本發明專利技術屬生物工程技術領域，具體涉及一種深層液體發酵法制備富硒金耳粗多糖粉的方法。主要包括菌種的組織分離，培養基的組成，發酵條件，硒元素的轉化，菌絲體的收集，粉碎，水浸提，醇提后冷凍干燥得到富硒金耳胞內粗多糖粉；另外將發酵液濃縮，將濃縮液醇提后冷凍干燥得到富硒金耳胞外粗多糖粉；二者合并后得到富硒金耳粗多糖粉。每克粗多糖粉中有機硒含量達10微克/克以上。富硒金耳粗多糖粉有增強免疫力，抗疲勞，降血糖等保健生理活性。可應用于制備具有相關功效的保健品。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及。屬保健食品領域。
技術介紹
金耳為擔子菌綱，銀耳目，銀耳科，銀耳屬的干燥子實體，主要分布于我國西藏云南等地，野生資源稀有，古籍文獻記載用于肺熱、痰多、咳嗽、氣喘等癥的治療。研究表明，金耳深層發酵獲得的菌絲體所含的主要營養成分以及氨基酸與子實體相似，為深層發酵生產金耳多糖提供了理論依據。硒是人體必需的微量元素之一，它的生物學作用主要有①硒是谷胱甘肽過氧化物酶必需的組成成分，對免疫系統的影響可能與谷胱甘肽過氧化物酶參與花生四烯酸的代 謝，進而影響到前列腺素和白三烯的合成有關。硒化合物又是自由基的捕獲劑，后者會導致生化紊亂從而引起癌變和衰老。②硒有調節氧化還原反應速度，強化某些酶系統的活性及調節維生素A、C、E、K在體內的吸收和消耗的功能。③硒對汞、鎘有解毒作用。研究表明，茶樹菇菌絲體及發酵液中微量元素含量的多少易受培養基成分的影響，因此可以考慮在培養基中添加硒元素來培養金耳，從而得到富硒金耳粗多糖粉。目前，人們獲得真菌多糖的途徑主要是從真菌子實體提取而得，但隨著需求量的增大，野生資源有限，人工栽培周期長且容易污染雜菌，受病蟲害侵蝕，而菌絲體培養周期短，染菌少，故應該探索在生物反應器內進行液體深層發酵以獲取多糖的途徑，為開辟工業化液體深層發酵生產真菌多糖提供可靠依據。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種深層液體發酵制備富硒金耳粗多糖粉的方法。本專利技術的技術方案為將金耳斜面保藏菌種活化，接種至至搖瓶種子液體培養基中培養，待菌絲體分散后將培養好的種子液接入搖瓶發酵液體培養基培養。在發酵液體培養基中加入一定濃度無機硒，使金耳菌絲體中積累高濃度的有機硒，同時發酵液有效成分中也有一定濃度的硒元素。發酵結束后，收集菌絲體，勻漿，熱水浸提，浸提液濃縮后醇析，冷凍干燥得到富硒金耳胞內粗多糖粉；另外將發酵液濃縮，將濃縮液醇析后冷凍干燥得到富硒金耳胞外粗多糖粉；二者合并后得到富硒金耳粗多糖粉。本專利技術提出的深層液體發酵制備富硒金耳粗多糖粉的具體操作步驟如下(I)菌種培養出發菌種為本實驗室金耳斜面保藏菌種；①搖瓶種子培養搖瓶種子培養基=PDAlL加磷酸二氫鉀lg，硫酸鎂O. 5g，牛肉膏2g，蛋白胨lg，ρΗ6· O ；培養方法從斜面菌種中取3 4塊黃豆大小相同的菌塊，接種于搖瓶種子培養基中，250mL三角瓶裝培養基IOOmL于25°C，120r/min，振蕩培養7d ;搖瓶中預先裝有經過消毒滅菌的玻璃珠，用于打散菌絲體。②搖瓶發酵培養發酵培養基葡萄糖4g/100mL、酵母粉lg/100mL、磷酸二氫鉀O. 