一種磷酸化膠原蛋白的制備方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種磷酸化膠原蛋白的制備方法，其步驟包括：一、磷酸化；二、鹽析；三、純化；四、干燥；所得磷酸化膠原蛋白為白色粉末，其收得率≥87.5％，磷酸化程度15.2磷／mol。本發(fā)明專利技術(shù)比傳統(tǒng)膠原蛋白具有更好的生理活性，能更好的促進(jìn)人體對鈣鐵等的吸收和利用。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及一種膠原蛋白的制備方法，尤其涉及。
技術(shù)介紹
合適條件下，用化學(xué)試劑與水解膠原蛋白分子中特定基團(tuán)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成水解膠原蛋白化學(xué)修飾物。如進(jìn)行磷酸化，生成水解膠原蛋白；進(jìn)行季銨化，生成季銨化水解膠原蛋白。由于新基團(tuán)加入，改變了水解膠原蛋白的物理化學(xué)及功能性質(zhì)，使之更適合于特殊用途。在三聚磷酸鈉作用下，膠原蛋白分子中的羥基發(fā)生非酶磷酸化，形成磷酸化膠原蛋白質(zhì)。磷酸化的膠原蛋白帶負(fù)電荷，與鈣、鐵等離子形成離子配位化合物，即使在微堿性條件下也呈溶解狀態(tài)，從而有利于上述離子的吸收利用。磷酸化膠原蛋白的作用類似于酪蛋白磷酸肽，但是其價格遠(yuǎn)低于酪蛋白磷酸肽，是一種值得開發(fā)的鈣離子強(qiáng)化劑。因此，要想獲得一種磷酸化膠原蛋白，就必須。
技術(shù)實現(xiàn)思路
為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題，本專利技術(shù)的目的是提供。為達(dá)到上述目的，本專利技術(shù)所采用的技術(shù)手段是 一種磷酸化膠原蛋白的制備方 法，其步驟包括 一、磷酸化稱取定量水解膠原蛋白液，置于反應(yīng)釜中，在攪拌下用蒸餾水稀釋至蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度為O. 25%，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH值為8. 0-9. O,向反應(yīng)釜夾層通入蒸汽，使稀釋膠原蛋白液升溫至70°C，在保溫狀態(tài)下加入三聚磷酸鈉進(jìn)行磷酸化反應(yīng)，三聚磷酸鈉用量為膠原蛋白質(zhì)量的1/1 ,反應(yīng)2. 5h; 二、鹽析完成反應(yīng)后，向反應(yīng)釜夾層通入冷卻水，降溫至8°C以下，泵入沉淀罐，然后，在攪拌下向反應(yīng)釜中泵入飽和硫酸銨溶液鹽析沉淀磷酸化膠原蛋白，直至鹽析液中硫酸被飽和度達(dá)到85%時止； 三、純化靜置處理30min后離心，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為13000r/ min，溫度4°C，離心時間8min,棄上清液，沉淀物再次用飽和度為85%的硫酸銨溶液充分洗滌數(shù)次，冷凍離心，獲得脫無機(jī)磷的磷酸化膠原蛋白沉淀，將脫無機(jī)磷的磷酸化膠原蛋白沉淀置于透析袋中，對PH值為8. 5的碳酸鈉溶液進(jìn)行過夜透析脫鹽，獲得脫鹽磷酸化膠原蛋白液；四、干燥將脫鹽磷酸化膠原蛋白液進(jìn)行冷凍干燥，獲得磷酸化膠原蛋白凍干粉，冷凍干燥條件為溫度-50 _45°C，真空度為80 lOOPa，時間為12 16h。進(jìn)一步的，所述步驟四中所得磷酸化膠原蛋白為白色粉末，其收得率> 87. 5%，磷酸化程度15. 2磷/ mo I膠原蛋白。本專利技術(shù)的有益效果在于通過本方法制備高純度的磷酸化膠原蛋白，白色粉末，磷酸化膠原蛋白收得率>87.5%，磷酸化程度15.2磷/ mol膠原蛋白，比傳統(tǒng)膠原蛋白具有更好的生理活性，能更好的促進(jìn)人體對鈣鐵等的吸收和利用。具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本專利技術(shù)作進(jìn)一步說明，以助于理解本專利技術(shù)的內(nèi)容。實施例1 ，其步驟包括 一、磷酸化稱取Ikg水解膠原蛋白液，置于反應(yīng)釜中，在攪拌下用蒸餾水稀釋至蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度為O. 25 %，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH值為8. O，向反應(yīng)釜夾層通入蒸汽，使稀釋膠原蛋白液升溫至70°C，在保溫狀態(tài)下加入三聚磷酸鈉進(jìn)行磷酸化反應(yīng)，三聚磷酸鈉用量為膠原蛋白質(zhì)量的1/1 ,反應(yīng)2. 5h; 二、鹽析完成反應(yīng)后，向反應(yīng)釜夾層通入冷卻水，降溫至8°C以下，泵入沉淀罐，然后，在攪拌下向反應(yīng)釜中泵入飽和硫酸銨溶液鹽析沉淀磷酸化膠原蛋白，直至鹽析液中硫酸被飽和度達(dá)到85 %時止； 三、純化靜置處理30min后離心，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為13000r/ min，溫度4°C，離心時間8min,棄上清液，沉淀物再次用飽和度為85%的硫酸銨溶液充分洗滌數(shù)次，冷凍離心，獲得脫無機(jī)磷的磷酸化膠原蛋白沉淀，將脫無機(jī)磷的磷酸化膠原蛋白沉淀置于透析袋中，對PH值為8. 