一種利用沼渣、沼液固體發酵生產放線菌肥料的方法，它涉及一種生產放線菌肥料的方法。本發明專利技術是要解決現有肥料用放線菌培養方法原料成本高的問題。本發明專利技術的方法為：一、試管培養種子培養：a、配制試管培養基；b、將放線菌接種于試管培養基中進行培養；二、固體孢子種子培養：a、配制種子培養基；b、將培養的放線菌接種于種子培養基中進行培養；三、發酵培養：a、制備發酵原料；b、向滅菌后的發酵原料接種放線菌的孢子，然后進行發酵，即得到放線菌肥料。本發明專利技術中利用沼氣發酵廢棄物——沼渣、沼液代替原有人工合成培養基作為發酵底物，降低了培養放線菌的成本。本發明專利技術應用于微生物領域。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種生產放線菌肥料的方法。
技術介紹
放線菌是一類與人類關系極為密切而又具有巨大應用價值的資源微生物，不僅在物質循環中起重要作用，而且以豐富的次生代謝產物產生能力而著稱，放線菌可代謝產生抗生索、氨基酸、酶制劑、維生素和除草劑等多種重要的生物活性物質。1929年青霉素的發現標志著抗生素時代的到來，隨后Waksman發現的鏈霉素解決了當時結核病這個社會問題而引起廣泛關注，并激發了人類對新抗篩選的興趣。截止2000年發現的微生物來源的新生理活性物質已達16000種，其中有70%以上是由放線菌產生的。放線菌來源的抗生素在臨床疾病治療中發揮著重要作用，臨床上使用的抗生素有2/3來源于放線菌；放線菌產生的 抗生素也是農用抗生素的最主要來源，如阿維鏈霉菌產生的阿維菌素是重要的殺蟲和殺蝸齊U、井岡霉素可用于防治水稻紋枯病等。放線菌中的弗蘭克氏菌可與非豆科植物共生，且同一種弗蘭克氏菌可以侵染不同種屬的宿主植物，為自然界的氮素循環和農林業的氮素供應做出了巨大貢獻，并有良好的應用前景。自1947年到1997年的50年間在JA上發表的共約4300種新微生物代謝產物產生菌及活性分布情況。因此，放線菌作為一類重要的微生物資源，研究受到了世界各國學者的極大重視。目前已在放線菌研究方面做了大量工作，其中最有成效的當屬放線菌來源的生物活性物質的研究、放線菌分類學研究和放線菌遺傳學研究等。放線菌分類學研究不僅可以為放鹽堿環境中放線菌多相分類及免培養研究線菌資源的開發利用和有效控制有害放線菌提供理論指導，而且可以為研究放線菌的系統演化關系提供材料和依據，豐富生物多樣性研究的內容。因而，放線菌分類研究具有理論和實際雙重意義。目前對于放線菌的培養普遍使用人工合成培養基，培養基中富含大量營養物質，但原料成本相對較高，應用于農業肥料用放線菌生產過程中提高了生產成本消耗。
技術實現思路
本專利技術是要解決現有肥料用放線菌培養方法原料成本高的問題，提供了本專利技術，是按以下步驟進行的一、試管培養種子培養a、配制試管培養基按質量份數稱取淀粉2 2. 5份、硝酸鉀O. I O. 2份、磷酸二氫鉀O. 03 O. 05份、硫酸鎂O. 001 O. 002份、瓊脂2 2. 2份與95 96份水混合均勻，然后進行高溫滅菌，即得到試管培養基；b、將放線菌接種于試管培養基中，在培養溫度為28 32°C的條件下，斜面靜置培養48 96h，然后用ImL無菌水洗脫試管斜面培養物后，得到洗脫液；二、固體孢子種子培養c、配制種子培養基將小米與水按質量比為I : (I 2)的比例混合，浸泡20 24h，然后進行高溫滅菌，即得到種子培養基；d、將步驟一中的洗脫液接種于種子培養基中，在培養溫度為28 32°C的條件下，搖瓶培養72 120h，得到放線菌孢子菌液；三、發酵培養e、發酵原料的制備按質量份數稱取沼渣70 90份、麥麩皮10 30份和CaCO3O. 5 2份混合均勻，即得到發酵原料，用沼液調節發酵原料的含水量為40 45%，然后進行高溫滅菌；f、將步驟二中的放線菌孢子菌液按接種量為O. 5 5%接種于滅菌后的發酵原料中，然后在發酵溫度為28 32°C、發酵原料厚度為10 20cm的條件下進行發酵70 96h，即得到放線菌肥料。本專利技術利用沼氣發酵廢棄物一沼渣、沼液代替原有人工合成培養基作為發酵底物，降低了培養放線菌的成本，在培養過程中，通過對放線菌培養，使COD含量極高的沼液得以應用，避免了直接排放對環境造成的污染。具體實施例方式具體實施方式一本實施方式的，是按以下步驟進行的一、試管培養種子培養a、配制試管培養基按質量份數稱取淀粉2 2. 5份、硝酸鉀O. I O. 2份、磷酸二氫鉀O. 03 O. 05份、硫酸鎂O. 001 O. 002份、瓊脂2 2. 