基于PRP的生物活性載體支架制造技術(shù)

一種基于PRP的生物活性載體支架，其特征為：所述基于PRP的生物活性載體支架（1）由富血小板血漿凝膠凍干后形成。基于PRP的生物活性載體支架（1）為多孔型結(jié)構(gòu)。PRP支架呈現(xiàn)典型的多孔性結(jié)構(gòu)，自體來(lái)源，無(wú)免疫排斥反應(yīng)，含有豐富的、對(duì)軟骨生長(zhǎng)有利的因子。可促進(jìn)軟骨細(xì)胞的增殖，并可以緩慢的釋放生長(zhǎng)因子，維持軟骨細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間的增殖分化。本實(shí)用新型專(zhuān)利技術(shù)所述的方案操作簡(jiǎn)便，制備快捷，價(jià)格低廉，容易塑性，無(wú)免疫排斥反應(yīng)，符合軟骨組織工程中支架材料的要求，成軟骨效果明顯，具有非常良好的臨床應(yīng)用前景。（*該技術(shù)在2022年保護(hù)過(guò)期，可自由使用*）

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本技術(shù)屬于生物醫(yī)學(xué)工程中用組織工程方法構(gòu)建載體支架
，具體是一種基于PRP的生物活性載體支架，是治療骨性關(guān)節(jié)炎等軟骨病變?cè)斐傻牟糠旨叭珜榆浌侨睋p的載體支架的構(gòu)建及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
目前，組織工程構(gòu)建的支架分為天然可降解的生物材料、人工合成的可降解生物材料，支架材料的選擇是組織工程學(xué)研究的重點(diǎn)。支架材料作為細(xì)胞的載體，有負(fù)載細(xì)胞和緩釋生長(zhǎng)因子的作用。但是，目前支架材料存在著各種缺陷，比如免疫原性，生物安全性，生物相容性，降解速率，機(jī)械強(qiáng)度等。與軟骨修復(fù)相關(guān)的生長(zhǎng)因子有TGF-P家族，IGF-1等，這些生長(zhǎng)因子的構(gòu)建方法包括組織中提取和基因重組2種，步驟復(fù)雜、價(jià)格昂貴。因此，開(kāi)發(fā)新型的支架材料，及價(jià)格低廉的生長(zhǎng)因子是組織工程修復(fù)軟骨中進(jìn)ー步亟待解決的問(wèn)題。富血小板血衆(zhòng)(Platelet-rich plasma,PRP )是全血中提取出的含高濃度血小板的血漿。多項(xiàng)研究表明，自體靜脈血提取的PRP中含有多種高濃度的促進(jìn)軟骨細(xì)胞増殖分化的生長(zhǎng)因子，包括轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-P (TGF-P)、胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)等。當(dāng)PRP與氯化鈣及牛凝血酶混合后，可激活血小板，促使其釋放出這些生長(zhǎng)因子。但是僅僅將PRP凝膠應(yīng)用于軟骨缺損部，血小板易收縮，導(dǎo)致生長(zhǎng)因子大量流失，只在較短的時(shí)間發(fā)揮其作用，因此亟需ー種技術(shù)可以保持PRP內(nèi)部的多孔隙結(jié)構(gòu)，又能保持其中的生長(zhǎng)因子緩慢釋放的載體支架。目前，已有將PRP與HA，TCP等復(fù)合用于口腔頜面外科及骨缺損的修復(fù)，或PRP凝膠用于軟骨修復(fù)，但其在凍干后所得支架用于軟骨修復(fù)方面未見(jiàn)報(bào)道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本技術(shù)的目的在于提供一種基于PRP的生物活性載體支架，可任意塑性，制備方便快捷，并且使用的為自體靜脈血，不存在免疫排斥問(wèn)題。