人誘導多能干細胞的制備方法及其用途技術

本發明專利技術涉及一種腫瘤靶向顯像技術領域的人誘導多能干細胞的制備方法及其用途，所述制備方法包括如下步驟：將慢病毒轉染人成纖維細胞，得到人誘導多能干細胞。本發明專利技術還涉及所述人誘導多能干細胞在制備靶向體內腫瘤病灶制劑中的用途。本發明專利技術的人誘導多能干細胞能夠靶向體內腫瘤病灶，人誘導多能干細胞通過標記熒光磁性納米探針后，能夠通過靜脈注射后特異性富集于腫瘤病灶部位，同時還具有分子影像功能，示蹤細胞在活體狀態下在體內的分布。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于腫瘤靶向顯像
，具體涉及一種人誘導多能干細胞的制備方法及其用途。
技術介紹
腫瘤被認為是目前最難治愈的疾病之一，基因治療是治療腫瘤的一種有前景的手段。已經有研究報道間充質干細胞（MSCs）可以作為基因載體實現腫瘤治療，MSCs一般是從骨髓、脂肪、真皮等組織中分離得到，從這些組織中分離MSCs需要選擇合適的供體并進行侵入性操作。而且從單個供體中取得MSCs是有限的，并且不能進行長期的增殖，這些都影響了MSCs作為載體進行基因治療的可操作性。胚胎干細胞是一種來自于囊胚的內細胞團的全能干細胞，能夠在體外無限增值而不喪失其分化的潛能，并且胚胎干細胞（ESCs）相對于其他細胞，易于進行基因改造，更適合作為基因載體，但是胚胎干細胞具有來源受限、倫理道德及操作技術等因素的限制，發展較為緩慢，而誘導性多潛能干細胞(induced?pluripotent?stem?cells,iPSCs)是使體細胞重編程獲得的具有胚胎干細胞樣特性的多能干細胞，現在iPSCs已經可以取代ESCs，從而克服了ESCs來源受限、倫理道德限制等問題，因此應用iPSCs作為“載體”細胞將為腫瘤研究帶來了治療希望。到目前為止，經對現有技術的文獻檢索，發現Hannon等在《Nature》（自然）雜志2004年第431卷第7006期371-378頁上發表文章“Unlocking?the?potential?of?thehuman?genome?with?RNA?interference”，該文報道了通過轉基因技術，向人類胚胎干細胞中添加了一個基因，該基因可以控制干細胞表達一種名為TRAIL的抗癌分子，當將這種轉基因干細胞注入長有腦瘤的老鼠體內時，轉基因干細胞便附著到腦瘤細胞上，并釋放出TRAIL分子。實驗結束后，這些老鼠腦瘤的體積平均縮小了50％，最多的甚至縮小了70％。2012年崔大祥等人又在《Theranostics》（診療）雜志第2卷第6期618-628頁發表了文章“DiR-labeled?Embryonic?Stem?Cells?for?Targeted?Imaging?of?in?vivoGastric?Cancer?Cells”，該文報道了小鼠胚胎干細胞具有主動靶向識別體內胃癌細胞的作用，并且這種遷移作用可能是由于體內趨化因子CXCL12與CXCR4配對作用所導致。以上研究都發現了ESCs具有靶向識別與治療腫瘤的效果，但是，至今為止，還沒有關于iPSCs靶向識別體內腫瘤細胞方面的報道。實際上iPSCs具有來源方便、實現個體化治療、抗免疫排斥性、提高患者自身免疫力等優點，在腫瘤的早期預警與治療方面具有很好的應用前景，是一種有應用前景的干細胞基治療腫瘤的工具。
技術實現思路
本專利技術的目的在于彌補現有技術的不足，提供一種人誘導多能干細胞的制備方法及其用途。本專利技術的人誘導多能干細胞能夠靶向體內腫瘤病灶，人誘導多能干細胞通過標記熒光磁性納米探針后，能夠通過靜脈注射后特異性富集于腫瘤病灶部位，同時還具有分子影像功能，示蹤細胞在活體狀態下在體內的分布。本專利技術的目的是通過以下技術方案實現的：本專利技術的第一個目的在于提供一種人誘導多能干細胞的制備方法，包括如下步驟：將慢病毒轉染人成纖維細胞，得到人誘導多能干細胞。優選地，所述人成纖維細胞為人真皮成纖維細胞或人包皮成纖維細胞。優選地，所述慢病毒為攜帶有Oct4、Sox2、Nanog和Lin28轉錄因子的慢病毒。優選地，所述人成纖維細胞是通過原代培養的方法從腫瘤病人體內獲得的人成纖維細胞。本專利技術的第二個目的在于提供前述人誘導多能干細胞在制備靶向體內腫瘤病灶制劑中的用途。