一種鮭科魚卵發育過程的觀測方法技術

一種鮭科魚卵發育過程的觀測方法，它涉及魚卵發育過程的觀測方法，本發明專利技術要解決現有鮭科魚卵發育過程的觀測方法中存在細胞分裂期細節很難觀測以及顯微成像不清晰的問題。本發明專利技術中一種鮭科魚卵發育過程的觀測方法按以下步驟進行：一、前期準備：然后配制魚卵固定液并放置于冰箱中保存；二、樣品采集：采集鮭科魚類受精卵放入到裝有魚卵固定液的采樣管中并放置于冰箱中保存；三、發育觀測：從固定液中取出魚卵放在載破片上，用解剖針輕輕剝掉卵膜，放在解剖鏡下觀測，并拍照，根據每個采樣管上注明的不同標號和不同發育期，全程記錄鮭科魚類由受精后0h至破膜時的整個發育過程。本發明專利技術適用于鮭科魚類受精卵發育過程的觀測和研究應用領域。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及魚卵發育過程的觀測方法。
技術介紹
鮭科魚類具有肉質細嫩、營養豐富、可食部分大、無肌間刺、易于加工等特點，最重要的是肌肉中蛋白含量高，并且含有大量的不飽和脂肪酸，因此目前已逐漸成為了我國乃至世界上重要的高品質蛋白質和營養物質的來源之一。隨著我國經濟的發展，人民日常生活水平不斷提高，青、草、鰱、鳙等傳統的魚類品種以不能夠完全滿足人們的消費需要，因此我國鮭科魚類等高品質蛋白質魚類養殖業發展十分迅速。由于市場的需求加大，國家也加大了對鮭科魚類的生理、生化和發育生物學等方面的研發力度。我國對于魚類卵子發育過程的觀測研究主要是從青、草、鰱、鳙等傳統溫水性魚類開始的，由于這些魚類卵子卵徑小和卵膜薄，因此普遍采用顯微鏡下直接觀測和手工繪圖的方法。隨著科技的進步，高科技產品的開發，在隨后的研究中逐漸用數碼相機拍照替代了手工繪圖這樣就極大的提高了研究的直觀性和準確性。但隨著我國虹鱒等鮭科魚類的不斷開發，也給魚類卵子發育的研究帶來了新的挑戰，由于鮭科魚類大部分都是冷水性魚類其產的卵子主要由蛋白構成，具有卵徑大、卵膜厚、顯微鏡無法直接觀測特征。早期學者對鮭科魚類魚卵發育的研究主要有3種胰蛋白酶酶解透明處理方法、透明液處理方法和5%甲醛固定剝離卵膜顯微鏡下拍照的方法。以上3中方法雖然一定程度上實現了鮭科魚卵發育過程的觀測，但也均存在各自的不足，主要如下胰蛋白酶必須處理活體卵子，處理后因卵膜較薄，雖然可以透過卵膜觀測到魚卵具體的發育分期，但成本較高，需立即處理，時間相對緊張(處理不及時蛋白變性將無法觀測)，操作難度也較大，卵膜極易破碎，卵膜反光性強，顯微成像不清晰；透明液雖然可使卵膜變性且增加了透明度，但卵膜的厚度沒有改變，細胞分裂期細節很難觀測到，因此透明液只能作為大致確定發育時相的工具，但用于魚卵發育的深入研究缺少準確性；5%甲醛固定剝離卵膜顯微鏡下拍照的方法，雖然具備了操作容易、固定后可隨時觀測的特性，但有甲醛固定魚卵的胚體和卵黃蛋白均為白色，無顏色反差，因此在觀測細胞分裂期時顯微拍照的清晰度不夠。
技術實現思路
本專利技術是要解決現有鮭科魚卵發育過程的觀測方法中存在細胞分裂期細節很難觀測以及顯微成像不清晰的問題而提出。本專利技術中的按以下步驟進行一、前期準備首先準備觀測所需工具，包括撈魚網、規格為5ml的采樣管、小鑷子、解剖針、載玻片、帶有拍照功能的解剖鏡；然后配制魚卵固定液，稱取20g 50g的苦味酸放入盛有400ml 600ml蒸餾水的燒杯中，用玻璃棒反復攪動20mirT40min后，將燒杯口用封口膜封緊，放置于:TC飛。C的冰箱中，放置20tT28h后，用濾紙過濾并取上清液，量取350m廣450ml此上清液放入另一個燒杯中，并向此燒杯中加入80mf 120ml甲醛和16mf24ml冰醋酸，混合均勻后，裝入不透明且帶蓋的容器中，放置于3°C飛。