一種鑒別苦皮藤根皮藥材的方法技術

本發明專利技術提供一種鑒別苦皮藤根皮藥材的方法，包括：對苦皮藤根皮藥材進行提取，得到含有活性成分組的苦皮藤根皮藥材特征提取物；對特征提取物進行IGD核磁共振碳譜指紋圖譜檢測，根據指紋圖譜得到特征提取物中若干個活性成分特征峰峰強度；并用相同方式測定出各活性成分相應的標準參照品的特征峰峰強度；通過定量分析手段測定得到苦皮藤根皮藥材中標準參照品的絕對含量；利用特征峰峰強度的比值和所述絕對含量，計算出苦皮藤根皮藥材中各活性成分的含量及活性成分組含量。本發明專利技術利用IGD核磁共振碳譜偶聯指紋圖譜技術，反映苦皮藤根皮中含有4-OH-β-二氫沉香呋喃倍半萜多醇酯類化合物及其比例，完成對苦皮藤根皮藥材品種和質量的鑒定。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于天然藥用植物的鑒別領域，具體地，涉及。
技術介紹
苦皮藤(Celastrus angulatus)亦叫馬斷腸、苦樹皮、老虎麻等，系衛矛科(Celastraceae)南蛇藤屬(Celastrus)多年生藤狀灌木植物，產于河北、山東、河南、陜西、湖北、甘肅、江蘇、安徽等省。其根、莖、葉、果實和種子是天然的殺蟲劑又是重要的中藥資源，民間用其根皮、莖皮、樹葉防治蔬菜及各種作物的蟲害已有相當長的歷史[①中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志.科學出版社，1999，45(3) 102.②柯治國，等.The research and advances on the plant-based insect antifeedant Celastrusangulatus [J],武漢植物學研究1993，11 (3) :265-271]。苦皮藤對菜青蟲、猿葉蟲、小菜蛾、黃守瓜等害蟲有獨特的效果，可謂長年不衰的植物殺蟲劑。苦皮藤是我國特有的殺蟲植物，它具有多種功效，對不同的害蟲有不同的生理活性，性能穩定、使用安全、不殺傷天敵、無污染[柯治國，等.殺蟲植物——苦皮藤種子的研究.第三屆湖北湖南植保農藥學術研討會論文集，2004，94-300]。研究證明其中所含的殺蟲活性成分主要是以β _ 二氫沉香呋喃倍半萜為骨架的多元醇酯化合物及其生物堿。這些物質對昆蟲具有毒殺、拒食、麻醉等作用[吳文君.植物殺蟲劑苦皮藤素研究與應用[Μ].化學工業出版社，2010]。自苦皮藤素被國家審批為植物源殺蟲劑以來，其乳油、水乳劑、微乳劑[CN 92113104.6 ；CN94103655. 3 ；CN99109275. 9 ；CN 02122988. O]已不斷投放市場并且收到良好的經濟效益和社會效益。苦皮藤的殺蟲活性 成分具有多樣性、復雜性等特點，而且因產地、氣候、光照等自然條件差異或提取溶劑的不同，活性成分的含量會有所變化。因此，在鑒別和評價苦皮藤藥材及其產品過程中，僅僅采用某種單一分析檢測手段[如高效液相色譜法(HPLC)]測定其中某一種主要活性成分(如采用苦皮藤素V (苦皮素A)的含量鑒別代表苦皮藤藥材及其產品的含量)，這種模式不能全面、綜合地反映苦皮藤藥材及其產品之間的質量差異，當然也不能全面評價苦皮藤藥材及其產品的好壞。指紋圖譜技術己成為國際公認的區別評價植物天然產物及其原料的最有效的手段[周玉新.中藥指紋圖譜研究技術.北京化學工業出版社，2002]。關于苦皮藤藥材的1H NMR指紋圖譜[秦海林等，苦皮藤的1H NMR指紋圖譜解析.藥學學報，2001,36 (6):462-466]和紅外指紋圖譜[劉惠霞，等.苦皮藤的紅外光譜特征及其在鑒別中的應用.西北植物學報1998,305-310]曾見報道，僅能定性分析，未實際應用。并且，IGD核磁共振碳譜偶聯指紋圖譜未見報道。IGD核磁共振碳譜偶聯指紋圖譜技術，也叫反門控去偶核磁共振碳譜(IGD 13CNMR)偶聯(coupling)指紋圖譜技術，是在已研究多年的核磁共振氫譜(1H NMR)指紋圖譜技術[趙天增，等.1HNMR指紋法鑒定植物中藥.中草藥2000,31(11) =868-870]的基礎上聯合其他技術(例如目前應用最廣泛的高效液相(HPLC)指紋圖譜技術[謝培山等.中藥色譜指紋圖譜.人民衛生出版社，2005])提出的一種新的非單一手段綜合指紋圖譜技術。隨著藥品、食品安全日益受到國家和社會的高度重視，可廣泛應用于無公害蔬菜、農作物和非作物類的害蟲防治的苦皮藤素需求量很大，為IGD核磁共振碳譜偶聯指紋圖譜技術的應用提供了廣闊的基礎。苦皮藤藥材IGD核磁共振碳譜偶聯指紋圖譜技術的研究與應用，不僅可以解決我國苦皮藤藥材(尤其是苦皮藤根皮藥材)鑒別和評價的難題，也為加強苦皮藤藥材內在成分研究的系統化與標準化，加快植物源農藥苦皮藤素現代化的發展，實現與國際接軌提供了科學的保證。隨著該技術在其他中藥材及其提取物、植物源農藥中的推廣應用，該技術的重大科學價值必將日趨突出。
技術實現思路
為了解決現有技術的問題，本專利技術的目的在于提供，該方法利用了 IGD核磁共振碳譜偶聯指紋圖譜技術。為實現上述目的，本專利技術提供的鑒別苦皮藤根皮藥材的方法，包括以下步驟I)對苦皮藤根皮藥材進行提取，得到含有活性成分組的苦皮藤根皮藥材特征提取物；2)對所述苦皮藤根皮藥材特征提取物進行IGD核磁共振碳譜指紋圖譜檢測，根據指紋圖譜得到所述苦皮藤根皮藥材特征提取物中若干個活性成分特征峰峰強度；并用相同方式(IGD核磁共振碳譜指紋圖譜)測定出所述各活性成分相應的標準參照品的特征峰峰強度；3)通過定量分析手段測定得到苦皮藤根皮藥材中所述標準參照品的絕對含量；4)利用所述特征峰峰強度(各活性成分特征峰峰強度及相應標準參照品的特征峰峰強度)的比值和所述絕對含量，計算出 苦皮藤根皮藥材中各活性成分的含量及該類活性成分的總含量，即活性成分組的含量。其中，步驟I)中，苦皮藤根皮藥材特征提取物的制備方法，包括稱取苦皮藤根或/和皮藥材，粉碎，用6 10倍量90、5%的乙醇回流提取2 3次，濾液合并后減壓濃縮，回收溶劑至粉末，即得苦皮藤根皮藥材特征提取物。進一步地，用乙醇回流提取，每次提取廣2小時。進一步地，苦皮藤根或/和皮藥材粉碎后過1(Γ24目篩。其中，步驟2)中，在對苦皮藤根皮藥材特征提取物進行IGD核磁共振碳譜指紋圖譜檢測前，可以進行適當處理，具體方式包括取苦皮藤根皮藥材特征提取物，加入6^10倍量氯仿，6(T80°C下回流提取2(T40min，過濾后減壓濃縮，回收溶劑至干。溶于⑶Cl3 (氘代氯仿)中，之后即可以做IGD核磁共振碳譜指紋圖譜檢測。其中，步驟2)中，所述苦皮藤根皮藥材特征提取物中的活性成分特征峰為C_15吸收峰，其化學位移為δ c 60. 0 66· O。其中，步驟2)中所述峰強度，可以采用峰高法、面積積分法或重量法計算。其中，步驟3)中所述標準參照品的絕對含量是指用定量分析手段測定的苦皮藤根皮藥材中標準參照品的質量百分含量。其中，步驟3)中，所述定量分析手段為高效液相法(HPLC法)。進一步地，所述HPLC法的條件為色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填料，流動相為乙腈水=(60:40)^(55:45)的混合溶劑，檢測波長為242nm。 其中，所述標準參照品為苦皮素B。本專利技術主要測定的是苦皮藤根皮藥材中4-ΟΗ-β - 二氫沉香呋喃倍半萜多醇酯類化合物的含量。其中，步驟4)中，計算各活性成分的含量的偶聯公式為本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種鑒別苦皮藤根皮藥材的方法，其特征在于，包括以下步驟：1）對苦皮藤根皮藥材進行提取，得到含有活性成分組的苦皮藤根皮藥材特征提取物；2）對所述苦皮藤根皮藥材特征提取物進行IGD核磁共振碳譜指紋圖譜檢測，根據指紋圖譜得到所述苦皮藤根皮藥材特征提取物中若干個活性成分特征峰峰強度；并用相同方式測定出所述各活性成分相應的標準參照品的特征峰峰強度；3）通過定量分析手段測定得到苦皮藤根皮藥材中所述標準參照品的絕對含量；4）利用各活性成分特征峰峰強度及相應標準參照品特征峰峰強度的比值和所述絕對含量，計算出苦皮藤根皮藥材中各活性成分的含量及活性成分組的含量。