本技術(shù)的技術(shù)方案是一種基于PRP的生物活性載體支架，所述基于PRP的生物活性載體支架(I)由富血小板血漿凝膠凍干后形成。PRP凝膠由2種溶液組成溶液ー是富血小板血漿(PRP);溶液ニ是氯化鈣和牛凝血酶的混合溶液，其中，氯化鈣的濃度為10%，牛凝血酶濃度為1000U/ml。所述基于PRP的生物活性載體支架I為多孔型結(jié)構(gòu)。PRP凝膠經(jīng)_80°C預(yù)冷凍24小時(shí)后，冷凍干燥機(jī)中凍干48小時(shí)后，得到的多孔支架。PRP支架呈現(xiàn)典型的多孔性結(jié)構(gòu)，自體來(lái)源，無(wú)免疫排斥反應(yīng)，含有豐富的、對(duì)軟骨生長(zhǎng)有利的因子。本技術(shù)的基于PRP的生物活性載體支架用于治療部分及全層軟骨缺損。本技術(shù)為ー種基于PRP的生物活性載體支架，所用的血小板取自自體靜脈血，經(jīng)改良Landersberg法提取而制得的富血小板血衆(zhòng),血小板密度可以達(dá)到全血中血小板密度的5 10倍。改良Landersberg法包括以下步驟將抗凝血以200g/min第一次10分鐘，吸取全部上清液及白膜層下Imm成分，再以2000r/min第二次離心10分鐘,棄3/4上清液，剰余部分即為PRP。PRP凝膠由2種溶液組成溶液ー是富血小板血漿(PRP);溶液ニ是氯化鈣和牛凝血酶的混合溶液，其中，氯化鈣的濃度為10%，牛凝血酶濃度為1000U/ml。PRP凝膠經(jīng)-80°C預(yù)冷凍24小時(shí)后，冷凍干燥機(jī)中凍干48小時(shí)后，得到的多孔支架。本技術(shù)所述的PRP生物活性載體支架，包括以下步驟A.材料準(zhǔn)備(I)自體PRP :取自體靜脈血，以二次離心法提取富血小板血漿PRP ；(2)氯化鈣-牛凝血酶混合溶液配制氯化鈣-牛凝血酶混合溶液，其中，氯化鈣濃度為10%，牛凝血酶濃度為1000U/ml ；B.講自體PRP與氯化鈣-牛凝血酶溶液以9:1比例混合，攪拌使其混合均勻，靜置數(shù)分鐘后即得PRP凝膠；C.將PRP凝膠立即置于_80°C冰箱中，預(yù)冷凍24小時(shí)后，放入冷凍干燥機(jī)中凍干48小時(shí)后，即得PRP支架。本技術(shù)的有效效果是本技術(shù)的基于PRP的生物活性載體支架利用纖維蛋白原溶液與氯化鈣-牛凝血酶溶液混合后形成 纖維蛋白凝膠的原理，所形成的纖維蛋白凝膠中含有豐富的生長(zhǎng)因子，其凍干后，所形成的典型的網(wǎng)格狀結(jié)構(gòu)可促進(jìn)軟骨細(xì)胞的増殖，并可以緩慢的釋放生長(zhǎng)因子，維持軟骨細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間的増殖分化。本技術(shù)所述的基于PRP的生物活性載體支架操作簡(jiǎn)便，制備快捷，價(jià)格低廉，容易塑性，無(wú)免疫排斥反應(yīng)，符合軟骨組織工程中支架材料的要求，成軟骨效果明顯，具有非常良好的臨床應(yīng)用前景。附圖說(shuō)明圖為本技術(shù)的結(jié)構(gòu)示意圖。圖中I為基于PRP的生物活性載體支架。具體實(shí)施方式本技術(shù)的基于PRP的生物活性載體支架，可用于治療骨性關(guān)節(jié)炎等軟骨疾病造成的部分及全層軟骨缺損。下面以本技術(shù)所述的基于PRP的生物活性載體支架為實(shí)施例，來(lái)對(duì)本技術(shù)的技術(shù)方案和實(shí)施效果作進(jìn)ー步說(shuō)明。一種基于PRP的生物活性載體支架，所述基于PRP的生物活性載體支架I由富血小板血漿凝膠凍干后形成。PRP凝膠由2種溶液組成溶液ー是富血小板血漿(PRP);溶液ニ是氯化鈣和牛凝血酶的混合溶液，其中，氯化鈣的濃度為10%，牛凝血酶濃度為1000U/ml。