C的冰箱中備用；二、樣品采集鮭科魚類受精卵孵化水溫為7V、°C，需要18cT22d才能孵化破膜，具體采樣間隔如下受精后0tT3h內，每間隔15min采樣一次；受精后3tT8h內，每30min采樣一次；受精后8h 33h內，每間隔Ih米樣一次；受精后33h 81h內，每間隔2h米樣一次；受精后81h 129h內，每間隔6h米樣一次；受精后129h 215h每間隔12h米樣一次；受精后215h至破膜時，每間隔24h采樣一次；樣品采集過程首先在每個采樣管上注明不同的標號和不同的發育期，然后向每個采樣管中注入2mf4ml步驟一中配制的魚卵固定液，每次采樣時取受精卵15個 20個放入到裝有魚卵固定液的采樣管中，搖晃lmirT3min后，將采樣管放置于3°C飛。C的冰箱中，20tT28h后將采集的受精卵更換一次等量的步驟一中配制的魚卵固定液，即完成鮭科魚類受精卵的樣品采集；三、發育觀測從固定液中取出魚卵放在載破片上，魚卵的胚體朝上，用鑷子夾住魚卵，用解剖針輕輕剝掉卵膜，放在解剖鏡下觀測，并拍照，根據每個采樣管上注明的不同標號和不同發育期，全程記錄鮭科魚類由受精后Oh至破膜時的整個發育過程。本專利技術包括以下優點1、本專利技術方法采用新配方制成魚卵固定液，其有效期一般在I年左右，具備使用方便的特點；2、使用本專利技術方法中的魚卵固定液后，魚卵上的膜易于剝離，有利于進行觀測；3、本專利技術方法采用了新配方制成的魚卵固定液，其具有將魚卵的胚體染成橙黃色的作用，極大的克服了采用甲醛方法的弊端，使觀測鮭科魚類受精卵的發育過程變得更便捷、更直觀和更準確。具體實施例方式本專利技術技術方案不局限于以下所列舉具體實施方式，還包括各具體實施方式間的任意組合。具體實施方式一本實施方式中的按以下步驟進行一、前期準備首先準備觀測所需工具，包括撈魚網、規格為5ml的采樣管、小鑷子、解剖針、載玻片、帶有拍照功能的解剖鏡；然后配制魚卵固定液，稱取20g 50g的苦味酸放入盛有400ml 600ml蒸餾水的燒杯中，用玻璃棒反復攪動20mirT40min后，將燒杯口用封口膜封緊，放置于:TC飛。C的冰箱中，放置20tT28h后，用濾紙過濾并取上清液，量取350m廣450ml此上清液放入另一個燒杯中，并向此燒杯中加入80m廣120ml甲醛和16mf24ml冰醋酸，混合均勻后，裝入不透明且帶蓋的容器中，放置于3°C飛。C的冰箱中備用；二、樣品采集鮭科魚類受精卵孵化水溫為7V、°C，需要18cT22d才能孵化破膜，具體采樣間隔如下受精后0tT3h內，每間隔15min采樣一次；受精后3tT8h內，每30min采樣一次；受精后8h 33h內，每間隔Ih米樣一次；受精后33h 81h內，每間隔2h米樣一次；受精后81h 129h內，每間隔6h米樣一次；受精后129h 215h每間隔12h米樣一次；受精后215h至破膜時，每間隔24h采樣一次；樣品采集過程首先在每個采樣管上注明不同的標號和不同的發育期，然后向每個采樣管中注入2mf4ml步驟一中配制的魚卵固定液，每次采樣時取受精卵15個 20個放入到裝有魚卵固定液的采樣管中，搖晃lmirT3min后，將采樣管放置于3°C飛。C的冰箱中，20tT28h后將采集的受精卵更換一次等量的步驟一中配制的魚卵固定液，即完成鮭科魚類受精卵的樣品采集；三、發育觀測:從固定液中取出魚卵放在載破片上，魚卵的胚體朝上，用鑷子夾住魚卵，用解剖針輕輕剝掉卵膜，放在解剖鏡下觀測，并拍照，根據每個采樣管上注明的不同標號和不同發育期，全程記錄鮭科魚類由受精后Oh至破膜時的整個發育過程。本專利技術包括以下優點:1、本專利技術方法采用新配方制成魚卵固定液，其有效期一般在I年左右，具備使用方便的特點；2、使用本專利技術方法中的魚卵固定液后，魚卵上的卵膜易于剝離，有利于進行觀測；3、本專利技術方法采用了新配方制·成的魚卵固定液，其具有將魚卵的胚體染成橙黃色的作用，極大的克服了采用甲醛方法的弊端，使觀測鮭科魚類受精卵的發育過程變得更便捷、更直觀和更準確。具體實施方式二:本實施方式與具體實施方式一不同的是步驟一中稱取25g 45g的苦味酸放入盛有450ml 550ml蒸餾水的燒杯中，用玻璃棒反復攪動25mirT35min。其它步驟及參數與具體實施方式一相同。