本發明專利技術涉及抗凝血鼠藥溴敵隆半抗原及完全抗原的制備方法，包括如下步驟：（1）將溴敵隆和無水碳酸鉀分別加入到1，4-二氧六環中，在攪拌下進行反應；再加入丁二酸酐，加熱回流；（2）將步驟（1）中反應得到的混合物倒入水中，有灰白色固體析出；（3）過濾，乙醇重結晶，得到溴敵隆半抗原；（4）分別將溴敵隆半抗原、二環己基碳二亞胺和BSA加入到二甲亞砜中，然后再加入pH為6～7的磷酸緩沖溶液，攪拌；（5）透析，冷凍干燥后制成溴敵隆完全抗原。本發明專利技術的制備方法簡便、快速，可用于免疫動物，制備溴敵隆的單克隆抗體，進而建立抗凝血鼠藥溴敵隆的快速檢測方法，廣泛適用于法庭科學、臨床醫學等領域中。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及免疫學
中半抗原和完全抗原的制備方法，特別涉及。
技術介紹
溴敵隆是一種緩效滅鼠劑，為香豆素類化合物，利用該類化合物能夠破壞老鼠體內的凝血酶原，造成體內各臟器及粘膜大面積出血，最后達到殺死老鼠的目的，故銅稱為抗凝血類殺鼠藥。近年來隨著毒鼠強、氟乙酰胺等急性滅鼠藥被禁用，取而代之的是這些新一代的抗凝血滅鼠劑。雖然此類滅鼠劑有良好的滅鼠效果，但是隨著近年來的廣泛應用，因誤用、自殺等導致的案件及事件時有發生。這就要求公安司法鑒定部門對各種涉及抗凝血類殺鼠藥的檢材進行檢測。臨床上建立生物樣品中這些抗凝血滅鼠劑的檢測方法，對配合中毒病人的臨床診斷與治療有很大意義。免疫是生物體識別和排除抗原異物達到維護自身生理的平衡和穩定。以抗原抗體反應為基礎的各種免疫技術發展迅速，廣泛應用于醫學和生物學研究領域的定性、定量和定位，因其高度特異性和靈敏性(可達10-12 10_9g水平)，尤其適于生物樣本等復雜體系的分析檢驗。溴敵隆屬于小分子物質(分子量小于IOOODa)，缺乏T細胞表位而無法直接誘導動物機體產生特異性抗體，但與蛋白質大分子載體偶聯后，可借助其T細胞表位來間接誘導B細胞的增殖及分化，產生特異性抗體。小分子與蛋白載體的偶聯物稱為完全抗原。如果小分子自身帶有供偶聯的活性官能團(如氨基、羧基等)，則偶聯反應可直接進行，否則就必須對毒物分子進行衍生化，接上供偶聯反應的活性官能團以合成人工抗原，這一步又稱為半抗原的合成。半抗原及人工抗原的合成對于建立其免疫分析法至關重要，許多因素都將直接影響到能否制備出高質量的抗體，如選擇合適的中間體、活性官能團引入位點的選擇、半抗原產物的分離純化、偶聯臂的長短、半抗原與載體分子的偶聯比等。有的毒物因在半抗原合成過程中合成步驟多、產物分離純化困難，有時甚至無法制備出令人滿意的抗體。有關溴敵隆半抗原的制備方法還未見相關文獻報道。
技術實現思路
針對現有技術中存在的不足，本專利技術的目的在于針對溴敵隆作為小分子毒物不能直接誘導動物機體產生特異性抗體，提供。本專利技術的技術方案是這樣實現的一種抗凝血鼠藥溴敵隆半抗原的制備方法，包括如下步驟(I)將溴敵隆和無水碳酸鉀分別加入到1，4_ 二氧六環中，在攪拌下進行反應；再加入丁二酸酐，加熱回流；反應如下權利要求1.一種抗凝血鼠藥溴敵隆半抗原的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 (1)將溴敵隆和無水碳酸鉀分別加入到1，4-二氧六環中，在攪拌下進行反應；再加入丁二酸酐，加熱回流；反應如下2.根據權利要求I所述的抗凝血鼠藥溴敵隆半抗原的制備方法，其特征在于，在步驟(I)中，在溫度為15-40°C的條件下攪拌5-20h ;加熱回流l_6h。3.根據權利要求I所述的抗凝血鼠藥溴敵隆半抗原的制備方法，其特征在于，在步驟(1)中，在溫度為25-27°C的條件下攪拌IOh;加熱回流4h。4.根據權利要求I所述的抗凝血鼠藥溴敵隆半抗原的制備方法，其特征在于，在步驟(2)中，水的溫度為0°C。