一種紅腺忍冬葉綠原酸的超聲提取方法技術

本發明專利技術公開了一種紅腺忍冬葉綠原酸的超聲提取方法，以紅腺忍冬葉片為原料，獲取了綠原酸的超聲提取方法和工藝參數，為今后紅腺忍冬葉資源的開發利用和綠原酸工業化生產提供了一定的參考借鑒的作用；據實驗結果分析可知：紅腺忍冬葉中綠原酸的超聲提取最佳工藝條件是最佳工藝條件為A2B2C3D1，即提取溫度為50℃，乙醇濃度為60％。提取次數為3次，提取料液比為8倍。根據文獻報道，用其他方法提取紅腺忍冬葉中的綠原酸，得率在1％-2％之間，超聲波提取法的提取率為可達1.7％以上，由此可見超聲提取法較傳統方法收率高，而且提取時間短，條件溫和，是一種較好的提取方法。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于紅腺忍冬葉綠原酸提取領域，尤其涉及。
技術介紹
紅腺忍冬花[I, 2]是忍冬科植物紅腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.的干燥花蕾或帶初開的花，列在2005年版中國藥典“山銀花”項下，紅腺忍冬資源豐富，主產于河南、山東、云南及廣西等地，是山銀花藥材商品的主要來源之一。紅腺忍冬為臨床常用中藥，其味甘、性寒，用于癰腫療瘡、喉痹、丹毒、熱血毒痢、風熱感冒、瘟病發熱等癥，屬清熱解毒之要藥，山銀花對多種致病菌均有抑制作用，是一種廣譜抗菌中藥，有“中藥之中的青霉素”之美稱。化學和藥理研究證實其主要化學成分有揮發油類、有機酸類、黃酮類和苷類，綠原酸是其主要有效成分，藥理作用主要有抗菌、抗病毒、解熱和抗氧化，其抗菌作用的主要活性成分為綠原酸，但品種與產地不同而不同，因此金銀花山及山銀花中綠原酸含量的高低，是其質量優劣的重要標志。長期以來提取綠原酸以金銀花為工業原料，但價格昂貴，對同屬其它植物開發利用不夠，尤其是對紅腺忍冬植物葉的重視和研究程度不夠，紅腺忍冬各部位中都有一定的綠原酸，但含量高低不同，依次為花 >葉>莖>根，且葉中的綠原酸含量較高，是花的69.63%，大大超過了根莖，而忍冬莖，葉的藥源遠比紅腺忍冬豐富，采集容易，價格便宜，應該充分利用。因此研究紅腺忍冬葉片綠原酸的提取，為充分利用紅腺忍冬資源提供一定的理論和應用基礎。
技術實現思路
本專利技術實施例的目的在于提供，旨在解決長期以來提取綠原酸以金銀花 為工業原料，但價格昂貴，對同屬其它植物開發利用不夠，尤其是對紅腺忍冬植物葉的重視和研究程度不夠，紅腺忍冬各部位中都有一定的綠原酸，但含量高低不同，依次為花>葉>莖>根，且葉中的綠原酸含量較高，是花的69.63%，大大超過了根莖，而忍冬莖，葉的藥源遠比紅腺忍冬豐富，采集容易，價格便宜，應該充分利用的問題。本專利技術實施例是這樣實現的，，該超聲提取方法包括以下步驟:步驟1，進行綠原酸含量測定，主要包括:(I)最大吸收波長的確定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液適量，置IOmL量瓶中，再加水至刻度，搖勻，放置15min，以相應試劑為空白，在分光光度計上于200-400nm掃描；對照品溶液與供試品溶液在328nm處均有最大吸收，故將328nm作為測定波長；(2)對照品溶液的制備精密稱取對照品10mg，加適量70%乙醇，置水浴上微熱使溶解，放冷后定容至50ml，搖勻，即得，每Iml含紅腺忍冬葉0.2mg ；(3)標準曲線的繪制精密量取對照品溶液2、4、6、8、IO、12mL，分別置于50mL量瓶中，加水適量，搖勻.再加水至刻度，搖勻，放置15min，以相應試劑為空白.在328nm波長處測定吸光度。以綠原酸標品的濃度為橫坐標，以在328nm下測得不同濃度的綠原酸標準品的吸光值為縱坐標，做標準曲線，得回歸方程；步驟2，進行紅腺忍冬葉中綠原酸超聲提取的單因素試驗，主要包括:藥材與一定量的溶劑于燒杯中，放入超聲波清洗器一定時間，過濾，再將溶液放入燒瓶，用旋轉蒸發儀進行濃縮提取，干燥得到提取粗品，在紫外分光光度計下測定吸光值，并計算綠原酸的提取率；分別對影響超聲提取的每一因素，設計5個水平進行試驗，通過比較提取率確定對提取率影響較大的4個因數進行正交試驗；(I)溶劑乙醇濃度按乙醇濃度40%，50%，60%，70%，80%，其它提取條件為提取I次、提取時間10分鐘、溶劑體積為藥材重量8倍和提取溫度60°C的情況下進行超聲提取。