優選地，所述用途包括如下步驟：將人誘導多能干細胞的制劑注射入人體，人誘導多能干細胞能夠主動識別體內腫瘤病灶。優選地，所述腫瘤為胃癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、肝癌、膀胱癌或腦膠質瘤。優選地，所述用途包括如下步驟：通過熒光標記人誘導多能干細胞，注射入人體，體內示蹤，顯示人誘導多能干細胞在體內的分布，進而顯示體內腫瘤病灶的位置。優選地，所述熒光標記使用的材料為無機熒光納米材料。優選地，所述無機熒光納米材料為量子點、熒光磁性納米粒子、二氧化硅包覆的熒光納米粒子或上轉換材料?，F有技術相比，本專利技術具有如下的有益效果：本專利技術提供了一種人誘導多能干細胞在制備靶向體內腫瘤病灶制劑中的用途，本專利技術的人誘導多能干細胞能夠靶向體內腫瘤病灶，人誘導多能干細胞通過標記熒光磁性納米探針后，能夠通過靜脈注射后特異性富集于腫瘤病灶部位，同時還具有分子影像功能，示蹤細胞在活體狀態下在體內的分布。附圖說明通過閱讀參照以下附圖對非限制性實施例所作的詳細描述，本專利技術的其它特征、目的和優點將會變得更明顯：圖1為實施例1中的人iPSCs的堿性磷酸酶染色圖；圖2為實施例1中的人iPSCs的免疫熒光染色圖；圖3為實施例1中懸浮培養形成類胚體（EB）的形態圖（A）和RT-PCR定量分析人iPSCs和EB中各胚層特異性基因的表達（B）；圖4為實施例2中未標記的人iPSCs細胞（A）和熒光磁性納米粒子標記的人iPSCs細胞（B）的可見光與熒光成像復合圖；圖5為實施例2中未標記的人iPSCs細胞（A）和熒光磁性納米粒子標記的人iPSCs細胞（B）的普魯士藍-核固紅復染照片圖；圖6為實施例2中FMNPs（A）和FMNPs標記的iPSCs（B）在尾靜脈注射進入荷瘤小鼠體內之后1h和6h時間點小鼠活體熒光成像圖。具體實施方式下面結合具體實施例，進一步闡述本專利技術。這些實施例僅用于說明本專利技術而不用于限制本專利技術的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，例如Sambrook等分子克?。簩嶒炇沂謨裕∟ew?York:Cold?Spring?HarborLaboratory?Press,1989）中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。實施例1、人iPSCs的制備本實施例涉及一種人iPSCs的制備，包括如下步驟：步驟一，細胞制備小鼠胚胎成纖維細胞（mouse?embryo?fibroblast，MEF）購自上海斯丹賽生物技術有限公司，傳代培養至第三～五代的MEF細胞作為滋養層細胞；原代培養人真皮成纖維細胞（Human?Dermal?Fibroblasts，HDF）：無菌條件下取患者腹部2～3cm2的皮膚，去除皮下組織和表皮層，用膠原酶消化真皮層，保持溫度為37℃，時間為2個小時，然后擠壓消化過的皮膚，并用單層紗布過濾，培養液用D本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種人誘導多能干細胞的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：將慢病毒轉染人成纖維細胞，得到人誘導多能干細胞。

【技術特征摘要】
1.一種人誘導多能干細胞的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：將慢病毒轉
染人成纖維細胞，得到人誘導多能干細胞。
2.如權利要求1所述的人誘導多能干細胞的制備方法，其特征在于，所述人成纖
維細胞為人真皮成纖維細胞或人包皮成纖維細胞。
3.如權利要求1所述的人誘導多能干細胞的制備方法，其特征在于，所述慢病毒
為攜帶有Oct4、Sox2、Nanog和Lin28轉錄因子的慢病毒。
4.如權利要求1所述的人誘導多能干細胞的制備方法，其特征在于，所述人成纖
維細胞是通過原代培養的方法從腫瘤病人體內獲得的人成纖維細胞。
5.一種如權利要求1所述的人誘導多能干細胞在制備靶向體內腫瘤病灶制劑中的
用途。
6.如權利要求5所述的用途，其特...

【專利技術屬性】
技術研發人員：崔大祥，阮靜，李超，
申請(專利權)人：上海交通大學，
類型：發明
國別省市：