具體實施方式三:本實施方式與具體實施方式一不同的是步驟一中稱取35g的苦味酸放入盛有500ml蒸本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種鮭科魚卵發育過程的觀測方法，其特征在于它是通過以下步驟實現的：一、前期準備：首先準備觀測所需工具，包括：撈魚網、規格為5ml的采樣管、小鑷子、解剖針、載玻片、帶有拍照功能的解剖鏡；然后配制魚卵固定液，稱取20g~50g的苦味酸放入盛有400ml~600ml蒸餾水的燒杯中，用玻璃棒反復攪動20min~40min后，將燒杯口用封口膜封緊，放置于3℃~5℃的冰箱中，放置20h~28h后，用濾紙過濾并取上清液，量取350ml~450ml此上清液放入另一個燒杯中，并向此燒杯中加入80ml~120ml甲醛和16ml~24ml冰醋酸，混合均勻后，裝入不透明且帶蓋的容器中，放置于3℃~5℃的冰箱中備用；二、樣品采集：鮭科魚類受精卵孵化水溫為7℃~9℃，需要18d~22d才能孵化破膜，具體采樣間隔如下：受精后0h~3h內，每間隔15min采樣一次；受精后3h~8h內，每30min采樣一次；受精后8h~33h內，每間隔1h采樣一次；受精后33h~81h內，每間隔2h采樣一次；受精后81h~129h內，每間隔6h采樣一次；受精后129h~215h每間隔12h采樣一次；受精后215h至破膜時，每間隔24h采樣一次；樣品采集過程：首先在每個采樣管上注明不同的標號和不同的發育期，然后向每個采樣管中注入2ml~4ml步驟一中配制的魚卵固定液，每次采樣時取受精卵15個~20個放入到裝有魚卵固定液的采樣管中，搖晃1min~3min后，將采樣管放置于3℃~5℃的冰箱中，20h~28h后將采集的受精卵更換一次等量的步驟一中配制的魚卵固定液，即完成鮭科魚類受精卵的樣品采集；三、發育觀測：從固定液中取出魚卵放在載破片上，魚卵的胚體朝上，用鑷子夾住魚卵，用解剖針輕輕剝掉卵膜，放在解剖鏡下觀測，并拍照，根據每個采樣管上注明的不同標號和不同發育期，全程記錄鮭科魚類由受精后0h~破膜時的整個發育過程。...

【技術特征摘要】
1.一種鮭科魚卵發育過程的觀測方法，其特征在于它是通過以下步驟實現的: 一、前期準備:首先準備觀測所需工具，包括:撈魚網、規格為5ml的采樣管、小鑷子、解剖針、載玻片、帶有拍照功能的解剖鏡；然后配制魚卵固定液，稱取20g 50g的苦味酸放入盛有400ml 600ml蒸餾水的燒杯中，用玻璃棒反復攪動20mirT40min后，將燒杯口用封口膜封緊，放置于:3℃~5℃的冰箱中，放置20tT28h后，用濾紙過濾并取上清液，量取350m廣450ml此上清液放入另一個燒杯中，并向此燒杯中加入80m廣120ml甲醛和16mf24ml冰醋酸，混合均勻后，裝入不透明且帶蓋的容器中，放置于3°C~5℃的冰箱中備用； 二、樣品采集:鮭科魚類受精卵孵化水溫為7℃~9℃，需要18cT22d才能孵化破膜，具體米樣間隔如下:受精后Oh 3h內，每間隔15min米樣一次；受精后3h 8h內，每30min米樣一次；受精后8tT33h內，每間隔Ih采樣一次；受精后33tT81h內，每間隔此采樣一次；受精后81h 129h內，每間隔6h米樣一次；受精后129h 215h每間隔12h米樣一次；受精后215h至破膜時，每間隔24h采樣一次；樣品采集過程:首先在每個采樣管上注明不同的標號和不同的發育期，然后向每個采樣管中注入2mf4ml步驟一中配制的魚卵固定液，每次采樣時取受精卵15個 20個放入到裝有魚卵固定液的采樣管中，搖晃lmirT3min后，將采樣管放置于3℃~5℃的冰箱中，20tT28h后將采集的受精卵更換一次等量的步驟一中配制的魚卵固定液，即完成鮭科魚類受精卵的樣品采集； 三、發育觀測:從固定液中取出魚卵放在載破片上，魚卵的胚體朝上，用鑷子夾住魚卵，用解剖針輕輕剝掉卵膜，放在解剖鏡下觀測，并拍照，根據每個采樣管上注明的不同標號和不同發育期，全程記錄鮭科魚類由受精后OtT破膜時的整個發育過程。2.如權利要求1...

【專利技術屬性】
技術研發人員：張永泉，尹家勝，張玉勇，
申請(專利權)人：中國水產科學研究院黑龍江水產研究所，
類型：發明
國別省市：