本發(fā)明專利技術(shù)屬于涉及一種珠芽類魔芋組織培養(yǎng)快繁方法，屬植物細(xì)胞工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明專利技術(shù)方法包括菌苗培養(yǎng)、胚狀體誘導(dǎo)、種球誘導(dǎo)、種球成熟培養(yǎng)步驟。本發(fā)明專利技術(shù)通過組培技術(shù)，改變外植體的誘導(dǎo)發(fā)育、生長(zhǎng)途徑，通過添加相應(yīng)的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)，引導(dǎo)生長(zhǎng)發(fā)育途徑由器官發(fā)生途徑轉(zhuǎn)向胚狀體發(fā)生途徑，直接通過離體培養(yǎng)獲得大量成熟的珠芽魔芋種球。本發(fā)明專利技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)在于：珠芽類魔芋有性繁殖系數(shù)高、繁殖周期短、品質(zhì)不易退化、組培苗移栽程序簡(jiǎn)單、離體塊莖不易感病、易萌發(fā)，為工廠化快速生產(chǎn)珠芽類魔芋種球提供了實(shí)用技術(shù)。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種珠芽類魔芋組織培養(yǎng)繁殖方法，屬于植物細(xì)胞工程
技術(shù)介紹
魔芋是天南星科(Araceae)魔芋屬(Amorphophallus)多年生草本植物,是迄今發(fā)現(xiàn)的唯一能大量合成葡甘聚糖(konjac glucomannan, KGM)的植物種群,主要分布在亞洲和非洲的熱帶及亞熱帶地區(qū)，僅少數(shù)亞洲國(guó)家有栽培，中國(guó)、日本較普遍。它是我國(guó)西南地區(qū)重要的特色經(jīng)濟(jì)作物，已有兩千多年的栽培和食用歷史，其主要成分葡甘聚糖是優(yōu)異的純天然膳食纖維，具極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，已在食品、保健品、醫(yī)藥、化工、石油、紡織等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，帶動(dòng)了一大批相關(guān)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，其開發(fā)利用已顯現(xiàn)出經(jīng)濟(jì)效益高、社會(huì)效益明顯、 生態(tài)效益好的優(yōu)勢(shì)。隨著市場(chǎng)需求急劇增加，魔芋種植業(yè)得到了迅猛發(fā)展，現(xiàn)已成為西南山區(qū)農(nóng)民脫貧致富的一條重要途徑。珠芽類魔芋是一類繁殖方式獨(dú)特的野生馴化魔芋種，因其地上植株會(huì)產(chǎn)生無性繁殖的“珠芽”小球莖而得名，這樣就顯著增加了珠芽魔芋的繁殖系數(shù)，是一種獨(dú)特的魔芋種質(zhì)資源，目前珠芽類魔芋品種“紅魔芋”在云南德宏州、西雙版納州及附近地區(qū)有大量種植。而金魔芋是在云南西雙版納州熱帶雨林中新發(fā)現(xiàn)的一個(gè)特有珠芽魔芋類品種，其葡甘聚糖含量遠(yuǎn)高于花魔芋、白魔芋及其它珠芽類魔芋品種如紅魔芋等，具有很好的加工價(jià)值，并高抗魔芋軟腐病和白絹病等魔芋生產(chǎn)中的主要病害，是不可多得的種質(zhì)資源。但目前在金魔芋栽培中還是存在用種量大，種球繁殖系數(shù)較低，且切塊繁殖易于傳播魔芋病害，種子量少、變異較低的缺點(diǎn)，隨著魔芋產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，十分迫切需要大量的優(yōu)質(zhì)魔芋種苗。雖然在實(shí)驗(yàn)室條件下，已經(jīng)有通過組織培養(yǎng)繁殖珠芽魔芋(指紅魔芋品種)的繁育方法(吳金平等，珠芽類魔芋的組織培養(yǎng)與快速繁殖，植物生理學(xué)報(bào)2007，(5)2:887-888和龍春林等，珠芽摩芋種苗繁育方法，專利公開號(hào)1596618 )，但尚未有對(duì)金魔芋品種組織快繁技術(shù)的相關(guān)研究。