本發(fā)明專利技術(shù)公開(kāi)了一種測(cè)定水溶性維生素的方法，步驟包括：（1）制備維生素標(biāo)準(zhǔn)溶液，利用高效液相色譜儀對(duì)其檢測(cè)，得保留時(shí)間并生成標(biāo)準(zhǔn)曲線；（2）取樣品預(yù)處理得到溶液樣品，利用所述高效液相色譜儀在與步驟（1）相同的條件下對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，得到樣品保留時(shí)間和峰面積；（3）將步驟（2）中獲得的保留時(shí)間和峰面積與步驟（1）中得到的保留時(shí)間及所述標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)，通過(guò)計(jì)算確定維生素含量。步驟（2）中預(yù)處理步驟包括：超聲提取，將提取液于沸水中煮沸20-30min，冷卻至室溫，定容，搖勻；靜置，取上清液過(guò)濾。采用本發(fā)明專利技術(shù)方法避免重復(fù)制樣的繁瑣過(guò)程，一次性完成四種維生素的測(cè)試，檢測(cè)速度提高，且檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種維生素的檢測(cè)方法，尤其是關(guān)于動(dòng)物飼料中水溶性維生素的檢測(cè)方法，屬于化學(xué)成份的檢測(cè)
技術(shù)介紹
水溶性維生素是指能在水中溶解的維生素，主要包括維生素B1、維生素B2、維生素B6、煙酰胺和維生素C等。其中，維生素B1又稱硫胺素，參與動(dòng)物體內(nèi)糖類代謝，維持神經(jīng)、消化和循環(huán)系統(tǒng)的正常功能。維生素B2又稱核黃素，在生物氧化的呼吸鏈中起遞氫作用，參與動(dòng)物體內(nèi)多種物質(zhì)代謝和能量代謝。維生素B6參與氨基酸、糖原代謝和激素的合成，能促進(jìn)消化、吸收，增強(qiáng)免疫力。煙酰胺是輔酶I和輔酶II的組成部分，是動(dòng)物體內(nèi)合成多種脫氫酶的輔酶的重要原料。上述水溶性維生素對(duì)生命活動(dòng)具有重要作用。維生素通常是從食物中攝取的，人工飼養(yǎng)的動(dòng)物食物源固定，維生素的攝取途徑單一。控制好飼料中的維生素添加量就成了防止家畜缺乏維生素的主要手段。現(xiàn)有飼料工業(yè)檢測(cè)水溶性維生素B:、B2、B6和煙酰胺的方法，是先將樣品分別預(yù)處理后，再分別按照以下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)GB/T14700-2002《飼料中維生素B1的測(cè)定》、GB/T14701-2002《飼料中維生素B2的測(cè)定》、GB/T14702-2002《飼料中維生素B6的測(cè)定》和NY/T2130-2012《飼料中煙酰胺的測(cè)定》。上述水溶性維生素檢測(cè)方法存在以下不足(I)檢測(cè)分別進(jìn)行，操作重復(fù)，檢測(cè)周期冗長(zhǎng)。(2)前處理過(guò)程中，所用的提取液、流動(dòng)相為多種不同試劑，需分別配置，操作重復(fù)，過(guò)程繁瑣。(3)為消除檢測(cè)結(jié)果中拖尾現(xiàn)象，流動(dòng)相配制時(shí)需用額外添加三乙胺。三乙胺是一種易燃、易爆、有毒、具強(qiáng)刺激性的藥品，增加測(cè)試過(guò)程危險(xiǎn)性。(4)維生素B1和B2結(jié)構(gòu)類似，分離較困難。先分別提取再檢測(cè)，維生素B1和B2相互影響，檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中檢測(cè)過(guò)程繁雜，檢測(cè)周期冗長(zhǎng)、分離效果不佳等不足，提出。本專利技術(shù)的檢測(cè)方法可以在較短的時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)對(duì)維生素BpByB6和煙酰胺的同時(shí)分離及精確檢測(cè)。