抗TIM-3抗體制造技術

本發明專利技術提供了針對與表達人TIM-3的細胞相關的疾病的抗人TIM-3抗體，所述抗體與TIM-3的胞外區的氨基酸序列或其三維結構結合并表現出較高的效應子活性例如抗體依賴性細胞性細胞毒性（ADCC活性）。本發明專利技術提供了與TIM-3的胞外區的氨基酸序列或其三維結構結合并表現出ADCC活性的單克隆抗體或其抗體片段；生產所述抗體的雜交瘤；編碼所述抗體的DNA；包含所述DNA的載體；可通過導入所述載體而獲得的轉化體；用于生產所述抗體或其抗體片段的方法，其包括使用所述雜交瘤或轉化體；包含所述抗體或其抗體片段作為活性成分的治療劑和診斷劑。另外，本發明專利技術通過篩選與所述單克隆抗體或其抗體片段競爭的抗人TIM-3抗體而提供了具有高ADCC活性的抗人TIM-3抗體。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】抗TIM-3抗體
本專利技術涉及單克隆抗體或其抗體片段，所述單克隆抗體或其抗體片段與含有T細胞免疫球蛋白和粘蛋白結構域的分子-3（在后文中稱為“TIM-3”）的胞外區結合，并表現出抗體依賴性細胞性細胞毒性（在后文中稱為“ADCC”）；生產所述抗體的雜交瘤；編碼所述抗體的DNA；包含所述DNA的載體；通過轉化所述載體而獲得的轉化體；使用所述雜交瘤或轉化體生產抗體或其抗體片段的方法；以及使用所述抗體或其抗體片段的診斷劑或治療劑。
技術介紹
TIM-3基因家族由小鼠中的8個基因和人類中的3個基因組成，并且每個這些基因分別位于11號染色體和染色體5q33處（非專利文獻1）。已知這些基因區域與自體免疫性疾病和過敏性疾病相關。TIM蛋白是具有結構保守的免疫球蛋白可變（IgV）結構域和粘蛋白結構域的I型跨膜蛋白。TIM蛋白被認為特異性表達在T細胞上并直接調控T細胞活性，但是最近有關于TIM-3蛋白在抗原呈遞細胞中的表達及其功能的報道（非專利文獻2）。根據晶體結構分析，TIM蛋白具有保守的蛋白結構，并在IgV結構域中具有配體結合位點。TIM-3被鑒定為特異性表達在小鼠Th1細胞上但不表達在Th2細胞上的分子（非專利文獻3）。可以在公共數據庫例如GenBank登記號NM_032782和NM-134250中獲得TIM-3的DNA序列、氨基酸序列和三維結構。TIM-3也被稱為HAVCR2。在人類中，與小鼠類似，TIM-3被表達在T細胞以及吞噬細胞例如巨噬細胞和樹突狀細胞上。TIM-3與蛋白配體（例如半乳糖凝集素9）的結合能夠通過誘導凋亡的機制來抑制Th1應答，從而導致例如誘導了外周耐受。用siRNA降低人TIM-3的表達或通過阻斷性抗體抑制人TIM-3，增加了γ干擾素（IFN-γ）從CD4陽性T細胞的分泌，這支持了TIM-3在人T細胞中的抑制作用。在吞噬細胞中，TIM-3還作為用于識別凋亡細胞的受體而起作用。來自于自體免疫性疾病患者的臨床樣品的分析顯示，在CD4陽性細胞中沒有TIM-3的表達。具體來說，在源自于患有多發性硬化癥的患者的腦脊液的T細胞克隆中，與源自于正常健康人的克隆相比，TIM-3的表達水平更低并且IFN-γ的分泌水平更高（非專利文獻4）。關于TIM-3與過敏性疾病或哮喘的關聯性，已有報道（專利文獻1和2）。根據來自于急性髓性白血病（在后文中稱為“AML”）患者的造血干細胞和正常造血干細胞的微陣列分析，TIM-3被表達在AML干細胞上，因此，所述分析表明TIM-3參與惡性血液病（非專利文獻5和專利文獻3）。到目前為止，建立的抗TIM-3單克隆抗體的實例包括抗人TIM-3大鼠單克隆抗體（Clone344823，由R&DSystems制造）和抗人TIM-3小鼠單克隆抗體（CloneF38-2E2，由R&DSystems制造）。相關技術專利文獻專利文獻1：WO96/27603專利文獻2：WO2003/063792專利文獻3：WO2009/091547非專利文獻非專利文獻1：HaflerDA等，JExpMed.205:2699-701（2008）非專利文獻2：AndersonAC等，Science318:1141-3（2007）非專利文獻3：MonneyL等，Nature415:536-41（2002）非專利文獻4：KoguchiK等，JExpMed.203:1413-8（2006）非專利文獻5：MajetiR等，ProcNatlAcadSciUSA2009Mar.3;106（9）:3396-401.