并且，上述此法存在對(duì)珠芽魔芋(紅魔芋)快繁需要進(jìn)行生根、煉苗、移栽等多步程序，獲得珠芽魔芋種球的周期長(zhǎng)，生長(zhǎng)慢、不耐儲(chǔ)藏和運(yùn)輸?shù)牟蛔恪?br>技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)之不足，而提供。本專利技術(shù)通過組培技術(shù)，改變外植體的誘導(dǎo)發(fā)育、生長(zhǎng)途徑，通過添加相應(yīng)的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)，引導(dǎo)生長(zhǎng)發(fā)育途徑由器官發(fā)生途徑轉(zhuǎn)向胚狀體發(fā)生途徑，直接通過離體培養(yǎng)獲得大量成熟的珠芽魔芋(包括金魔芋和其它珠芽類魔芋品種，如紅魔芋)種球，用于播種進(jìn)一步生長(zhǎng)膨大，來收獲并提高珠芽魔芋產(chǎn)量。本專利技術(shù)的珠芽類魔芋組織培養(yǎng)快繁方法，包括菌苗培養(yǎng)、胚狀體誘導(dǎo)、種球誘導(dǎo)、種球成熟培養(yǎng)步驟，具體如下(I)無菌苗培養(yǎng)將珠芽類魔芋植株的幼嫩葉片、葉柄以及叢生芽常規(guī)滅菌后，將葉片切成O. 5-1. Ocm2,葉柄切成O. 8-lcm長(zhǎng)，接種到常規(guī)滅菌的苗培養(yǎng)基上，在20001ux光下培養(yǎng)，llh/d，培養(yǎng)溫度28土1°C，得到脫毒無菌苗；苗培養(yǎng)基組分及配比為MS基本培養(yǎng)基 +0. 2mg/L NAA +0. 5mg/L 6-BA+ 活性炭 0-3. Og/L,鹿糖 30g/L,瓊脂 6_8g/L,調(diào) pH 至5.8~6. 2 ；(2)胚狀體誘導(dǎo)將步驟(I)獲得的脫毒無菌苗，取葉片切成O. 5-1. 0cm2，葉柄切成O. 8-1. Ocm,接到常規(guī)滅菌的胚狀體誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在20001ux光下培養(yǎng)，llh/d，培養(yǎng)溫度28土TC，獲得珠芽類魔芋胚狀體；胚狀體誘導(dǎo)培養(yǎng)基組分及配比為MS基本培養(yǎng)基+0. 2mg/L NAA +0. 5mg/L 6-BA +0. lmg/L ΙΑΑ+0. 1-0. 2mg/L ABA+30g/L 聚乙二醇，鹿糖30g/L,瓊脂 6-8g/L,調(diào) pH 至 5. 8-6. 2，或 MS 基本培養(yǎng)基 +0. 2mg/L NAA +0. 5mg/L 6-BA,蔗糖 30g/L，瓊脂 6-8g/L，調(diào) pH 至 5. 8-6. 2 ；(3)種球誘導(dǎo)將未產(chǎn)生新芽之前的珠芽類魔芋胚狀體，轉(zhuǎn)移至常規(guī)滅菌的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在20001ux光下培養(yǎng)，llh/d,培養(yǎng)溫度28± 1°C，得到珠芽類魔芋幼小種球；種球誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組分及配比為MS基本培養(yǎng)基+0. lmg/L NAA +3. Og/L活性炭+15g/L聚乙二醇，鹿糖 30g/L,瓊脂 6-8g/L,調(diào) pH 至 5. 8-6. 2 ；(4)種球成熟培養(yǎng)將步驟(3)得到的珠芽類魔芋幼小種球轉(zhuǎn)移至常規(guī)滅菌的種球成熟培養(yǎng)基上，在20001UX光下培養(yǎng)，llh/d，培養(yǎng)溫度28 土 1°C，當(dāng)珠芽類魔芋種球上端中間有芽點(diǎn)，直徑大小為5mm以上，種球的外觀顏色略帶褐色時(shí)得到成熟分離的珠芽類魔芋種球；種球成熟培養(yǎng)基組分及其配比為=MS基本培養(yǎng)基+0. 2mg/L NAA +0. 5mg/L 6-BA+0. 