為了實(shí)現(xiàn)上述專利技術(shù)目的，本專利技術(shù)提供了以下技術(shù)方案一種水溶性維生素的檢測(cè)方法，包括以下步驟(I)制備維生素B1、B2、B6和煙酰胺的標(biāo)準(zhǔn)溶液，利用高效液相色譜儀對(duì)其檢測(cè)，得所述維生素的保留時(shí)間，并生成維生素濃度與峰面積之間對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線；(2)取飼料樣品進(jìn)行預(yù)處理，然后利用所述高效液相色譜儀在與步驟(I)相同的條件下對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，得到所述溶液樣品的各組份的保留時(shí)間和檢測(cè)峰面積；(3)將步驟(2)中獲得的所述溶液樣品的各組分的保留時(shí)間和檢測(cè)到的峰面積與步驟(I)中得到的保留時(shí)間及所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)，計(jì)算確定飼料中的維生素B2,B6和煙酰胺的含量；進(jìn)一步的，所述步驟(2)中的預(yù)處理包括(201)將詞料樣品用尚子對(duì)溶液超聲提取,得提取液；(202)將步驟(201)所得提取液于沸水中煮沸20_30min ；(203)將步驟(202)得到的提取液冷卻至室溫，定容，搖勻；靜置，取上清液過(guò)濾；所述離子對(duì)溶液為含有4-8mmol/L己燒磺酸鈉和15_25mmol/L磷酸的水溶液。進(jìn)一步，上述水溶性維生素的檢測(cè)方法中，所述離子對(duì)溶液為含有5mmol/L己烷磺酸鈉和20mmol/L磷酸的離子對(duì)溶液。進(jìn)一步，上述水溶性維生素的檢測(cè)方法中，所述高效液相色譜的流動(dòng)相為所述離子對(duì)溶液。進(jìn)一步，上述水溶性維生素的檢測(cè)方法中，所述高效液相色譜的流動(dòng)相分為流動(dòng)相A和流動(dòng)相B，其中流動(dòng)相A為所述離子對(duì)溶液，流動(dòng)相B為乙腈。高效液相色譜檢測(cè)過(guò)程采用梯度洗脫方式，優(yōu)選梯度洗脫程序如表I。表I用于洗脫水溶性維生素的梯度洗脫程序權(quán)利要求1.一種水溶性維生素的檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟 (1)制備維生素BpByB6和煙酰胺的標(biāo)準(zhǔn)溶液，利用高效液相色譜儀對(duì)其檢測(cè)，得所述維生素的保留時(shí)間，并生成維生素濃度與峰面積之間對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線； (2)取飼料樣品進(jìn)行預(yù)處理，然后利用所述高效液相色譜儀在與步驟(I)相同的條件下對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，得到所述溶液樣品的各組份的保留時(shí)間和檢測(cè)峰面積； (3)將步驟(2)中獲得的所述溶液樣品的各組分的保留時(shí)間和檢測(cè)到的峰面積與步驟(O中得到的保留時(shí)間及所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)，計(jì)算確定飼料中的維生素V B2, B6和煙酰胺的含量； 所述步驟(2)中的預(yù)處理包括 (201)將飼料樣品用離子對(duì)溶液超聲提取，得提取液； (202)將步驟(201)所得提取液于沸水中煮沸20-30min； (203)將步驟(202)得到的提取液冷卻至室溫，定容，搖勻；靜置，取上清液過(guò)濾； 所述離子對(duì)溶液為含有4-8mmol/L己烷磺酸鈉和15-25mmol/L磷酸的水溶液。2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)水溶性維生素的方法，其特征在于，所述離子對(duì)溶液為含有5mmol/L己燒磺酸鈉和20mmol/L磷酸的離子對(duì)溶液。3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)水溶性維生素的方法，其特征在于，步驟(203)中提取液過(guò)濾用的是O. 45 μ m水相濾膜。4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)水溶性維生素的方法，其特征在于，所述高效液相色譜的流動(dòng)相為權(quán)利要求I中所述離子對(duì)溶液。5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)水溶性維生素的方法，其特征在于，高效液相色譜流動(dòng)相分為A，B兩種，A為權(quán)利要求I中所述的離子對(duì)溶液，B為乙腈，高效液相色譜檢測(cè)過(guò)程采用梯度洗脫方式。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)水溶性維生素的方法，其特征在于，檢測(cè)過(guò)程梯度洗脫程序如下流動(dòng)相A、B初始比例為91:9，待基線平衡后進(jìn)樣，同時(shí)調(diào)整流動(dòng)相A、B比例在12min內(nèi)線性調(diào)整為80:20。