5’-AMP用于治療敗血癥的用途制造技術

本發明專利技術公開了一種5’-AMP在制備用于治療或預防敗血癥的藥物中的用途。有關試驗證明了5’-AMP用于治療敗血癥一是能夠顯著降低敗血癥中炎癥因子表達水平并能升高抗炎因子表達水平，二是能夠顯著降低敗血癥肺組織炎癥細胞的浸潤。5’-AMP作為注射用藥治療敗血癥，對動物無明顯損害，未發現有不良副作用，是一種安全可靠的能夠用于治療敗血癥的藥物。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及5’ -AMP用于治療疾病的新用途，具體地說是涉及5’ -AMP用于治療敗血癥的用途。
技術介紹
敗血癥系指致病菌或條件致病菌侵入血循環，并在血中生長繁殖，產生毒素而發生的急性全身性感染。大多起病急驟，先有畏寒或寒戰，繼之高熱，熱型不定，弛張熱或稽留熱；體弱、重癥營養不良和小嬰兒可無發熱，甚至體溫低于正常。患者精神萎靡或煩躁不安，嚴重者可出現面色蒼白或青灰，神志不清，四肢末梢厥冷，呼吸急促，心率加快，血壓下降，嬰幼兒還可出現黃疸。·脂多糖(LPS)是革蘭氏陰性細菌細胞外膜的一種主要成分，當LPS進入血液循環后，會結合LPS結合蛋白，這有助于將LPS轉移到兩者的共受體CD14上，最終導致Toll樣受體 4 (Toll like receptor 4，TLR4)的形成，從而激活 ERK、JNK、p38 以及 IKK-NF-kB 等信號途徑，最終導致炎癥的發生。大量研究證實,輕度低溫(Mild hypothermia)又稱為亞低溫,其在腦缺血等疾病的發生發展過程中有明顯的治療作用，主要通過降低代謝反應、酶活性以及炎癥反應等發揮作用。臨床上較為常見的急性腦血管病腦缺血，缺血后造成局部過度的炎癥反應是腦缺血性損傷的主要原因之一。研究顯示，輕度低溫可以通過下調粘附分子的表達而降低血管內白細胞的遷移及浸潤到腦局部缺血部位，最終抑制腦缺血性損傷導致的炎癥反應。同時，輕度低溫也可以通過抑制炎癥通路中的NFk B激酶的激活而降低炎癥反應。NFk B是炎癥反應中最重要的調控因子之一，介導多種信號引起的炎癥反應，包括炎癥因子、細菌及病毒產物、缺氧再充氧以及輻射等，同時其也是基因誘導性表達的重要調控因子之一，包括免疫、細胞粘附、細胞生長、死亡等。NFk B也激活許多基因，參與到缺血性損傷的急性期及其導致的炎癥反應，比如誘生型一氧化氮合酶、IL-I β、TNF-α、胞間粘附分子(ICAM-1 )、環氧合酶以及IL-6等。輕度低溫能夠抑制中風導致的炎癥反應中NF K B信號通路，降低了 NF K B的轉運及結合活性，同時也通過抑制NF K B抑制蛋白(I K B- α )及I K B激酶降低IKK活性來影響NF K B調節蛋白的水平。另外，低溫能抑制兩種NF K B靶基因的表達誘生型一氧化氮合酶及TNF-α的表達。5’ -AMP是5’ -腺苷酸的英文別名，其中文別名還有如腺苷-5’ -磷酸(+4°C)、腺苷5’ -磷酸、5’ -磷酸腺苷、5’ -腺苷-磷酸等，至今并未發現有關5’ -AMP用于治療敗血癥的用途的報道。
技術實現思路
本專利技術在于提供5’ -AMP用于治療疾病的一種新用途。其技術解決方案是5’ -AMP在制備用于治療或預防敗血癥的藥物中的用途。5’ -AMP應用在用于能降低敗血癥炎癥因子表達水平并升高抗炎因子表達水平的藥物。5’ -AMP應用在用于能降低敗血癥肺組織炎癥細胞浸潤的藥物。本專利技術5’ -AMP在制備用于治療敗血癥的藥物中的用途，其有益技術效果如下證明了 5’ -AMP用于治療敗血癥一是能夠顯著降低敗血癥中炎癥因子表達水平并能升高抗炎因子表達水平，二是能夠顯著降低敗血癥肺組織炎癥細胞的浸潤。5’-AMP作為注射用藥治療敗血癥，對動物無明顯損害，未發現有不良副作用，是一種安全可靠的能夠用于治療敗血癥的藥物。