2g/100mL、硫酸鎂O.05g/100mL、亞砸酸納 6 μ g/1OOmL培養方法將培養好的種子以15%的接種量接入搖瓶發酵培養基中25°C，120r/min，振蕩培養7d;(2)富硒粗多糖的提取離心分離收集發酵液和菌絲體；①胞內粗多糖的提取將濕菌絲體勻漿，80°C -90°C熱水浸提，加水量為5倍體積濕菌絲體，總提取時間為12h，提取2次，合并提取液，濃縮后加入4倍體積95%乙醇在4°C 醇析12h，SOOOrpm離心得沉淀物，沉淀物用蒸餾水復溶后冷凍干燥，粉碎后得到富硒金耳胞內粗多糖粉；②胞外粗多糖提取將發酵液濃縮后調PH值為5. 5，添加4倍體積發酵液的95%乙醇，4°C醇析17h，SOOOrpm離心得沉淀物，沉淀物用蒸餾水復溶后冷凍干燥，粉碎后得到富硒金耳胞外粗多糖粉；(3)產品的獲得將富硒金耳胞內粗多糖粉與茶樹菇胞外粗多糖粉合并，得到富硒金耳粗多糖粉；(4)檢測結果樣品中總硒及游離硒的含量，兩者之差為樣品中有機硒含量，含量為10微克/克以上。具體實施例方式下面的實例將具體說明本專利技術的操作方法，但不能作為對本專利技術的限定。實例I :各種培養基的組成配方搖瓶種子培養基PDA1L加磷酸二氫鉀lg，硫酸鎂O. 5g，牛肉膏2g，蛋白胨lg，ρΗ6· O0搖瓶發酵培養基葡萄糖40g、酵母粉10g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂O. 5g、亞硒酸鈉40μ g-60y g，用水稀釋至 1L，PH6. O。實例2 :菌種培養出發菌種為實驗室保藏金耳斜面菌種,活化后從斜面母種中取3 4塊黃豆大小相同的菌塊，接種于實例I已滅菌的搖瓶種子培養基中，搖瓶中預先裝有經過消毒滅菌的玻璃珠，裝液量100mL/250mL三角瓶，于25°C，120r/min,振蕩培養7d，三角瓶包八層紗布；將培養好的種子以15%的接種量接入實例I已滅菌的搖瓶發酵培養基中25°C，120r/min，振蕩培養7d。實例3 :富硒粗多糖的提取I、胞內粗多糖的提取將上述發酵液4000rpm離心IOmin,收集菌絲體,將濕菌絲體勻漿，加入5倍體積濕菌絲體的水在80°C水浴鍋中浸提，，總提取時間為12h，提取2次，合并提取液，用旋轉蒸發儀濃縮至原體積1/5后加入4倍體積95 %乙醇，放入4°C冰箱醇沉12h，取出后SOOOrpm離心5min得沉淀物，沉淀物用蒸餾水復溶后冷凍干燥，粉碎后得到富硒金耳胞內粗多糖粉85mg。2、胞外粗多糖提取將上述發酵液4000rpm離心IOmin,收集上清液,用旋轉蒸發儀濃縮至原體積1/5后調PH值為5. 5，加入4倍體積95%乙醇，放入4°C冰箱醇沉17h，取出后SOOOrpm離心5min得沉淀物，沉淀物用蒸餾水復溶后冷凍干燥，粉碎后得到富硒茶樹菇胞外粗多糖粉376mg。3、產品的獲得將茶樹菇胞內粗多糖粉與茶樹菇胞外粗多糖粉合并，得到富硒茶樹菇粗多糖粉461mg。實例4:檢測結果 測定了金耳富硒粗多糖中總硒及游離硒的含量，兩者之差為樣品中有機硒含量，含量為10微克/克以上。權利要求1.，其特征是將金耳固體斜面菌種活化后接入搖瓶種子培養基中培養，分散菌絲體，將培養好的種子液接入搖瓶發酵液體培養基培養。在發酵液體培養基中加入一定濃度無機硒，使金耳菌絲體中積累高濃度的有機硒，同時發酵液有效成分中也有一定濃度的硒元素。發酵結束后，收集菌絲體，勻漿，熱水浸提，浸提液濃縮后醇析，冷凍干燥得到富硒金耳胞內粗多糖粉；另外將發酵液濃縮，將濃縮液醇析后冷凍干燥得到富硒金耳胞外粗多糖粉；二者合并后得到富硒金耳粗多糖粉； 具體步驟為 (1)菌種培養 出發菌種為本實驗室金耳斜面保藏菌種； ①搖瓶種子培養 搖瓶種子培養基=PDAlL加磷酸二氫鉀lg，硫酸鎂O. 5g，牛肉膏2g，蛋白胨lg，pH6. O ； 培養方法從斜面菌種中取3 4塊黃豆大小相同的菌塊，接種于搖瓶種子培養基中，250mL三角瓶裝培養基IOOmL于25°C，120r/min，振蕩培養7d ； ②搖瓶發酵培養 發酵培養基葡萄糖4g/100mL、酵母粉lg/100mL、磷酸二氫鉀O. 