比較提取率，得出最佳溶劑乙醇濃度；(2)溶劑體積(藥材重量倍數)按溶劑體積為6倍、8倍、10倍、12倍、14倍，其它提取條件為提取I次、提取時間10分鐘、最佳乙醇濃度和提 取溫度60°C情況下，進行超聲提取，比較提取率，得出最佳溶劑體積；(3)提取溫度按提取溫度401:、501:、601:、701:、801:，其它提取條件:提取1次、提取時間10分鐘、最佳乙醇濃度、最佳溶劑體積情況下，進行超聲提取，比較提取率，得出最佳提取溫度；(4)提取時間(分鐘)按提取時間15min、20min、25min、30min、35min，其它提取條件為提取I次、最佳乙醇濃度、最佳溶劑體積和最佳提取溫度的情況下，進行超聲提取，比較提取率，得出最佳提取時間；(5)提取次數按提取次數I次、2次、3次、4次、5次，其它提取條件為最佳提取時間、最佳乙醇濃度、最佳溶劑體積和最佳提取溫度的情況下，進行加熱回流提取，比較提取率，得出最提取次數。進一步，該提取方法進一步包括紅腺忍冬葉中提取物的TCL檢測方法:步驟1，硅膠G薄層的制備將3.5g羧甲基纖維素鈉用IOOml加熱溶解，在研缽中將硅膠碾勻，均勻鋪在玻片上，自然風干，待用；在108°C烘箱內活化半個小時待用；步驟2，TCL檢測用毛細管吸取紅腺忍冬葉提取物的乙醇溶解液和對照品乙醇溶解液，在距硅膠薄層板下邊緣8mm的位置進行點樣，點樣斑點的直徑為l_2mm。以正丁醇-冰醋酸-水(7:1: 2)為展開劑展開。待展開8cm時，自然晾干，放于紫外燈下觀察，記錄顯色熒光點的顏色，并計算比移值(Rf)。進一步，該提取方法得到的紅腺忍冬葉中綠原酸提取的最佳工藝條件為:乙醇的體積為紅腺忍冬葉質量的8倍，提取次數3次，乙醇濃度為60%，提取溫度為50°C。本專利技術以紅腺忍冬葉片為原料，獲取了綠原酸的超聲提取方法和工藝參數。為今后紅腺忍冬葉資源的開發利用和綠原酸工業化生產提供了一定的參考借鑒的作用，對推動我國紅腺忍冬葉的產業化發展有著積極的意義。此實驗只對紅腺忍冬葉粗產品作了一些研究，至于其純化還有待進一步研究。據實驗結果分析可知:紅腺忍冬葉中綠原酸的超聲提取最佳工藝條件是最佳工藝條件為A2B2C3D1,即提取溫度為50°C，乙醇濃度為60%，，提取次數為3次，提取料液比為8倍。根據·文獻報道，用其他方法提取紅腺忍冬葉中的綠原酸，得率在1% -2%之間，超聲波提取法的提取率為可達1.7%以上，由此可見超聲提取法較傳統方法收率高，而且提取時間短，條件溫和，是一種較好的提取方法。附圖說明圖1是本專利技術實施例提供的綠原酸的標準曲線；圖2是本專利技術實施例提供的溶劑濃度對提取率的影響曲線；圖3是本專利技術實施例提供的溶劑體積對提取率的影響曲線；圖4是本專利技術實施例提供的提取溫度對提取率的影響曲線；圖5是本專利技術實施例提供的提取次數對提取率的影響曲線；圖6是本專利技術實施例提供的TCL結果色斑圖。具體實施例方式為了使本專利技術的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合附圖及實施例，對本專利技術進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本專利技術，并不用于限定本專利技術。本專利技術實施例提供了，具體步驟如下:I材料的選取1.1實驗材料紅腺忍冬葉，產自河南，經過粉碎處理。1.2實驗儀器98-11-B磁力攪拌電熱套(天津市泰斯特儀器有限公司)；KQ2200型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；HH數顯恒溫水浴鍋(金壇市金城國勝實驗儀器廠)；WFJ 7200型可見分光光度計(尤尼柯(上海)儀器有限公司)；AY220電子天平(SHIMADZUCORPORATION JAPAN)。1.3實驗試劑乙醇(均為分析醇、95%的工業乙醇)，冰醋酸，正丁醇，硅膠。2實驗方法2.1.綠原酸含量本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種紅腺忍冬葉綠原酸的超聲提取方法，其特征在于，該超聲提取方法包括以下步驟：步驟1，進行綠原酸含量測定，主要包括：(1)最大吸收波長的確定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液適量，置10mL量瓶中，再加水至刻度，搖勻，放置15min，以相應試劑為空白，在分光光度計上于200?400nm掃描；對照品溶液與供試品溶液在328nm處均有最大吸收，故將328nm作為測定波長；(2)對照品溶液的制備精密稱取對照品10mg，加適量70％乙醇，置水浴上微熱使溶解，放冷后定容至50ml，搖勻，即得，每1ml含紅腺忍冬葉0.2mg；(3)標準曲線的繪制精密量取對照品溶液2、4、6、8、10、12mL，分別置于50mL量瓶中，加水適量，搖勻.