雙特異性二價抗VEGF/抗ANG-2抗體制造技術

本發明專利技術涉及針對人血管內皮生長因子(VEGF/VEGF-A)且針對人血管生成素-2(ANG-2)的雙特異性二價抗體、其生成方法、含有所述抗體的藥物組合物、及其用途。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】雙特異性二價抗VEGF/抗ANG-2抗體本專利技術涉及針對人血管內皮生長因子(VEGF/VEGF-A)且針對人血管生成素-2(ANG-2)的雙特異性二價抗體、其生成方法、含有所述抗體的藥物組合物及其用途。
技術介紹
血管發生牽涉多種病癥的發病機制，所述病癥包括實體瘤、眼內新生血管性綜合征諸如增殖性視網膜病變或年齡相關的黃斑變性、類風濕性關節炎、和銀屑病(Folkman,J.等,J.Biol.Chem.267(1992)10931-10934;Klagsbrun,M.等,Annu.Rev.Physiol.53(1991)217-239;和Garner,A.,Vasculardiseases,于：Pathobiologyofoculardisease,Adynamicapproach,Garner，A.和Klintworth,G.K.(編)，第二版，MarcelDekker，NewYork(1994),第1625頁-第1710頁)。在實體瘤的情況中，新血管化允許腫瘤細胞與正常細胞相比獲得生長優勢和增殖自主性。因而，已觀察到腫瘤切片中微血管的密度與乳腺癌以及幾種其它腫瘤中患者存活間的關聯(Weidner,N.等,NEnglJMed.324(1991)1-8;Horak,E.R.等,Lancet340(1992)1120-1124;和Macchiarini,P.等,Lancet340(1992)145-146)。VEGF和抗-VEGF抗體人血管內皮生長因子(VEGF/VEGF-A)(SEQIDNo:105)記載于例如Leung,D.W.等,Science246(1989)1306-9;Keck,P.J.等,Science246(1989)1309-12和Connolly,D.T.等,J.Biol.Chem.264(1989)20017-24。VEGF牽涉調節正常的和異常的血管發生和與腫瘤和眼內病癥有關的新血管化(Ferrara,N.等,Endocr.Rev.18(1997)4-25;Berkman,R.A.等,J.Clin.Invest.91(1993)153-159;Brown,L.F.等,HumanPathol.26(1995)86-91;Brown,L.F.等,CancerRes.53(1993)4727-4735;Mattern,J.等,Brit.J.Cancer.73(1996)931-934;和Dvorak,H.F.等,Am.J.Pathol.146(1995)1029-1039)。VEGF是已經從數種來源分離的同二聚體糖蛋白。VEGF對內皮細胞顯示高度特異的促有絲分裂活性。VEGF在胚胎血管生成期間在新血管形成中和在成年期間在血管發生中具有重要的調節功能(Carmeliet,P.等,Nature,380(1996)435-439;Ferrara,N.等,Nature,380(1996)439-442;綜述見Ferrara,N.等,Endocr.Rev.18(1997)4-25)。已經在研究中證明了VEGF發揮的作用的意義，該研究顯示了單個VEGF等位基因的失活由于不能形成血管系統(vasculature)而導致胚胎致死性(Carmeliet,P.等,Nature,380(1996)435-439;Ferrara,N.等,Nature,380(1996)439-442)。另外，VEGF對單核細胞具有強化學引誘物活性，能誘導內皮細胞中的血纖維蛋白溶酶原激活劑和血纖維蛋白溶酶原激活劑抑制劑，而且還能誘導微血管通透性。由于后一種活性，它有時稱為血管通透性因子(VPF)。已經綜述了VEGF的分離和特性；見Ferrara,N.等,J.CellularBiochem.,47(1991)211-218和Connolly,D.T.,J.CellularBiochem.,47(1991)219-223。單個VEGF基因的mRNA可變剪接產生5種VEGF同等型。抗VEGF中和性抗體抑制多種人腫瘤細胞系在小鼠中的生長(Kim,K.J.等,Nature362(1993)841-844;Warren,S.R.等,J.Clin.Invest.95(1995)1789-1797;Borgstrom,P.等,CancerRes.56(1996)4032-4039;和Melnyk,O.等,CancerRes.56(1996)921-924)。