基于PRP的生物活性載體支架I為多孔型結(jié)構(gòu)。PRP凝膠經(jīng)_80°C預(yù)冷凍24小時(shí)后，冷凍干燥機(jī)中凍干48小時(shí)后，得到的多孔支架。PRP支架呈現(xiàn)典型的多孔性結(jié)構(gòu)，自體來(lái)源，無(wú)免疫排斥反應(yīng)，含有豐富的、對(duì)軟骨生長(zhǎng)有利的因子。實(shí)施例一 PRP的提取。無(wú)菌條件下抽取兔耳緣靜脈血10ml，3. 8%枸櫞酸鈉Iml抗凝。200g/min離心10分鐘，吸取全部上清液及白膜層下Imm成分，再以2000r/min第二次離心10分鐘,棄3/4上清液，剰余部分即為PRP。高倍鏡下計(jì)數(shù)血小板含量并與全血比較，_80°C冰箱保存。實(shí)施例ニ PRP凝膠的制備。PRP凝膠由2種溶液混合制成，溶液I為PRP，溶液2為氯化鈣-牛凝血酶混合溶液，氯化鈣濃度為10%，牛凝血酶濃度為1000U/ml。溶液I與溶液2以9:1的比例混合，搖勻靜止數(shù)分鐘后，形成凝膠狀物質(zhì)即為PRP凝膠。實(shí)施例三凍干PRP支架制作。將PRP凝膠置于_80°C冰箱中預(yù)冷凍24小吋，然后將其放入冷凍干燥機(jī)中凍干48小時(shí)，即得凍干PRP支架。實(shí)施例四制備兔軟骨缺損模型。取健康新西蘭大白免，6月齡，體重2 3kg，采用氯胺酮和地西泮復(fù)合液肌注麻酔。無(wú)菌條件下，手術(shù)暴露右側(cè)股 骨外側(cè)髁，3mm活組織打孔器在軟骨面上制造全層軟骨缺損。實(shí)施例五制備微骨折模型。取健康新西蘭大白免，6月齡，體重2 3kg，采用氯胺酮和地西泮復(fù)合液肌注麻酔。無(wú)菌條件下，手術(shù)暴露左側(cè)股骨外側(cè)髁，3mm活組織打孔器在軟骨面上制造微骨折模型。實(shí)施例六動(dòng)物植入實(shí)驗(yàn)。32只健康新西蘭大白免，由南京市第一醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。按實(shí)施例四制備軟骨缺損模型，隨機(jī)分為A，B兩組，每組16只。所有實(shí)驗(yàn)用兔按實(shí)施例一所述方法抽取耳緣靜脈血IOml用于提取富血小板血衆(zhòng)(platelet-rich plasma,PRP),并制作PRP支架。A組于術(shù)中按實(shí)施例四所述方法制作雙側(cè)股骨外側(cè)髁全層軟骨缺損模型，右側(cè)缺損植入PRP支架，作為實(shí)驗(yàn)組；左側(cè)缺損不做任何處理，作為對(duì)照組。B組于術(shù)中按實(shí)施例五所述方法制作微骨折模型，右側(cè)植入PRP支架，作為實(shí)驗(yàn)組；左側(cè)缺損不做任何處理，作為對(duì)照組。A，B兩組逐層縫合切ロ，術(shù)后連續(xù)3天肌注青霉素40萬(wàn)U/天。本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種基于PRP的生物活性載體支架，其特征為：所述基于PRP的生物活性載體支架（1）由富血小板血漿凝膠凍干后形成。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種基于PRP的生物活性載體支架，其特征為所述基于PRP的生物活性載體支架(I)由富血小板血漿凝膠凍干后形成。...

【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：桂鑒超，尹昭偉，蔣逸秋，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：南京市第一醫(yī)院，
類(lèi)型：實(shí)用新型
國(guó)別省市：