再加水至刻度，搖勻，放置15min，以相應試劑為空白.在328nm波長處測定吸光度。以綠原酸標品的濃度為橫坐標，以在328nm下測得不同濃度的綠原酸標準品的吸光值為縱坐標，做標準曲線，得回歸方程；步驟2，進行紅腺忍冬葉中綠原酸超聲提取的單因素試驗，主要包括：藥材紅腺忍冬葉片經60℃烘干，再粉碎過60目篩，稱取一定量粉碎的紅腺忍冬葉與一定量的溶劑于燒杯中，放入超聲波清洗器一定時間，過濾，再將溶液放入燒瓶，用旋轉蒸發儀進行濃縮提取，干燥得到提取粗品，在紫外分光光度計下測定吸光值，并計算綠原酸的提取率；分別對影響超聲提取的每一因素，設計5個水平進行試驗，通過比較提取率確定對提取率影響較大的4個因數進行正交試驗；(1)溶劑乙醇濃度按乙醇濃度40％，50％，60％，70％，80％，其它提取條件為提取1次、提取時間10分鐘、溶劑體積為藥材重量8倍和提取溫度60℃的情況下進行超聲提 取。比較提取率，得出最佳溶劑乙醇濃度；(2)溶劑體積(藥材重量倍數)按溶劑體積為6倍、8倍、10倍、12倍、14倍，其它提取條件為提取1次、提取時間10分鐘、最佳乙醇濃度和提取溫度60℃情況下，進行超聲提取，比較提取率，得出最佳溶劑體積；(3)提取溫度按提取溫度40℃、50℃、60℃、70℃、80℃，其它提取條件：提取1次、提取時間10分鐘、最佳乙醇濃度、最佳溶劑體積情況下，進行超聲提取，比較提取率，得出最佳提取溫度；(4)提取時間(分鐘)按提取時間15min、20min、25min、30min、35min，其它提取條件為提取1次、最佳乙醇濃度、最佳溶劑體積和最佳提取溫度的情況下，進行超聲提取，比較提取率，得出最佳提取時間；(5)提取次數按提取次數1次、2次、3次、4次、5次，其它提取條件為最佳提取時間、最佳乙醇濃度、最佳溶劑體積和最佳提取溫度的情況下，進行加熱回流提取，比較提取率，得出最提取次數。...

【技術特征摘要】
1.一種紅腺忍冬葉綠原酸的超聲提取方法，其特征在于，該超聲提取方法包括以下步驟: 步驟1，進行綠原酸含量測定，主要包括: (1)最大吸收波長的確定 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液適量，置IOmL量瓶中，再加水至刻度，搖勻，放置15min，以相應試劑為空白，在分光光度計上于200-400nm掃描；對照品溶液與供試品溶液在328nm處均有最大吸收，故將328nm作為測定波長； (2)對照品溶液的制備 精密稱取對照品10mg，加適量70%乙醇，置水浴上微熱使溶解，放冷后定容至50ml，搖勻，即得，每Iml含紅腺忍冬葉0.2mg ； (3)標準曲線的繪制 精密量取對照品溶液2、4、6、8、10、12mL，分別置于50mL量瓶中，加水適量，搖勻.再加水至刻度，搖勻，放置15min，以相應試劑為空白.在328nm波長處測定吸光度。以綠原酸標品的濃度為橫坐標，以在328nm下測得不同濃度的綠原酸標準品的吸光值為縱坐標，做標準曲線，得回歸方程； 步驟2，進行紅腺忍冬葉中綠原酸超聲提取的單因素試驗，主要包括: 藥材紅腺忍冬葉片經60°C烘干，再粉碎過60目篩，稱取一定量粉碎的紅腺忍冬葉與一定量的溶劑于燒杯中，放入超聲波清洗器一定時間，過濾，再將溶液放入燒瓶，用旋轉蒸發儀進行濃縮提取，干燥得到提取粗品，在紫外分光光度計下測定吸光值，并計算綠原酸的提取率； 分別對影響超聲提取的每一因素，設計5個水平進行試驗，通過比較提取率確定對提取率影響較大的4個因數進行正交試驗； (1)溶劑乙醇濃度 按乙醇濃度40 %，50 %，60 %，70 %，80 %，其它提取條件為提取I次、提取時間10分鐘、溶劑體積為藥材重量8倍和提取溫度60°C的情況下進行超聲提取。比較提取率，得出最佳溶劑乙醇濃度； (2)溶劑體積(藥材重量倍數) 按溶劑體...

【專利技術屬性】
技術研發人員：舒孝順，卿婉華，許凱揚，
申請(專利權)人：長沙理工大學，
類型：發明
國別省市：