一種用中低壓制備柱分離決明子蒽醌成分的方法技術

本發明專利技術公開了一種用中低壓制備柱分離決明子蒽醌成分的方法，其步驟：A.將干燥后的決明子種子粉碎，裝入三角瓶，置入超聲儀中超聲，再將超聲后的物質過濾，合并過濾液，回收過濾液中的乙醇，得到干浸膏；B.將乙醇提取決明子的干浸膏倒入三角瓶，用乙酸乙酯超聲萃取，再將超聲后的物質過濾回收，合并過濾液，回收過濾液中的乙酸乙酯；C.將萃取液用硅膠拌勻，蒸干至無乙酸乙酯氣味，得到6個粗晶；D.將中低壓制備色譜上串聯的硅膠柱子換成C18柱、將6個粗晶用甲醇溶解，注入C18柱中，用55%甲醇-水洗脫，再以TCL檢識輔助檢測，得到6個單晶。方法易行，提供簡便，工藝先進，極大地加快分離速度，極大地減少了分離成本，純度可以達到95%以上。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及從藥用植物中提取分離蒽醌類成分的
，更具體涉及一種提取分離決明子蒽醌活性成分的方法，這些活性成分有降血脂、抗動脈粥樣硬化、降壓、抑菌、增強機體免疫力和抗衰老作用，能廣泛用于醫藥衛生行業。
技術介紹
決明子為豆科植物決明Cassia obtusifola L.或小決明C. tora L.的干燥成熟種子，具有清肝明目、潤腸通便之功效，是國家衛生部公布的69種藥食同源的物種之一。 現代藥理學研究表明決明子具有較好的降血脂、抗動脈粥樣硬化作用，還具有較好降壓、 抑菌、增強機體免疫力和抗衰老等多方面作用。決明子主要含有蒽醌類化合物。中低壓(O.Γ5Μ bar)制備色譜是目前先進的制備化合物單體的色譜技術，與高速逆流色譜(HSCCC)及高壓制備色譜(HPLC)相比，中低壓色譜更有洗脫溶劑選擇范圍大，分離樣品的量大，分離單體的量在g級以上，而HSCCC和HPLC制備色譜分離的量在mg級。另外，運行成本低，儀器要求配置低，而且用戶可以自己裝柱；還可使用預裝住，利用薄層色譜 (TLC)可以快速的建立分離方法，在發達國家，中低壓制備色譜是實驗室樣品分離制備的主流方法，已經基本取代常壓玻璃柱分離。
技術實現思路
本專利技術的目的是在于提供了， 方法易行，提供簡便，工藝先進，極大地加快分離速度，極大地減少了分離成本，分離得到的蒽醌類的成分，純度可以達到95%以上，不僅能用作標準品，還能提高醫藥產品的附加值。為了達到上述目的，本專利技術采用以下技術措施，其步驟是共分為4步，第一步為提取乙醇浸膏，第二步用乙酸乙酯萃取乙醇浸膏，第三步為將硅膠柱串聯到中低壓制備色譜，對決明子浸膏粗分，第四步將C18柱串聯到中低壓制備色譜，對決明子的粗分物進行精分。而得到高純度的蒽醌化合物系列，如決明子內酯-9-0-β -葡萄糖苷、橙黃決明素、決明素、美決明素、蘆薈大黃素、大黃酚。，其步驟是Α、將干燥后的決明子種子粉碎后過35-45目篩，裝入三角瓶，加入量為三角瓶容量的1/5，倒入95%的乙醇(乙醇水=95 :5)，乙醇倒入量為藥材重量的5 10倍。置入超聲儀中超聲3(T50min，再將超聲后的物質過濾，繼續用95%的乙醇超聲3(T50min，再將超聲后的物質過濾，重復本步驟3飛次，合并這3飛次的過濾液，回收過濾液中的乙醇，得到用乙醇提取決明子的干浸膏。