附圖說明 下面結合附圖與具體實施方式對本專利技術作進一步說明圖I 圖4為開展本專利技術實驗過程中大鼠分別應用5’ -AMP在治療及預防兩個方面對敗血癥干預后，血漿中相關炎癥因子或抗炎因子表達水平的變化；其中，圖I為TNF-α炎癥因子表達水平的變化，圖2為IL-I β炎癥因子表達水平的變化，圖3為IL-6炎癥因子表達水平的變化，圖4為IL-10抗炎因子表達水平的變化；圖5 圖8為開展本專利技術實驗過程中大鼠分別應用5’ -AMP在治療及預防兩個方面對敗血癥干預后，腹水中相關炎癥因子或抗炎因子表達水平的變化；其中，圖5為TNF-a炎癥因子表達水平的變化，圖6為IL-I β炎癥因子表達水平的變化，圖7為IL-6炎癥因子表達水平的變化，圖8為IL-10抗炎因子表達水平的變化；圖9示出開展本專利技術實驗過程中大鼠分別應用5’ -AMP在治療及預防兩個方面對敗血癥干預后，肺組織病理變化；其中，圖9Α為對照組，圖9Β為LPS組，圖9C為治療組，圖9D為預防組。具體實施例方式本專利技術應用5’ -AMP誘導低溫治療敗血癥，通過觀察炎癥因子表達水平以及炎癥細胞的浸潤，為臨床上針對敗血癥新藥研發提供可能的理論指導和依據。內容與要求應用大鼠敗血癥動物模型、病理切片Η&Ε染色等技術方法首次將低溫應用于敗血癥的研究，ELISA檢測炎癥因子、抗炎因子表達水平，肺組織進行常規病理分析。技術指標I、對照組大鼠不進行注射處理。LPS組大鼠腹腔僅注射LPS。預防組大鼠腹腔注射5’ -AMP, Ih后腹腔注射LPS。治療組大鼠腹腔注射LPS，待其體溫升高O. 5°C后，腹腔再注射5’ -AMP。分別收集各組中大鼠的血漿及腹水，經ELISA檢測，結果顯示，5’-AMP無論是在治療還是預防方面都能顯著的降低敗血癥炎癥因子的表達水平并升高抗炎因子的表達水平，參見圖I 圖8。2、將敗血癥大鼠動物模型經5’ -AMP誘導的低溫干預后，取肺組織進行常規病理分析(H&E染色)，結果證實5’ -AMP誘導的低溫干預能明顯抑制炎癥細胞的浸潤，參見圖9。具體試驗步驟為I)選取雄性wistar大鼠，體重200g左右，剃毛機去毛。2)預防組腹腔注射5’ -AMP,劑量按每千克體重選用O. 5克5’ -AMP的比例計算，將大鼠置于已達到4度的人工氣候箱內。3)每隔Ih檢測一次大鼠肛溫，測量一次關節腔周徑，待其體溫達到16度左右(大約注射5’ -AMP兩個小時后)，調節人工氣候箱，使其溫度達到16度，同時將制備好的LPS，注射入大鼠腹腔內(劑量為每千克體重5mg)。4)治療組腹腔注射LPS (劑量為每千克體重5mg)，待其肛溫升高O. 5°C后，腹腔 注射5’ -AMP,置于人工氣候箱內，調節人工氣候箱，使其溫度達到16度。5)分別在注射LPS后3h，6h和12h眼靜脈叢取血以及腹腔收集腹水，ELISA檢測炎癥因子的表達水平。并在LPS注射后12h將大鼠處死，取肺組織進行常規病理分析(H&E染色)。6)標本固定后進行脫水處理，分別經過80%、90%、95%、100%等濃度的乙醇兩小時。7)標本脫水后，利用石蠟進行包埋，使液體石蠟浸入組織中，石蠟凝固后，組織即被包在其中。8)將切片機厚度調節器4_6um，將包埋好的蠟塊進行切片。9)鋪片用眼科鑷子鑷起蠟帶輕輕平鋪在40_45°C的水面上，借水的張力和水的溫度，將略皺的蠟帶自然展平。10)貼片、烘片待切片在恒溫水面上充分展平后，將蠟片撈到載玻片的中段處，置于60-65°C恒溫箱內烤片15-30分鐘，脫去融化組織間隙的石蠟。11)將處理好的標本用蘇木素-伊紅染色。經試驗驗證，應用5’ -AMP治療敗血癥在低溫條件下注射給藥，治療效果較為顯著。權利要求1.5’ -AMP在制備用于治療或預防敗血癥的藥物中的用途。2.權利要求I的用途，其中所述5’-AMP應用在用于能降低敗血癥炎癥因子表達水平并升高抗炎因子表達本文檔來自技高網...

【技術保護點】
5’？AMP在制備用于治療或預防敗血癥的藥物中的用途。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：王云龍，苗志敏，李長貴，
申請(專利權)人：王云龍，苗志敏，李長貴，
類型：發明
國別省市：