2-1. Omg/LABA 或 30_50g/L 聚乙二醇，蔗糖 30_50g/L，瓊脂 6_8g/L，調(diào) pH 至 5. 8-6. 2。上述步驟中培養(yǎng)基的常規(guī)滅菌方法為121_126°C下濕熱蒸汽滅菌30min，備用。本專利技術(shù)將成熟分離的珠芽類魔芋種球直接播種于泥炭珍珠巖=2:1的基質(zhì)上，置于半陰生長(zhǎng)環(huán)境條件，溫度18 301，萌發(fā)成苗率達(dá)95%。本專利技術(shù)的效果在于I.本專利技術(shù)的珠芽類魔芋人工種球培養(yǎng)至成熟僅需65-85天，生命力與抗逆性強(qiáng)，含水量降至65-78%時(shí)即耐貯藏，不需要經(jīng)過特殊馴化就能直接用于播種，適合工廠規(guī)?；Ｄ晟a(chǎn)。2.本專利技術(shù)的珠芽類魔芋人工種球單粒直徑更大，發(fā)育更成熟，萌發(fā)率高達(dá)95%。3.本專利技術(shù)的珠芽類魔芋有性繁殖系數(shù)高、繁殖周期短、品質(zhì)不易退化、組培苗移栽程序簡(jiǎn)單、離體塊莖不易感病、易萌發(fā)，為工廠化快速生產(chǎn)珠芽類魔芋種球提供了實(shí)用技術(shù)。具體實(shí)施方式實(shí)施例I :，其步驟如下(I)無菌苗培養(yǎng)將云南省瑞麗市珠芽類魔芋(金魔芋品種)植株的幼嫩葉片、葉柄以及叢生芽常規(guī)滅菌后，將葉片切成O. 5或I. Ocm2,葉柄以及叢生芽切成O. 8或Icm長(zhǎng)，接種到常規(guī)滅菌的苗培養(yǎng)基上，在20001ux光下培養(yǎng)，llh/d，培養(yǎng)溫度28土 1°C，得到脫毒無菌苗；苗培養(yǎng)基組分及配比為MS基本培養(yǎng)基+0. 2mg/L NAA +0. 5mg/L 6-BA+活性炭O g/L 或 2 g/L 或 3. Og/L,蔗糖 30g/L,瓊脂 6 g/L 或 7 g/L 或 8g/L，調(diào) pH 至 5· 8 或 6· 2 ;(2)胚狀體誘導(dǎo)將步驟⑴獲得的脫毒無菌苗，取葉片切成O. 5或I. 0cm2，葉柄切成O. 8或1cm，接種到常規(guī)滅菌的胚狀體誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在20001ux光下培養(yǎng)，llh/d,培養(yǎng)溫度28±1°C，獲得珠芽魔芋胚狀體，其胚狀體外觀曾綠色球形狀；胚狀體誘導(dǎo)培養(yǎng)基組分及配比為MS 基本培養(yǎng)基 +0. 2mg/L NAA +0. 5mg/L 6-BA +0. lmg/L ΙΑΑ+0. 1-0. 2mg/LABA+30g/L 聚乙二醇，蔗糖 30g/L，瓊脂 6 g/L 或 7 g/L 或 8g/L，調(diào) pH 至 5· 8 或 6· 2 ;或 MS基本培養(yǎng)基 +0. 2mg/L NAA +0. 5mg/L 6-BA,鹿糖 30g/L,瓊脂 6 g/L 或 7 g/L 或 8g/L,調(diào) pH至 5. 8 或 6.2本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種珠芽類魔芋組織培養(yǎng)快繁方法，包括菌苗培養(yǎng)、胚狀體誘導(dǎo)、種球誘導(dǎo)、種球成熟培養(yǎng)步驟，其特征在于：(1)無菌苗培養(yǎng)：將珠芽類魔芋植株的幼嫩葉片、葉柄以及叢生芽常規(guī)滅菌后，將葉片切成0.5?1.0cm2，葉柄切成0.8?1cm長(zhǎng)，接種到常規(guī)滅菌的苗培養(yǎng)基上，在2000lux光下培養(yǎng)，11h/d，培養(yǎng)溫度28±1℃，得到脫毒無菌苗；苗培養(yǎng)基組分及配比為：MS基本培養(yǎng)基+0.2mg/L?NAA?+0.5mg/L?6?BA+活性炭0?3.0g/L，蔗糖30g/L，瓊脂6?8g/L，調(diào)pH至5.8?6.2；(2)胚狀體誘導(dǎo)：將步驟(1)獲得的脫毒無菌苗，取葉片切成0.5?1.0cm2，葉柄切成0.8?1.0cm，接到常規(guī)滅菌的胚狀體誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在2000lux光下培養(yǎng)，11h/d，培養(yǎng)溫度28±1℃，獲得珠芽類魔芋胚狀體；胚狀體誘導(dǎo)培養(yǎng)基組分及配比為：MS基本培養(yǎng)基+0.2mg/L?NAA?