7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)水溶性維生素的方法，其特征在于，步驟(201)預(yù)處理中，飼料樣品與提取液比例是重量體積比g/L，2 Γ5 :1。8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)水溶性維生素的方法，其特征在于，高效液相色譜檢測(cè)條件色譜柱，資生堂 UG120 (5 μ m, 4. 6mm i. d. X 250mm);溫度，30<€ ;流速，I. OmL/min ;檢測(cè)波長(zhǎng)210nm。全文摘要本專利技術(shù)公開(kāi)了一種測(cè)定水溶性維生素的方法，步驟包括(1)制備維生素標(biāo)準(zhǔn)溶液，利用高效液相色譜儀對(duì)其檢測(cè)，得保留時(shí)間并生成標(biāo)準(zhǔn)曲線；(2)取樣品預(yù)處理得到溶液樣品，利用所述高效液相色譜儀在與步驟(1)相同的條件下對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，得到樣品保留時(shí)間和峰面積；(3)將步驟(2)中獲得的保留時(shí)間和峰面積與步驟(1)中得到的保留時(shí)間及所述標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)，通過(guò)計(jì)算確定維生素含量。步驟(2)中預(yù)處理步驟包括超聲提取，將提取液于沸水中煮沸20-30min，冷卻至室溫，定容，搖勻；靜置，取上清液過(guò)濾。采用本專利技術(shù)方法避免重復(fù)制樣的繁瑣過(guò)程，一次性完成四種維生素的測(cè)試，檢測(cè)速度提高，且檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。文檔編號(hào)G01N30/88GK102980967SQ20121058454公開(kāi)日2013年3月20日 申請(qǐng)日期2012年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月28日專利技術(shù)者梁玉樹, 王虎, 何蕓蕓 申請(qǐng)人:新希望乳業(yè)控股有限公司本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種水溶性維生素的檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：（1）制備維生素B1、B2、B6和煙酰胺的標(biāo)準(zhǔn)溶液，利用高效液相色譜儀對(duì)其檢測(cè)，得所述維生素的保留時(shí)間，并生成維生素濃度與峰面積之間對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線；（2）取飼料樣品進(jìn)行預(yù)處理，然后利用所述高效液相色譜儀在與步驟（1）相同的條件下對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，得到所述溶液樣品的各組份的保留時(shí)間和檢測(cè)峰面積；（3）將步驟（2）中獲得的所述溶液樣品的各組分的保留時(shí)間和檢測(cè)到的峰面積與步驟（1）中得到的保留時(shí)間及所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)，計(jì)算確定飼料中的維生素B1、B2、B6和煙酰胺的含量；所述步驟(2)中的預(yù)處理包括：（201）將飼料樣品用離子對(duì)溶液超聲提取，得提取液；（202）將步驟（201）所得提取液于沸水中煮沸20?30min；（203）將步驟（202）得到的提取液冷卻至室溫，定容，搖勻；靜置，取上清液過(guò)濾；所述離子對(duì)溶液為含有4?8mmol/L己烷磺酸鈉和15?25mmol/L磷酸的水溶液。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：梁玉樹，王虎，何蕓蕓，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：新希望乳業(yè)控股有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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