本發明專利技術涉及酸性脲酶的生產方法，屬于酶制劑技術領域。本發明專利技術要解決的技術問題是提供一種生產酸性脲酶的方法。本發明專利技術的酸性脲酶的生產方法，包括如下步驟：利用聚多曲霉Aspergillus?sydowii?JNC-U5?CGMCC?No.6577發酵，提取，得到脲酶制劑。本發明專利技術方法所需設備簡單，操作方便，可工業化大生產酸性脲酶。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及，屬于酶制劑
技術介紹
脲酶(Urease, urea amidohydrolase, EC 3. 5.),又稱尿素氨基水解酶，存在于大多數細菌、曲霉和高等植物里。它是一種酰胺酶、能使有機物質分子中酶鍵水解。其作用極為專性的，它僅能水解尿素，水解的最終產物是氨和碳酸。有部分微生物產生的酸性脲酶(acid urease)不同于植物中提取的中性、偏堿性脲酶，酸性脲酶能耐受酸性環境，在ρΗ4· O 5. 5的體系中仍具有活性。在國外，乳酸桿菌已經被用于生產脲酶酶制劑，有效地減少葡萄酒中尿素含量。在國內，脲酶已經被用于降低黃酒中尿素含量。但是，酒用脲酶在我國尚未形成生產 能力，目前所用的酶制劑均從國外進口 。例如，浙江古越龍山紹興酒股份有限公司購買日本生產的酒用酸性脲酶去除黃酒中的尿素，該酸性脲酶在紹興黃酒中作用時間48h左右，可有效除去黃酒中約80%的尿素。隨著國內對酸性酒用脲酶的需求量不斷增加，迫切需要解決酒用脲酶在國內生產能力不足的現狀，因此酒用脲酶的研究對我國釀酒業的發展，拓展國際市場等方面均有深遠的意義。目前，江南大學分離獲得腸出血性大腸埃希氏菌，利用該菌株生產出純度較高的酒用脲酶制劑，然后將酶制劑添加到黃酒中，24h后尿素去除率為70%以上。由于酒用酸性脲酶被作為食品添加劑直接添加到葡萄酒或者黃酒中，而目前報道的產脲酶菌株都是細菌，普遍從動物糞便(鳥糞、鼠糞、牛羊糞便)，農田土壤，污泥等中分離獲得，并且需要一系列復雜的酶純化提取工藝才能獲得高純度的酶制劑，從而極大的增加了生產成本,也增加了大規模生產的難度。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是提供。本專利技術的技術方案是，包括如下步驟利用聚多曲霉Aspergillus sydowii JNC-U5 CGMCC No. 6577 發酵，提取，得到脲酶制劑。進一步的，所述的發酵是指將聚多曲霉接種到麥芽汁培養基中，于3(T35°C、15(T250rpm、溶氧(P02)100%條件下發酵5 7天；其中，聚多曲霉的孢懸液濃度為105 106個/mL,孢懸液的體積占麥芽汁培養基體積的2%。。所述的PO2是發酵罐好氧培養時候的一個參數，即發酵罐在運行時，溫度、攪拌速度、PH的實際值達到穩定狀態，且通入空氣使溶氧值不再變化時，將溶氧值校準為100%。校準好后在進行接種。優選的，于35°C，150rpm，培養時間為7天。進一步的，所述的麥芽汁培養基的制備方法如下取大麥芽粉碎，加3飛倍(優選4倍)于麥芽質量的55飛(TC的水，在55飛(TC下保溫3 4h，過濾，煮沸，過濾，將麥芽汁濃度調整到5 7波美(°BX)(波美是糖度的單位，本專利技術中可用蒸餾水調糖度)，115°C下滅菌20分鐘備用。進一步的，所述的提取指在發酵完畢后收集菌絲，干燥菌絲，粉碎菌絲。優選的，收集菌絲時用無菌水洗滌菌絲。優選的，粉碎菌絲過80目篩，收集菌絲粉末即得到酶制劑。本專利技術還提供了所述在生產酸性脲酶中的用途。本專利技術方法利用高產脲酶的聚多曲霉生產酸性脲酶。該菌株產脲酶活性可達到49. 7U。本專利技術根據聚多曲霉的特性，對發酵條件以及提取工藝進行了研究優化，使得本專利技術的生產方法工藝簡單、投入少，可規模化大生產。本專利技術方法為酸性脲酶的生產提供了新的選擇。 本專利技術的聚多曲霉(Aspergillus sydowii)JNC_U5于2012年9月18日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏號為CGMCC No. 6577，保藏地址北京市朝陽區北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所，郵編100101。