化率分別為85%和77%，與同類雜交試驗相比，其受精率和孵化率得到了顯著地提高。 隨機選取在相同條件下培育兩年齡的黃尾密鲴、翹嘴紅舶和二倍體鲴舶(二倍體鲴舶的外形照片參見圖I);對它們的外部形態特征進行檢測，包括背鰭條、腹鰭條、臀鰭本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種黃尾密鲴與翹嘴紅鲌亞科間遠緣雜交的方法，包括以下步驟：以黃尾密鲴作為母本親魚，以翹嘴紅鲌作為父本親魚，先對所述母本親魚和父本親魚進行人工催產，對催產效果良好的母本親魚和父本親魚進行人工干法授精，授精后在培養皿中流水孵化，待魚苗孵化完成后進行飼養，飼養后經檢測獲得黃尾密鲴和翹嘴紅鲌的雜交后代。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：劉少軍，肖軍，陶敏，張純，羅凱坤，劉筠，謝麗華，
申請(專利權)人：湖南師范大學，
類型：發明
國別省市：