2g/100mL、硫酸鎂O.05g/100mL、亞硒酸鈉若干； 培養方法將培養好的種子以15%的接種量接入搖瓶發酵培養基中25°C，120r/min，振蕩培養7d ； (2)富硒粗多糖的提取離心分離收集發酵液和菌絲體； ①胞內粗多糖的提取將濕菌絲體勻漿，80°C熱水浸提，加水量為5倍體積濕菌絲體，總提取時間為12h，提取2次，合并提取液，濃縮后加入4倍體積95%乙醇在4°C醇析12h，SOOOrpm離心得沉淀物，沉淀物用蒸餾水復溶后冷凍干燥，粉碎后得到富硒金耳胞內粗多糖粉； ②胞外粗本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種深層液體發酵法制備富硒金耳粗多糖粉的方法，其特征是將金耳固體斜面菌種活化后接入搖瓶種子培養基中培養，分散菌絲體，將培養好的種子液接入搖瓶發酵液體培養基培養。在發酵液體培養基中加入一定濃度無機硒，使金耳菌絲體中積累高濃度的有機硒，同時發酵液有效成分中也有一定濃度的硒元素。發酵結束后，收集菌絲體，勻漿，熱水浸提，浸提液濃縮后醇析，冷凍干燥得到富硒金耳胞內粗多糖粉；另外將發酵液濃縮，將濃縮液醇析后冷凍干燥得到富硒金耳胞外粗多糖粉；二者合并后得到富硒金耳粗多糖粉；？具體步驟為：？(1)菌種培養？出發菌種為本實驗室金耳斜面保藏菌種；？①搖瓶種子培養？搖瓶種子培養基：PDA1L加磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂0.5g，牛肉膏2g，蛋白胨1g，pH6.0；？培養方法：從斜面菌種中取3～4塊黃豆大小相同的菌塊，接種于搖瓶種子培養基中，250mL三角瓶裝培養基100mL于25℃，120r/min，振蕩培養7d；？②搖瓶發酵培養？發酵培養基：葡萄糖4g/100mL、酵母粉1g/100mL、磷酸二氫鉀0.2g/100mL、硫酸鎂0.05g/100mL、亞硒酸鈉若干；？培養方法：將培養好的種子以15％的接種量接入搖瓶發酵培養基中25℃，120r/min，振蕩培養7d；？(2)富硒粗多糖的提取：離心分離收集發酵液和菌絲體；？①胞內粗多糖的提取：將濕菌絲體勻漿，80℃熱水浸提，加水量為5倍體積濕菌絲體，總提取時間為12h，提取2次，合并提取液，濃縮后加入4倍體積95％乙醇在4℃醇析12h，8000rpm離心得沉淀物，沉淀物用蒸餾水復溶后冷凍干燥，粉碎后得到富硒金耳胞內粗多糖粉；？②胞外粗多糖提取：將發酵液濃縮后調PH值為5.5，添加4倍體積發酵液的95％乙醇，4℃醇析17h，8000rpm離心得沉淀物，沉淀物用蒸餾水復溶后冷凍干燥，粉碎后得到富硒金耳胞外粗多糖粉；？(3)產品的獲得：將富硒金耳胞內粗多糖粉與茶樹菇胞外粗多糖粉合并，得到富硒金耳粗多糖粉。...
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：鄧超，陳敬華，程詠梅，陳荊曉，滕麗萍，徐曉宇，付海田，
申請(專利權)人：江南大學，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。