2份與95 96份水混合均勻，然后進行高溫滅菌，即得到試管培養基；b、將放線菌接種于試管培養基中，在培養溫度為28 32°C的條件下,斜面靜置培養48 96h,然后用ImL無菌水洗脫試管斜面培養物后，得到洗脫液；二、固體孢子種子培養c、配制種子培養基將小米與水按質量比為I : (I 2)的比例混合，浸泡20 24h，然后進行高溫滅菌，即得到種子培養基；d、將步驟一中的洗脫液接種于種子培養基中，在培養溫度為28 32°C的條件下，搖瓶培養72 120h，得到放線菌孢子菌液；三、發酵培養e、發酵原料的制備按質量份數稱取沼渣70 90份、麥麩皮10 30份和CaCO3O. 5 2份混合均勻，即得到發酵原料，用沼液調節發酵原料的含水量為40 45%，然后進行高溫滅菌；f、將步驟二中的放線菌孢子菌液按接種量為O. 5 5%接種于滅菌后的發酵原料中，然后在發酵溫度為28 32°C、發酵原料厚度為10 20cm的條件下進行發酵70 96h，即得到放線菌肥料。本實施方式中的接種量是指移入種子液的體積和接種后培養液體積的比例。本實施方式利用沼氣發酵廢棄物——沼渣、沼液代替原有人工合成培養基作為發酵底物，降低了培養放線菌的成本,在培養過程中，通過對放線菌培養,使COD含量極高的沼液得以應用，避免了直接排放對環境造成的污染。具體實施方式二 本實施方式與具體實施方式一不同的是步驟一中所述的按質量份數稱取淀粉2. 2份、硝酸鉀O. 15份、磷酸二氫鉀O. 04份、硫酸鎂O. 0015份、瓊脂2. I份與95. 5份水混合均勻。其他步驟和參數與具體實施方式一相同。具體實施方式三本實施方式與具體實施方式一或二不同的是步驟一中所述的高溫滅菌為在溫度為120°C的條件下滅菌30min。其他步驟和參數與具體實施方式一或二相同。具體實施方式四本實施方式與具體實施方式一至三之一不同的是步驟二中所述的將小米與水按質量比為I : I. 5的比例混合，浸泡24h。其他步驟和參數與具體實施例方式一至三之一相同。具體實施方式五本實施方式與具體實施方式一至四之一不同的是步驟二中所述的高溫滅菌為在溫度為120°C的條件下滅菌20min。其他步驟和參數與具體實施方式一至四之一相同。具體實施方式六本實施方式與具體實施方式一至五之一不同的是步驟三中所述的沼渣和沼液的制備方法為高溫沼氣發酵法，具體方法為按質量份數稱取新鮮牛糞40份、水60份混合均勻，厭氧54°C培養14天，培養剩余物即為沼渣和沼液。其他步驟和參數與具體實施方式一至五之一相同。具體實施方式七本實施方式與具體實施方式一至六之一不同的是步驟三中所述的高溫滅菌為在溫度為120°C的條件下滅菌40min。其他步驟和參數與具體實施方式一至六之一相同。具體實施方式八本實施方式與具體實施方式一至七之一不同的是步驟三中所述的按質量份數稱取沼渣80份、麥麩皮20份和CaCO3L 5份混合均勻，即得到發酵原料。其他步驟和參數與具體實施方式一至七之一相同。具體實施方式九本實施方式與具體實施方式一至八之一不同的是步驟三中所述的發酵溫度為30°C。其他步驟和參數與具體實施方式一至八之一相同。具體實施方式十本實施方式與具體實施方式一至九之一不同的是步驟三中所述的發酵原料厚度為15cm。其他步驟和參數與具體實施方式一至九之一相同。通過以下試驗驗證本專利技術的有益效果試驗I :本試驗，是按以下步驟進行的一、試管培養種子培養a、配制試管培養本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種利用沼渣、沼液固體發酵生產放線菌肥料的方法，其特征在于利用沼渣、沼液固體發酵生產放線菌肥料的方法是按以下步驟進行的：一、試管培養種子培養：a、配制試管培養基：按質量份數稱取淀粉2～2.5份、硝酸鉀0.1～0.2份、磷酸二氫鉀0.03～0.05份、硫酸鎂0.001～0.002份、瓊脂2～2.2份與95～96份水混合均勻，然后進行高溫滅菌，即得到試管培養基；b、將放線菌接種于試管培養基中，在培養溫度為28～32℃的條件下，斜面靜置培養48～96h，然后用1mL無菌水洗脫試管斜面培養物后，得到洗脫液；二、固體孢子種子培養：c、配制種子培養基：將小米與水按質量比為1∶(1～2)的比例混合，浸泡20～24h，然后進行高溫滅菌，即得到種子培養基；d、將步驟一中的洗脫液接種于種子培養基中，在培養溫度為28～32℃的條件下，搖瓶培養72～120h，得到放線菌孢子菌液；三、發酵培養：e、發酵原料的制備：按質量份數稱取沼渣70～90份、麥麩皮10～30份和CaCO30.5～2份混合均勻，即得到發酵原料，用沼液調節發酵原料的含水量為40～45％，然后進行高溫滅菌；f、將步驟二中的放線菌孢子菌液按接種量為0.5～5％接種于滅菌后的發酵原料中，然后在發酵溫度為28～32℃、發酵原料厚度為10～20cm的條件下進行發酵70～96h，即得到放線菌肥料。...
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：谷軍，張介馳，原韜，張曉彥，于德水，
申請(專利權)人：黑龍江省科學院微生物研究所，
類型：發明
國別省市：
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