5.根據權利要求1-4任一所述的抗凝血鼠藥溴敵隆半抗原的制備方法，其特征在于，溴敵隆與無水碳酸鉀的物質的量之比為1:0. 5 I. 5，溴敵隆在1，4_ 二氧六環中的濃度為O.2 O. 7mol/L。6.根據權利要求5所述的抗凝血鼠藥溴敵隆半抗原的制備方法，其特征在于，溴敵隆與丁二酸酐的物質的量之比為I: I. 5 6。7.根據權利要求5所述的抗凝血鼠藥溴敵隆半抗原的制備方法，其特征在于，溴敵隆在I，4-二氧六環中的濃度為O. 3mol/L。8.抗凝血鼠藥溴敵隆完全抗原的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 (1)將溴敵隆和無水碳酸鉀分別加入到1，4_二氧六環中，在攪拌下進行反應；再加入丁二酸酐，加熱回流；； (2)將步驟(I)中反應得到的混合物倒入水中，有灰白色固體析出； (3)過濾，乙醇重結晶，得到溴敵隆半抗原； (4)分別將溴敵隆半抗原、二環己基碳二亞胺和BSA加入到二甲亞砜中，然后再加入pH為6 7的磷酸緩沖溶液，攪拌； (5)透析,冷凍干燥后制成溴敵隆完全抗原。9.根據權利要求8所述抗凝血鼠藥溴敵隆完全抗原的制備方法，其特征在于，在步驟(4)中溴敵隆半抗原與二環己基碳二亞胺的質量之比為1:1. 5 2，溴敵隆半抗原與BSA的質量之比為I. 5 4:1，每100毫克溴敵隆半抗原需要二甲亞砜I 3毫升、需要pH為6 7的磷酸緩沖溶液2 2. 5毫升。10.根據權利要求8所述抗凝血鼠藥溴敵隆完全抗原的制備方法，其特征在于，步驟(4)中在15 30°C的條件下攪拌。全文摘要本專利技術涉及抗凝血鼠藥溴敵隆半抗原及完全抗原的制備方法，包括如下步驟(1)將溴敵隆和無水碳酸鉀分別加入到1，4-二氧六環中，在攪拌下進行反應；再加入丁二酸酐，加熱回流；(2)將步驟(1)中反應得到的混合物倒入水中，有灰白色固體析出；(3)過濾，乙醇重結晶，得到溴敵隆半抗原；(4)分別將溴敵隆半抗原、二環己基碳二亞胺和BSA加入到二甲亞砜中，然后再加入pH為6～7的磷酸緩沖溶液，攪拌；(5)透析，冷凍干燥后制成溴敵隆完全抗原。本專利技術的制備方法簡便、快速，可用于免疫動物，制備溴敵隆的單克隆抗體，進而建立抗凝血鼠藥溴敵隆的快速檢測方法，廣泛適用于法庭科學、臨床醫學等領域中。文檔編號C07K14/765GK102898410SQ20121042223公開日2013年1月30日 申請日期2012年10月29日 優先權日2012年10月29日專利技術者董穎, 欒玉靜, 張蕾萍, 王瑞花, 杜鴻雁, 王炯, 常靖, 于忠山, 何毅, 王芳琳, 侯小平, 張云峰, 姚伊人 申請人:公安部物證鑒定中心本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種抗凝血鼠藥溴敵隆半抗原的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：（1）將溴敵隆和無水碳酸鉀分別加入到1，4？二氧六環中，在攪拌下進行反應；再加入丁二酸酐，加熱回流；反應如下：（2）將步驟（1）中反應得到的混合物倒入水中，有灰白色固體析出；（3）過濾，乙醇重結晶，得到溴敵隆半抗原。FDA00002323089600011.jpg
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：董穎，欒玉靜，張蕾萍，王瑞花，杜鴻雁，王炯，常靖，于忠山，何毅，王芳琳，侯小平，張云峰，姚伊人，
申請(專利權)人：公安部物證鑒定中心，
類型：發明
國別省市：
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