WO94/10202、WO98/45332、WO2005/00900和WO00/35956涉及針對VEGF的抗體。人源化單克隆抗體貝伐單抗(bevacizumab)(以商品名阿瓦斯汀銷售)是一種在腫瘤治療中使用的抗VEGF抗體(WO98/45331)。蘭尼單抗(ranibizumab)(商品名)是一種與貝伐單抗(阿瓦斯汀)自同一親本鼠抗體衍生的單克隆抗體片段。它比親本分子小得多，并且已經經過親和力成熟，從而提供更強的對VEGF-A的結合(WO98/45331)。它是一種已經被批準用于治療“濕”型年齡相關的黃斑變性(ARMD)(即，一種常見形式的年齡相關的視力喪失)的抗血管生成物。另一種抗VEGF抗體是例如在例如US2007/0141065中描述的HuMabG6-31。ANG-2和抗-ANG-2抗體人血管生成素-2(ANG-2)(或者縮寫為ANGPT2或ANG2)(SEQIDNo:106)記載于Maisonpierre,P.C.等,Science277(1997)55-60和Cheung,A.H.等,Genomics48(1998)389-91。發現血管生成素-1和-2(ANG-1(SEQIDNo:107)和ANG-2(SEQIDNo:106))為Tie(即，一種在血管內皮內選擇性表達的酪氨酸激酶家族)的配體。Yancopoulos,G.D.等,Nature407(2000)242-48。目前血管生成素家族有四種確定的成員。血管生成素-3和-4(Ang-3和Ang-4)可能代表小鼠和人中相同基因座的廣泛趨異的對應物。Kim,I.等,FEBSLet,443(1999)353-56;Kim,I.等,JBiolChem274(1999)26523-28。ANG-1和ANG-2最初是在組織培養實驗中分別作為激動劑和拮抗劑鑒定的(參見，對于ANG-1:Davis,S.等,Cell87(1996)1161-69;和對于ANG-2:Maisonpierre,P.C.等,Science277(1997)55-60)。所有已知的血管生成素主要結合Tie2，而Ang-1和-2兩者都以3nM(Kd)的親和力結合Tie2。Maisonpierre,P.C.等,Science277(1997)55-60。顯示了Ang-1支持EC存活并促進內皮完整性，Davis,S.等,Cell87(1996)1161-69;Kwak,H.J.等,FEBSLett448(1999)249-53;Suri,C.等,Science282(1998)468-71;Thurston,G.等,Science286(1999)2511-2514;Thurston,G.等,Nat.Med.6(2000)460-63，而ANG-2具有相反的效果，本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2010.03.26 EP 10003269.71.一種雙特異性二價抗體，其包含特異性結合人VEGF的第一抗原結合位點和特異性結合人ANG-2的第二抗原結合位點，其特征在于所述抗體包含：a)特異性結合VEGF的第一全長抗體的重鏈和輕鏈，所述第一抗原結合位點包含SEQIDNO:1作為重鏈可變域(VH)，和SEQIDNO:2作為輕鏈可變域(VL)；且b)特異性結合ANG-2的第二全長抗體的經修飾的重鏈和經修飾的輕鏈，其中恒定域CL和CH1彼此替換，所述第二抗原結合位點包含SEQIDNO:3作為重鏈可變域(VH)，和SEQIDNO:4作為輕鏈可變域(VL)，且所述抗體特征在于：a)的全長抗體的重鏈CH3域和b)的全長抗體的重鏈CH3域各在包含抗體CH3域之間的初始界面中的改變的界面處相遇；其中i)在一條重鏈的CH3中，一個氨基酸殘基用具有較大側鏈體積的氨基酸殘基替換，由此在一條重鏈的CH3域的界面內產生突起，該突起可位于另一條重鏈的CH3域的界面內的空穴中，其中該CH3域包含T366W突變，且其中ii)在另一條重鏈的CH3域中，一個氨基酸殘基用具有較小側鏈體積的氨基酸殘基替換，由此在第二CH3域的界面內產生空穴，第一CH3域的界面內的突起可位于該空穴內，其中該CH3域包含T366S、L368A、和Y407V突變。2.依照權利要求1的雙特異性抗體，其特征在于具有人IgG1亞類的恒定區。3.依照權利要求1或2的雙特異性抗體，其特征在于包含：a)SEQIDNO:7作為所述第一全長抗體的重鏈，和SEQIDNO:5作為所述第一全長抗體的輕鏈，和b)SEQIDNO:8作...

【專利技術屬性】
技術研發人員：M貝爾納，S英霍夫瓊，A卡維利，H凱滕伯杰，C克萊因，JT雷古拉，W謝弗，JM尚茨爾，W朔伊爾，KG斯塔本勞施，M托馬斯，
申請(專利權)人：霍夫曼拉羅奇有限公司，
類型：
國別省市：