【技術特征摘要】
1.一種鑒別苦皮藤根皮藥材的方法，其特征在于，包括以下步驟 1)對苦皮藤根皮藥材進行提取，得到含有活性成分組的苦皮藤根皮藥材特征提取物； 2)對所述苦皮藤根皮藥材特征提取物進行IGD核磁共振碳譜指紋圖譜檢測，根據指紋圖譜得到所述苦皮藤根皮藥材特征提取物中若干個活性成分特征峰峰強度；并用相同方式測定出所述各活性成分相應的標準參照品的特征峰峰強度； 3)通過定量分析手段測定得到苦皮藤根皮藥材中所述標準參照品的絕對含量； 4)利用各活性成分特征峰峰強度及相應標準參照品特征峰峰強度的比值和所述絕對含量，計算出苦皮藤根皮藥材中各活性成分的含量及活性成分組的含量。2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟I)中，苦皮藤根皮藥材特征提取物的制備方法，包括稱取苦皮藤根或/和皮，粉碎，用6 10倍量90、5%的乙醇回流提取2 3次，濾液合并后減壓濃縮，回收溶劑至粉末，即得苦皮藤根皮藥材特征提取物。3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟2)在對苦皮藤根皮藥材特征提取物進行IGD核磁共振碳譜指紋圖譜檢測前，進行處理的方式包括取苦皮藤根皮藥材特征提...

【專利技術屬性】
技術研發人員：趙天增，張海艷，董建軍，郭唯，范毅，
申請(專利權)人：河南省科高植物天然產物開發工程技術有限公司，河南省生物技術開發中心，
類型：發明
國別省市：