+0.5mg/L?6?BA?+0.1mg/L?IAA+0.1?0.2mg/L?ABA+30g/L聚乙二醇，蔗糖30g/L，瓊脂6?8g/L，調(diào)pH至5.8?6.2，或MS基本培養(yǎng)基+0.2mg/L?NAA?+0.5mg/L?6?BA，蔗糖30g/L，瓊脂6?8g/L，調(diào)pH至5.8?6.2；(3)種球誘導(dǎo)：將未產(chǎn)生新芽之前的珠芽類魔芋胚狀體，轉(zhuǎn)移至常規(guī)滅菌的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在2000lux光下培養(yǎng)，11h/d，培養(yǎng)溫度28±1℃，得到珠芽類魔芋幼小種球；種球誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組分及配比為：MS基本培養(yǎng)基+0.1mg/L?NAA?+3.0g/L活性炭+15g/L聚乙二醇，蔗糖30g/L，瓊脂6?8g/L，調(diào)pH至5.8?6.2；???????(4)種球成熟培養(yǎng)：將步驟(3)得到的珠芽類魔芋幼小種球轉(zhuǎn)移至常規(guī)滅菌的種球成熟培養(yǎng)基上，在2000lux光下培養(yǎng)，11h/d，培養(yǎng)溫度28±1℃，當(dāng)珠芽類魔芋種球上端中間有芽點(diǎn)，直徑大小為5mm以上，種球的外觀顏色略帶褐色時(shí)得到成熟分離的珠芽類魔芋種球；種球成熟培養(yǎng)基組分及其配比為：MS基本培養(yǎng)基+0.2mg/L?NAA?+0.5mg/L?6?BA?+0.2?1.0mg/LABA或30?50g/L聚乙二醇，蔗糖30?50g/L，瓊脂6?8g/L，調(diào)pH至5.8?6.2。...
【技術(shù)特征摘要】
1.一種珠芽類魔芋組織培養(yǎng)快繁方法，包括菌苗培養(yǎng)、胚狀體誘導(dǎo)、種球誘導(dǎo)、種球成熟培養(yǎng)步驟，其特征在于 (1)無菌苗培養(yǎng)將珠芽類魔芋植株的幼嫩葉片、葉柄以及叢生芽常規(guī)滅菌后，將葉片切成O. 5-1. Ocm2,葉柄切成O. 8-lcm長(zhǎng)，接種到常規(guī)滅菌的苗培養(yǎng)基上，在20001ux光下培養(yǎng)，llh/d，培養(yǎng)溫度28土1°C，得到脫毒無菌苗；苗培養(yǎng)基組分及配比為MS基本培養(yǎng)基+0. 2mg/L NAA +0. 5mg/L 6-BA+活性炭 0-3. Og/L,鹿糖 30g/L,瓊脂 6_8g/L,調(diào) pH 至·5. 8~6. 2 ； (2)胚狀體誘導(dǎo)將步驟⑴獲得的脫毒無菌苗，取葉片切成O.5-1. 0cm2，葉柄切成O. 8-1. 0cm，接到常規(guī)滅菌的胚狀體誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在20001ux光下培養(yǎng)，llh/d,培養(yǎng)溫度28土 TC，獲得珠芽類魔芋胚狀體；胚狀體誘導(dǎo)培養(yǎng)基組分及配比為MS基本培養(yǎng)基+0. 2mg/L NAA +0. 5mg/L 6-BA +0. lmg/L ΙΑΑ+0. 1-0. 2mg/L ABA+30g/L 聚乙二醇，鹿糖30g/L,瓊脂 6-8g/L,調(diào) pH 至 5. 8-6. ...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：趙建榮，余磊，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：昆明學(xué)院，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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