B、將乙醇提取決明子的干浸膏倒入三角瓶，用3-5倍體積的乙酸乙酯超聲萃取 7 15min，再將萃取后的物質過濾，繼續用3_5倍的乙酸乙酯超聲萃取7 15min，再將超聲后的物質過濾，重復本步驟3飛次，合并這3飛次的過濾液，回收過濾液中的乙酸乙酯，一直回收到濾液中的乙酸乙酯與浸膏成1:1的體積的萃取液(回收后的萃取液不成膏狀，成液狀即可)，其目的是去掉部分乙醇浸膏中的雜質，也利于下一步拌勻在硅膠中時，蒸干溶劑。C、將萃取液用3倍量的400-500目娃膠拌勻，蒸干至無乙酸乙酯氣味(稱樣品娃膠)，取400ml和1500mL Flash柱各一個，400ml的柱裝樣品硅膠，1500ml的柱僅裝硅膠作為分離柱。二根柱都干法上樣；分別用石油醚洗脫至柱平衡，再將二根柱串聯，串聯后的柱子接到中低壓制備型色譜儀上，洗脫溶劑分為A和B，A為石油醚，B為乙酸乙酯丙酮=8:1， 洗脫溶劑的比例為B為2%，4%，8%的比例洗脫(2%即石油醚B=49:1)，在中低壓色譜柱的熒屏監控圖下收集流份，按監控圖出現的譜峰收集，再以TCL檢識輔助，取TCL檢測紫色斑點中Rf值一致的流份合并，收干流分中的溶劑后，得到6個粗晶，經用薄板層析及標準品對照確定為決明子內酯-9-0-β -葡萄糖苷、橙黃決明素、決明素、美決明素、蘆薈大黃素、大黃酚。所述的石油醚為無色透明液體，有煤油氣味。主要為戊烷和己烷的混合物。不溶于水，溶于無水乙醇、苯、氯仿、油類等多數有機溶劑。易燃易爆，與氧化劑可強烈反應。主要用作溶劑和油脂處理。通常用鉬重整抽余油或直餾汽油經分餾、加氫或其他方法制得。所述的中低壓色譜與高壓色譜和常壓色譜相比，其優勢為中低壓色譜更有洗脫溶劑選擇范圍大，分離樣品的量大，而高壓色譜分離的樣品量少，對溶劑的選擇范圍非常窄，對儀器的條件要求高，成本也高，傳統的常壓耗時間長，分離的效果差。D、將中低壓制備色譜上串聯的二根硅膠柱子換成C18柱、將決明子內酯-9-0-β-葡萄糖苷、橙黃決明素、決明素、美決明素、蘆薈大黃素、大黃酚的粗晶用甲醇溶解，注入C18柱中，用55%甲醇冰=55:45甲醇-水洗脫，再以TCL檢識輔助檢測，得到六個單晶，用液相色譜檢測六個化合物的純度為95-99%。ODS柱是一種常用的反相色譜柱，也叫C18柱；由于它是長鏈烷基鍵合相，有較高的碳含量和更好的疏水性，對各種類型的生物大分子有更強的適應能力，因此在生物化學分析工作中應用的最為廣泛。ODS柱是十八烷基硅烷鍵合硅膠填料(Octadecylsilyl，簡 稱 0DS)。這種填料在反相色譜中發揮本專利技術與現有技術相比，具有以下優點和效果本專利技術與現有決明子分離技術相比，分離時間只有以往的1/10都不到，產品可以根據分離柱的多少及柱子成本分為多個等級。可以在極短的時間內得到多個有效成分，而且純度高，是傳統的方法無法比擬的。本方法的建立可以使得一些在短期內需要高純度化合物及標準品，而市面又無法買到的人盡快得到樣品。從而加快研究進展。具體實施方式，其步驟是A、將干燥后的IKg決明子種子粉碎后過35或38或40或42或45目篩，裝入三角瓶，加入量為三角瓶容量的1/5，倒入95%的乙醇(乙醇水=95 :5)，乙醇倒入量為藥材重量的5或6或7或8或9或10倍。置入超聲儀中超聲30或35或59或42或46或50min，再將超聲后的物質過濾，繼續用95%的乙醇超聲30或35或38或44或48或50min，再將超聲后的物質過濾，重復本步驟3或4或5次，合并這3飛次的過濾液，回收過濾液中的乙醇，得到用乙醇提取決明子的干浸膏122g，得率為12. 2%。