本發明專利技術屬于動物飼料領域，具體涉及一種豬β防御素2噴干粉及含有其的飼料添加劑，預混料及配合料。本發明專利技術的豬β防御素2噴干粉由以下方法制備：發酵攜帶豬β防御素2基因的酵母基因工程菌株，取上清液進行超濾，超濾液依次添加保護劑、壁材和載體，進行噴霧干燥。本發明專利技術提供的具有抑菌活性的畢赤酵母表達的豬β防御素2噴干粉，采用噴霧干燥法與成囊技術結合，使豬β防御素2的活性得以最大程度保存，而且，經過體外模擬人工胃液而不被破壞，釋放出來的豬β防御素2具有良好的活性。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于動物飼料領域，具體涉及一種豬β防御素2噴干粉及含有其的飼料添加劑，預混料及配合料。
技術介紹
近年來，抗生素在畜產品中大量使用，其殘留可能使動物病原菌產生耐藥性，耐藥基因可通過轉化、轉導、接合、易位等方式在細菌之問傳播，也可能通過食物鏈等途徑擴散耐藥基因，使細菌的耐藥基因在人群中細菌、動物群中細菌和生態系統中細菌間互相傳遞，由此導致致病菌的耐藥性增加而引起人類和動物感染性疾病的治療失敗,對人類的健康產生危害。某些抗生素走進動物體內后最終以原型或代謝物形式主要經糞便排泄到外界環 境，造成環境污染，當這些物質超過環境自凈能力時，就會對生態環境中的微生物產生影響，增加環境中的耐菌株。抑制或殺滅了有益菌，破壞了腸道內的菌群平衡。由微生物生產的抗菌類小肽物質是通過作用于細菌細胞膜而起作用的，作為添加劑屬無毒副作用、無殘留、無致細菌耐藥性的一類環保型飼料添加劑。但作為蛋白小肽，要使抗菌肽能夠真正在養殖生產中大量應用，必須解決產量、活性、穩定性、功能性、成本、生產工藝方法等多方面問題。
技術實現思路
為了解決上述問題，本專利技術提供一種抑菌肽噴干粉及含有其的飼料添加劑，預混料及配合料。首先，本專利技術提供一種豬β防御素2噴干粉的制備方法，其為發酵攜帶豬β防御素2基因的酵母基因工程菌株，取上清液進行超濾，超濾液依次添加保護劑、壁材和載體，噴霧干燥。本專利技術中，對酵母基因工程菌的菌株并沒有特別的限定，只要攜帶有豬β防御素2基因，并能正常表達出豬β防御素2的酵母菌株都可以用于本專利技術。其中，超濾截留分子量為3KDa 10KDa的超濾液。在本專利技術的一個實施方案中，所述保護劑包括質量體積百分比3 8%的脫脂奶粉、質量體積百分比O. 5^2. 5%的谷氨酸鈉以及質量體積百分比O. Γ2. 0%的乳糖、海藻糖、蔗糖中的一種或多種。在本專利技術的另一個實施方案中，所述壁材選自明膠、阿拉伯膠、瓜爾豆膠、海藻酸鈉中的一種或多種，添加量為質量體積百分比5 10%。在本專利技術的另一個實施方案中，所述載體選自石粉以及玉米淀粉、麥芽糊精、玉米芯粉、麥麩粉中的一種或兩種，添加量為質量體積百分比20-25%。其中，噴霧干燥的條件為進風溫度16(Tl80°C，進料速度l(T30ml/min，出風溫度65 85。。。進一步的，本專利技術提供有所述的制備的豬β防御素2噴干粉。更進一步的，本專利技術還提供含有所述所述噴干粉的飼料添加劑，優選的該飼料添加劑為豬用，更優選的，為仔豬用。更進一步的，本專利技術還提供含有所述飼料添加劑的預混料，優選的，該預混料為豬用，更優選的，為仔豬用。更進一步的，本專利技術還提供含有所述預混料的配合料，優選的，該配合料為豬用，更優選的，為仔豬用。本專利技術提供的具有抑菌活性的畢赤酵母表達的豬β防御素2噴干粉，采用噴霧干燥法與微膠囊成囊技術結合，使豬β防御素2的活性得以最大程度保存，而且，經過體外模擬人工胃液而不被破壞，釋放出來的豬β防御素2具有良好的活性，能顯著提高仔豬的采食量，促進飼料利用率，提高仔豬的生長速度和日增重，大幅度降低腹瀉率，使豬只的生產·性能得到很大的提高。本專利技術提供的豬防御素2噴干粉的制備方法簡單，所需設備簡單，成本低，適宜大規模生產。附圖說明圖I所示為超濾液、噴干粉抑菌活性比較。圖2所示為超濾液、噴干粉耐胃酸試驗。具體實施例方式以下實施例用于說明本專利技術，但不用來限制本專利技術的范圍。實施例I具有抑菌活性的畢赤酵母蛋白多肽豬β防御素2的制備I、畢赤酵母發酵液的制備I)平板培養復壯將攜帶豬β防御素2基因的畢赤酵母(根據解民等，重組豬β防御素2在畢赤酵母中的表達及其鑒定，2010，中國獸醫學報，20 (8)，1028-1031公開的方法進行制備)菌種接種于YPD平板培養基上，于28°C培養48h，使畢赤酵母復壯，并形成單菌落，挑取單菌落于接種培養基上，28°C培養48h ；2) —級種子的制備將步驟I)培養的畢赤酵母菌種轉接裝有300mlYPD液態培養基2L搖瓶里，28°C搖床培養48h，至對數后期，得一級種子；3) 二級種子的制備將步驟2)制備的一級種子轉接到裝有80LYPD種子培養基的100L種子罐中，溫度28°C，轉速400rpm，培養24h，得二級種子液。