技術實現思路
本專利技術要解決的問題然而，還沒有關于具有ADCC活性的針對人TIM-3的單克隆抗體的報道。因此，本專利技術的目的是提供與TIM-3的胞外區的氨基酸序列或三維結構結合并表現出ADCC活性的單克隆抗體或抗體片段。此外，本專利技術的目的是通過篩選與所述單克隆抗體或其抗體片段競爭的抗人TIM-3抗體來提供具有高ADCC活性的抗人TIM-3抗體。此外，本專利技術將提供生產所述抗體的雜交瘤，編碼所述抗體的DNA，包含所述DNA的載體，通過轉化所述載體而獲得的轉化體，使用所述雜交瘤或轉化體生產抗體或其抗體片段的方法，以及使用所述抗體或其抗體片段作為活性成分的診斷劑或治療劑。問題的解決方案本專利技術的要點涉及下列項。（1）單克隆抗體或其抗體片段，其與人TIM-3的胞外區結合，同時與選自下面（i）至（iii）的一種抗體競爭：（i）抗體，其包括含有互補決定區（在后文中稱為“CDR”）1至3的抗體重鏈（在后文中稱為“H鏈”），所述互補決定區1至3包含分別由SEQIDNO：1至3表示的氨基酸序列；并包括含有CDR1至3的抗體輕鏈（在后文中稱為“L鏈”），所述CDR1至3包含分別由SEQIDNO：4至6表示的氨基酸序列，（ii）抗體，其包括含有CDR1至3的抗體H鏈，所述CDR1至3包含分別由SEQIDNO：11至13表示的氨基酸序列；并包括含有CDR1至3的抗體L鏈，所述CDR1至3包含分別由SEQIDNO：14至16表示的氨基酸序列，（iii）抗體，其包括含有CDR1至3的抗體H鏈，所述CDR1至3包含分別由SEQIDNO：21至23表示的氨基酸序列；并包括含有CDR1至3的抗體L鏈，所述CDR1至3包含分別由SEQIDNO：24至26表示的氨基酸序列。（2）上面（1）中所描述的單克隆抗體或其抗體片段，其中所述單克隆抗體與選自上面（i）至（iii）的一種抗體所結合的相同表位結合。（3）單克隆抗體或其抗體片段，其與人TIM-3的胞外區結合，同時與選自下面（a）和（b）的一種抗體競爭：（a）抗體，其包括含有由SEQIDNO：8表示的氨基酸序列的抗體VH，并包括含有由SEQIDNO：10表示的氨基酸序列的抗體VL，（b）抗體，其包括含有由SEQIDNO：18表示的氨基酸序列的抗體VH，并包括含有由SEQIDNO：20表示的氨基酸序列的抗體VL。（4）上面（3）中所描述的單克隆抗體或其抗體片段，其與選自上面（a）或（b）的一種抗體所結合的相同表位結合。（5）上面（1）至（4）任一項中所描述的單克隆抗體或其抗體片段，其是重組抗體。（6）上面（5）中所描述的單克隆抗體或其抗體片段，其是選自人嵌合抗體、人源化抗體和人抗體的重組抗體。（7）單克隆抗體或其抗體片段，其是選自下面（i）至（iii）的一種：（i）單克隆抗體及其抗體片段，其包括含有CDR1至3的抗體H鏈，所述CDR1至3包含分別由SEQIDNO：1至3表示的氨基酸序列；并包括含有CDR1至3的抗體L鏈，所述CDR1至3包含分別由SEQIDNO：4至6表示的氨基酸序列，（ii）單克隆抗體及其抗體片段，其包括含有CDR1至3的抗體H鏈，所述CDR1至3包含分別由SEQIDNO：11至13表示的氨基酸序列；并包括含有CDR1至3的抗體L鏈，所述CDR1至3包含分別由SEQIDNO：14至16表示的氨基酸序列，（iii）單克隆抗體及其抗體片段，其包括含有CDR1至3的抗體H鏈，所述CDR1至3包含分別由SEQIDNO：21至23表示的氨基酸序列；并包括含有CDR1至3的抗體L鏈，所述CDR1至3包含分別由SEQIDNO：24至26表示的氨基酸序列。（8）單克隆抗體及其抗體片段，其是選自下本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2010.06.11 US 61/3538361.單克隆抗體或其抗體片段，其與人TIM-3的胞外區結合，其中所述單克隆抗體是選自(i)和(ii)的單克隆抗體：(i)單克隆抗體，其包括含有互補決定區CDR1至3的抗體H鏈，所述CDR1至3分別由SEQIDNO：1至3表示的氨基酸序列組成；并包括含有CDR1至3的抗體L鏈，所述CDR1至3分別由SEQIDNO：4至6表示的氨基酸序列組成，和(ii)單克隆抗體，其包括含有CDR1至3的抗體H鏈，所述CDR1至3分別由SEQIDNO：21至23表示的氨基酸序列組成；并包括含有CDR1至3的抗體L鏈，所述CDR1至3分別由SEQIDNO：24至26表示的氨基酸序列組成，其中所述抗體片段是選自Fab、Fab'、F(ab')2、單鏈抗體(scFv)、二聚化的V區(雙抗體)、二硫鍵穩定化的V區(dsFv)和包含CDR的肽的抗體片段。2.權利要求1的單克隆抗體或其抗體片段，其與人TIM-3的胞外區的三維結構結合。3.單克隆抗體或其抗體片段，其與人TIM-3的胞外區結合，其中所述單克隆抗體是選自(a)的單克隆抗體：(a)單克隆抗體，其包括由SEQIDNO：8的第20至第140位的氨基酸序列組成的抗體VH，并包括由SEQIDNO：10的第21至第127位...

【專利技術屬性】
技術研發人員：高柳晉一郎，戶村瞳，俵知紀，稻垣好昌，久保田麗夫，赤司浩一，菊繁吉謙，
申請(專利權)人：協和發酵麒麟株式會社，國立大學法人九州大學，
類型：
國別省市：