附圖說明圖1pH對脲酶活性的影響圖2尿素去除率測定具體實施例方式本專利技術的技術方案是，包括如下步驟利用聚多曲霉Aspergillus sydowii JNC-U5 CGMCC No. 6577 發酵，提取，得到脲酶制劑。進一步的，所述的發酵是指將聚多曲霉接種到麥芽汁培養基中，于3(T35°C、15(T250rpm、溶氧(P02)100%條件下發酵5 7天；其中，聚多曲霉的孢懸液濃度為105 106個/mL,孢懸液的體積占麥芽汁培養基體積的2%。。所述的PO2是發酵罐好氧培養時候的一個參數，即發酵罐在運行時，溫度、攪拌速度、PH的實際值達到穩定狀態，且通入空氣使溶氧值不再變化時，將溶氧值校準為100%。校準好后在進行接種。優選的，于35°C，150rpm，培養時間為7天。進一步的，所述的麥芽汁培養基的制備方法如下取大麥芽粉碎，加3飛倍于麥芽質量的55飛(TC的水，在55飛(TC下保溫3 4h，過濾，煮沸，過濾，將麥芽汁濃度調整到5 7°BX, 115°C下滅菌20分鐘備用。進一步的，所述的提取指在發酵完畢后收集菌絲，干燥菌絲，粉碎菌絲。優選的，收集菌絲時用無菌水洗滌菌絲，以去除發酵液中的培養基成分。優選的，粉碎菌絲過80目篩，收集菌絲粉末即得到酶制劑。本專利技術方法操作簡單，產量高，可用于生產酸性脲酶。本專利技術還提供了所述在生產酸性脲酶中的用途。實施例1菌株篩選1、菌株的初篩材料四川劍南春(集團)有限責任公司使用的酒曲培養基蛋白胨10. 0g，葡萄糖18g，0. 4%酚酞溶液3mL，氯化鈉5. 0g，磷酸二氫鉀2. Og,瓊脂20. O,蒸餾水1000mL。除酚酞外，溶解上述各種成分，并調pH為6. 8-6. 9，然后加入酚酞指示劑。分裝三角瓶，121°C滅菌15min，待培養基冷至50_55°C時，加入預先過濾滅菌的20%尿素水溶液，使其在培養基中在最終濃度為2%，搖勻后備用。實驗方法無菌條件下取10克酒曲于裝有90mL無菌水并放有玻珠的25mL三角瓶中，置搖床上室溫振蕩30分鐘。取菌液按10倍的梯度稀釋到10_6，取各稀釋度菌液ImL放入無菌平皿中，倒入滅菌后冷卻至50°C的培養基，混勻，待凝固后放入30°C培養箱培養2 5天，按菌落周圍是否變紅進行初篩(結果見表I)。因為脲酶分解尿素產生氨使培養基呈堿性；酚酞遇堿變紅，顏色的深淺初步表示了菌株產脲酶能力的大小。挑選菌落周圍變紅的單菌落保存。初篩得到的菌株經形態觀察發現主要為霉菌和細菌。表I初篩得到菌株的變紅時間及顏色深淺權利要求1.，其特征在于包括如下步驟利用聚多曲霉Aspergillus sydowiiJNC-U5 CGMCC No. 6577發酵，提取，得到脲酶制劑。2.根據權利要求1所述的，其特征在于所述的發酵是指將聚多曲霉接種到麥芽汁培養基中，于30 35°C、15(T250rpm、溶氧100%發酵5 7天；其中，聚多曲霉的孢懸液濃度為10卜106個/mL，孢懸液的體積占麥芽汁培養基體積的廣2%0。3.根據權利要求2所述的，其特征在于所述的發酵條件如下于 35°C，150rpm，培養時間為7天。4.根據權利要求2或3所述的，其特征在于所述的麥芽汁培養基的制備方法如下取大麥芽粉碎，加3 5倍于麥芽質量的55 60°C的水,在55 60 °C下保溫 3 4h，過濾，煮沸，過濾，將麥芽汁濃度調整到5 7波美，115°C下滅菌20分鐘。5.根據權利要求Γ4任一項所述的，其特征在于所述的提取為在發酵完畢后收集菌絲，干燥菌絲，粉碎菌絲。6.根據權利要求5所述的，其特征在于收集菌絲時用無菌水洗滌菌絲。7.根據權利本文檔來自技高網...
【技術保護點】
酸性脲酶的生產方法，其特征在于：包括如下步驟：利用聚多曲霉Aspergillus?sydowiiJNC?U5?CGMCC?No.6577發酵，提取，得到脲酶制劑。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：唐清蘭，徐姿靜，魏勇，徐占成，劉孟華，樊科權，焦小川，
申請(專利權)人：四川綿竹劍南春酒廠有限公司，
類型：發明
國別省市：
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