B、將乙醇提取決明子的干浸膏倒入三角瓶，用3或4或5倍體積的乙酸乙酯超聲萃取7或9或11或13或15min，再將萃取后的物質過濾，繼續用3飛倍的乙酸乙酯超聲萃取7或8或10或12或14或15min，再將超聲后的物質過濾，重復本步驟3或4或5次，合并這3或4或5次的過濾液，回收過濾液中的乙酸乙酯，一直回收到濾液中的乙酸乙酯與浸膏成1:1的體積，乙酸乙酯萃取浸膏為42. 7g，得率為35%。C、萃取液用其3倍量的400或450或480或500目硅膠拌勻，蒸干至無乙酸乙酯氣味(稱樣品硅膠)，取400ml和1500mL Flash柱各一個，400ml的柱裝樣品硅膠，1500ml的柱僅裝硅膠作為分離柱。二根柱都干法上樣；分別用石油醚洗脫至柱平衡，再將二根柱串聯， 串聯后的柱子接到中低壓制備型色譜儀上，洗脫溶劑分為A和B，A為石油醚，B為乙酸乙酯 丙酮=8:1，洗脫溶劑的比例為=B為2%，4%，8%的比例洗脫(2%即石油醚B=49:1 )，在中低壓色譜柱的熒屏監控圖下收集流份，按監控圖出現的譜峰收集，再以TCL檢識輔助，取TCL檢測紫色斑點中Rf值一致的流份合并，收干流分中的溶劑后，得到6個粗晶，經用薄板層析及標準品對照確定為決明子內酯-9-0-β-葡萄糖苷本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種用中低壓制備柱分離決明子蒽醌成分的方法，其步驟是:A、將干燥后的決明子種子粉碎后過35?45目篩，裝入三角瓶，加入量為三角瓶容量的1/5，倒入95%的乙醇，乙醇倒入量為藥材重量的5~10倍，置入超聲儀中超聲30~50min，再將超聲后的物質過濾，繼續用95%的乙醇超聲30~50min，再將超聲后的物質過濾，重復本步驟3~5次，合并這3~5次的過濾液，回收過濾液中的乙醇，得到用乙醇提取決明子的干浸膏；B、將乙醇提取決明子的干浸膏倒入三角瓶，用3?5倍體積的乙酸乙酯超聲萃取7~15min，再將萃取后的物質過濾，繼續用3?5倍的乙酸乙酯超聲萃取7~15min，再將超聲后的物質過濾回收，重復本步驟3~5次，合并這3~5次的過濾液，回收過濾液中的乙酸乙酯，一直回收到濾液中的乙酸乙酯與浸膏成1:1的體積的萃取液；C、?將萃取液用3倍量的400?500目硅膠拌勻，蒸干至無乙酸乙酯氣味，取400ml和1500mL?Flash柱各一個，400ml的柱裝樣品硅膠，1500ml的柱僅裝硅膠作為分離柱，二根柱都干法上樣；分別用石油醚洗脫至柱平衡，再將二根柱串聯，串聯后的柱子接到中低壓制備型色譜儀上，洗脫溶劑分為A和B?，A為石油醚，?B為乙酸乙酯：丙酮=8:1，洗脫溶劑的比例為：B為2%，4%，8%的比例洗脫，在中低壓色譜柱的熒屏監控圖下收集流份，按監控圖出現的譜峰收集，再以TCL檢識輔助，取TCL檢測紫色斑點中Rf值一致的流份合并，收干流分中的溶劑后，得到決明子內酯?9?O?β?葡萄糖苷、橙黃決明素、決明素、美決明素、蘆薈大黃素、大黃酚；D、將中低壓制備色譜上串聯的二根硅膠柱子換成C18柱、將決明子內酯?9?O?β?葡萄糖苷、橙黃決明素、決明素、美決明素、蘆薈大黃素、大黃酚的粗晶用甲醇溶解，注入C18柱中，用55%甲醇：水=55:45甲醇?水洗脫，再以TCL檢識輔助檢測，得到六個單晶。...

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：袁曉，袁萍，
申請(專利權)人：中國科學院武漢植物園，
類型：發明
國別省市：