4)畢赤酵母發酵液的制備將步驟3)制備的二級種子液按照5%的接種量接種到O.5 O. 8m3發酵培養基的發酵罐中，溫度31。。，轉速400rpm，罐壓O. 05Mpa，通風比:I :0. 6，培養48h，收集發酵液。發酵畢赤酵母時用的發酵培養基由以下成分組成葡萄糖18g/L,蛋白胨20g/L,牛肉膏3g/L，酵母浸粉8/L，pH為7. 2。2、畢赤酵母蛋白多肽豬β防御素2的制備I)上清液制備將I中得到的發酵液經離心機3000rpm離心20min，去除菌體收集上清，再次5000rpm離心15min，去除菌體收集上清液，待用。2)超濾選擇3. 5KD超濾膜,4000rpm,離心40min,收集超濾液。3)保護劑的添加將脫脂奶粉、谷氨酸鈉、乳糖按照10:1:1的比例進行預先混合，以超濾液的8%進行添加，充分混合。4)壁材制備及添加將自來水升溫至40°C 50°C，邊開攪拌邊慢慢加入明膠，使其完全溶解配成10%的溶液，按超濾液的I. 5%加入配好的明膠溶液攪拌lOmin。5)加入25%的載體，設置噴霧干燥塔進出風溫度為165°C /85°C，霧化器轉動頻率為35Hz，進料速度為18ml/min，進行噴霧干燥，得到豬β防御素2的噴干粉。實施例2畢赤酵母蛋白多 肽豬β防御素2耐胃酸試驗I、超濾液、噴干粉抑菌活性比較I)解囊稱取O. 5g噴干菌粉加入O. 05mol/L檸檬酸鈉解囊液49. 5mL中，于37°C、200rpm振蕩12h, 3000rpm離心，取上清液。2)制作指示平板采用牛津杯定量擴散法，以金黃色葡萄球菌為指示菌，將含有指示菌IO7個/ml培養物Iml與溶化并冷卻至50° C的檢測培養基25ml混勻，倒入已放置好牛津杯的平皿中，冷凝后用無菌鑷子取出牛津杯。3)抑菌活性比較取超濾液和噴干粉解囊液各50 μ L加入小孔中，在冰箱中放置過夜，使之充分擴散到培養基中，然后在指示菌最適生長溫度下培養24h，觀察并測定抑菌圈直徑。結果如圖I所不。圖中右邊為超濾液抑囷圈，直徑為33. 19mm,左邊為嗔干粉解囊后抑菌圈，直徑為28. 54mm，抑菌活性保持在86%以上。2、耐胃酸試驗I)解囊液、指示平板的制作均同上；2)稱取O. 5g噴干菌粉加入49. 5mL人工胃液中于37°C、200rpm振蕩2h后棄去人工胃液，加入49. 5mL解囊液中于37°C、200rpm振蕩Ih后測抑菌圈大小。結果如圖2所示。左邊為噴干粉解囊后抑菌圈，直徑為27. 32_，右邊為經過人工胃液處理之后，直徑為25. 27抑菌活性保持在90%以上。實施例3畢赤酵母蛋白多肽豬β防御素2對仔豬生長性能的影響試驗選21日齡的杜X長X大三元雜交仔豬120頭，隨機分布到3個處理組和I個空白對照組，每個處理3個重復。在各組日糧中添加實施例I制備的畢赤酵母蛋白多肽豬β防御素2噴干粉，添加量分別為0.5%、1%和2%。測定的生長性能指標包括平均日增重(ADG)、日采食量(40 1)、飼料轉化效率^/6)，并觀察糞便狀態，計算本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種豬β防御素2噴干粉的制備方法，其特征在于，發酵攜帶豬β防御素2基因的酵母基因工程菌株，取上清液進行超濾，超濾液依次添加保護劑、壁材和載體，進行噴霧干燥。
【技術特征摘要】
1.一種豬β防御素2噴干粉的制備方法，其特征在于，發酵攜帶豬β防御素2基因的酵母基因工程菌株，取上清液進行超濾，超濾液依次添加保護劑、壁材和載體，進行噴霧干燥。2.如權利要求I所述的方法，其特征在于，超濾截留分子量為3KDa 10KDa的超濾液。3.如權利要求I所述的方法，其特征在于，所述保護劑包括質量體積百分比3 8%的脫脂奶粉、質量體積百分比O. 5^2. 5%的谷氨酸鈉以及質量體積百分比O. Γ2. 0%的乳糖、海藻糖、蔗糖中的一種或多種。4.如權利要求I所述的方法，其特征在于，所述壁材選自明膠、阿拉伯膠、瓜爾豆膠、...
【專利技術屬性】
技術研發人員：吳雅琨，彭子欣，陳慧鑫，馮秋月，謝飛，王安如，
申請(專利權)人：北京大北農科技集團股份有限公司，漳州大北農農牧科技有限公司，湖南大北農農業科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。