5的碳酸鈉溶液進(jìn)行過夜透析脫鹽，獲得脫鹽磷酸化膠原蛋白液；四、干燥將脫鹽磷酸化膠原蛋白液進(jìn)行冷凍干燥，獲得磷酸化膠原蛋白凍干粉，冷凍干燥條件為溫度-50°C，真空度為80Pa，時間為12h。步驟四中所得磷酸化膠原蛋白為白色粉末，其收得率為87. 8%，磷酸化程度15. 2磷/ mol膠原蛋白。實施例2 ，其步驟包括 一、磷酸化稱取1.5kg水解膠原蛋白液，置于反應(yīng)釜中，在攪拌下用蒸餾水稀釋至蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度為O. 25%，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH值為9. O,向反應(yīng)釜夾層通入蒸汽，使稀釋膠原蛋白液升溫至70°C，在保溫狀態(tài)下加入三聚磷酸鈉進(jìn)行磷酸化反應(yīng)，三聚磷酸鈉用量為膠原蛋白質(zhì)量的1/1 ,反應(yīng)2. 5h; 二、鹽析完成反應(yīng)后，向反應(yīng)釜夾層通入冷卻水，降溫至8°C以下，泵入沉淀罐，然后，在攪拌下向反應(yīng)釜中泵入飽和硫酸銨溶液鹽析沉淀磷酸化膠原蛋白，直至鹽析液中硫酸被飽和度達(dá)到85 %時止； 三、純化靜置處理30min后離心，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為13000r/ min，溫度4°C，離心時間8min,棄上清液，沉淀物再次用飽和度為85 %的硫酸銨溶液充分洗滌數(shù)次，冷凍離心，獲得脫無機(jī)磷的磷酸化膠原蛋白沉淀，將脫無機(jī)磷的磷酸化膠原蛋白沉淀置于透析袋中，對PH值為8. 5的碳酸鈉溶液進(jìn)行過夜透析脫鹽，獲得脫鹽磷酸化膠原蛋白液；四、干燥將脫鹽磷酸化膠原蛋白液進(jìn)行冷凍干燥，獲得磷酸化膠原蛋白凍干粉，冷凍干燥條件為溫度-45°C，真空度為lOOPa，時間為16h。步驟四中所得磷酸化膠原蛋白為白色粉末，其收得率為88. 0%，磷酸化程度15. 2磷/ mol膠原蛋白。本專利技術(shù)的實施例所表述的，并不局限于此，任何熟悉本
的技術(shù)人員在本專利技術(shù)揭露的技術(shù)范圍 內(nèi)，可輕易想到變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本專利技術(shù)的保護(hù)范圍之內(nèi)。本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點】
一種磷酸化膠原蛋白的制備方法，其特征在于，步驟包括：一、磷酸化：稱取定量水解膠原蛋白液，置于反應(yīng)釜中，在攪拌下用蒸餾水稀釋至蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度為0.25％，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH值為8.0?9.0，向反應(yīng)釜夾層通入蒸汽，使稀釋膠原蛋白液升溫至70℃，在保溫狀態(tài)下加入三聚磷酸鈉進(jìn)行磷酸化反應(yīng)，三聚磷酸鈉用量為膠原蛋白質(zhì)量的1/1?，反應(yīng)2.5h；二、鹽析：完成反應(yīng)后，向反應(yīng)釜夾層通入冷卻水，降溫至8℃以下，泵入沉淀罐，然后，在攪拌下向反應(yīng)釜中泵入飽和硫酸銨溶液鹽析沉淀磷酸化膠原蛋白，直至鹽析液中硫酸被飽和度達(dá)到85％時止；三、純化：靜置處理30min后離心，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為l3000r／min?，溫度4℃，離心時間8min，棄上清液，沉淀物再次用飽和度為85％的硫酸銨溶液充分洗滌數(shù)次，冷凍離心，獲得脫無機(jī)磷的磷酸化膠原蛋白沉淀，將脫無機(jī)磷的磷酸化膠原蛋白沉淀置于透析袋中，對pH值為8.5的碳酸鈉溶液進(jìn)行過夜透析脫鹽，獲得脫鹽磷酸化膠原蛋白液；?????四、干燥：將脫鹽磷酸化膠原蛋白液進(jìn)行冷凍干燥，獲得磷酸化膠原蛋白凍干粉，冷凍干燥條件為溫度?50～?45℃，真空度為80～100Pa，時間為12～16h。...

【技術(shù)特征摘要】
1.一種磷酸化膠原蛋白的制備方法，其特征在于，步驟包括 一、磷酸化稱取定量水解膠原蛋白液，置于反應(yīng)釜中，在攪拌下用蒸餾水稀釋至蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度為O. 25%，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH值為8. 0-9. O,向反應(yīng)釜夾層通入蒸汽，使稀釋膠原蛋白液升溫至70°C，在保溫狀態(tài)下加入三聚磷酸鈉進(jìn)行磷酸化反應(yīng)，三聚磷酸鈉用量為膠原蛋白質(zhì)量的1/1 ,反應(yīng)2. 5h; 二、鹽析完成反應(yīng)后，向反應(yīng)釜夾層通入冷卻水，降溫至8°C以下，泵入沉淀罐，然后，在攪拌下向反應(yīng)釜中泵入飽和硫酸銨溶液鹽析沉淀磷酸化膠原蛋白，直至鹽析液中硫酸被飽和度達(dá)到85%時止； 三、純化靜置處理30min后離心，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為1300...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：曹榮軍，任憲君，楊慶利，孫杰，武鑫，劉少芳，張秋艷，金海明，姚秀芬，臺文靜，
申請(專利權(quán))人：青島貝爾特生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：