本發明專利技術涉及人血白蛋白制品中激肽釋放酶原激活劑的控制方法，包括在低溫乙醇法分離制備人血白蛋白的過程中增加：1）在從組分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ上清液中分離組分Ⅳ的步驟中加入經枸櫞酸鈉預處理的活化硅藻土，對凝血因子Ⅻ進行吸附，以降低凝血因子Ⅻ含量；2）將超濾透析純化后的組分Ⅴ通過帶正電荷的除脂濾芯，吸附除去殘留在人血白蛋白溶液中的活化因子Ⅻɑ片段；通過以上兩步工藝降低人血白蛋白制品中的激肽釋放酶原激活劑含量，同時對蛋白分子活性、各項理化指標及蛋白收率均無影響，為患者安全用藥提供了可靠保證。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及人血白蛋白制品的制備方法，具體是涉及一種人血白蛋白生產過程中激肽釋放酶原激活劑(PKA)含量的控制方法。
技術介紹
人血白蛋白是以經乙型肝炎疫苗免疫的健康人血漿為原料，經低溫乙醇法分離而成。健康人血漿是一種極為復雜的蛋白混合物，其中，血漿中的凝血因子XD是以無活性的酶原形式存在的，血管內皮細胞受損時，露出的帶負電荷的膠原纖維可以激活凝血因子XD變成活化因子XD a，活化因子XD a能激活激肽釋放酶原(PK)生成激肽釋放酶(Kk)，Kk使激肽原釋放出緩激肽，這些活化的因子片段被稱為激肽釋放酶原激活劑(PKA)。人血白蛋白制品的反復融化和冰凍會導致制品中蛋白組份變性，可使PKA升高。當含有PKA較多的人血白蛋白制品用于人體靜脈快速輸注時，PKA可以激活人體內的前激肽釋放酶，生成激肽釋放酶，導致激肽產生，引起毛細血管通透性增加、血管舒張、血壓下降、面色潮紅、頭疼、心悸、呼吸困難等不良反應。因此，檢測血液制品中的PKA含量，并規定其限量是很有必要的。《中國藥典》中規定了人血白蛋白制品中激肽釋放酶原激活劑(PKA)的含量應不高于35IU/ml。現通行的血漿低溫乙醇法分離工藝為:1)、原料血漿合并融化；2)、調整蛋白濃度4.0±0.5%、乙醇含量20±1%、pH值6.80±0.10、溫度一4.5±0.5°C，攪拌，壓濾分離，收集組分I +11 +III沉淀；3)、分離沉淀后的組分I + II +III上清液調整蛋白濃度1.25 1.50%、乙醇含量40 ±1%、pH值5.85 ±0.05、溫度一4.5±0.5°C ;攪拌，壓濾分離，收集組分IV沉淀；4)、分離沉淀后的組 分IV上清液調整蛋白濃度1.0 1.2%、乙醇含量40±1%、pH值4.80±0.10、溫度一 8.0±0.5°C ;攪拌，壓濾分離，收集組分V沉淀；5)、將組分V沉淀以6 8倍沉淀體積的2 4°C 10%乙醇溶液攪拌溶解，過濾，濾液應澄清，無纖維等異物；6)、透析脫醇、濃縮、配液，60±0.5°C、10小時病毒滅活處理。現有的血漿低溫乙醇分離方法因原料血漿保存不當等其他原因，容易出現人血白蛋白制品中PKA過高的現象，常規的方法是將制品反復加熱，對PKA進行滅活。然而，反復的加熱過程對人血白蛋白制品造成了潛在的威脅。
技術實現思路
本專利技術的目的是針對目前人血白蛋白制品分離過程中容易出現激肽釋放酶原激活劑過高的問題，提供一種。本專利技術包括在低溫乙醇法分離制備人血白蛋白的工藝中，所述人血白蛋白低溫乙醇法分離制備工藝為常規工藝，本專利技術是在低溫乙醇法分離制備人血白蛋白的過程中增加下述兩步工藝: I)、利用活化硅藻土對凝血因子XD的吸附作用，在從組分I + II +III上清液中分離組分IV的步驟中加入經枸櫞酸鈉預處理的活化硅藻土，對凝血因子xn進行吸附，以降低凝血因子xn含量； 2)、將超濾透析純化后的組分V通過帶正電荷的除脂濾芯，靜電吸附除去殘留在人血白蛋白溶液中的活化因子XD Q片段； 通過以上兩步工藝，降低人血白蛋白制品中的激肽釋放酶原激活劑含量。其中，所述經枸櫞酸鈉預處理的活化硅藻土采用以下步驟制備: I)、將娃藻土加入2g/L的枸櫞酸鈉水溶液中，攪拌5 10分鐘,混懸,靜置3 5分鐘，去除懸浮物和上清； 2 )、用不加枸櫞酸鈉的水重復上述操作，反復抽干，至洗液pH值呈中性； 3)、再加入體積百分濃度0.025%的冰醋酸水溶液，攪拌5 10分鐘，混懸，靜置3 5分鐘，抽干得固體； 4)、用水反復洗滌固體，至洗液pH值呈中性，抽干得到活化硅藻土，冷藏保存。以上使用的水均為20 30°C的注射用水。進而，本專利技術從組分I + II +III上清液中分離組分IV的具體分離條件為:調整上清液的PH值5.91 5.94，蛋白質量濃度1.0 1.5%，離子強度0.1，溫度一4 一5°C，乙醇體積濃度40 42%，加入活化硅藻土，使其在上清液中的濃度為5 8g/L，以60 120轉/分的速度攪拌30 60分鐘。本專利技術將上述上清液以濾板壓濾分別得到組分IV沉淀和組分IV上清液。其中，壓濾采用pall公司的50P濾板,所需濾板面積為5 8平方米/噸血衆,過濾壓力控制在0 3.0bar0具體地，本專利技術純化后的組分V是以0 2.0bar的壓力通過所述帶正電荷的除脂濾芯。所述帶正電荷的除脂濾芯先以注射用水預洗15分鐘，再用體積濃度12%的乙醇溶液沖洗，吹干后使用。本專利技術控制方法中，所使用的硅藻土助濾劑通過預處理去除了其中的微小顆粒，去除了熱原，并對硅藻土進行了活化，不會對人血白蛋白制品造成不利影響。本專利技術的控制方法對蛋白分子活性、各項理化指標及蛋白收率均無影響，通過本專利技術方法進行控制后的人血白蛋白制品中，PKA含量得以大大降低，為患者安全用藥提供了可靠保證。附圖說明圖1是采用本專利技術控制方法的低溫乙醇法分離制備人血白蛋白工藝流程圖。具體實施例方式實施例1 1、硅藻土活化預處理 取IOOg枸櫞酸鈉溶解在50L 20 30°C注射用水中，加入5kg硅藻土，攪拌5分鐘，混懸，靜置5分鐘，去除懸浮物和上清； 以不加枸櫞酸鈉的注射用水重復上述操作，反復抽干，至洗液PH值呈中性； 將25mL冰醋酸溶解在IOL 20 30°C注射用水中，加入上述抽干固體，攪拌5分鐘，混懸，靜置3分鐘，抽干得固體；用注射用水反復洗滌固體，至洗液pH值呈中性，抽干，得到活化硅藻土，置于冷操作間待用。2、凝血因子XD吸附 取低溫乙醇法分離制備人血白蛋白過程中得到的組分I + II +III上清液100L，該上清液已經被調節至PH值5.91，蛋白濃度1.2%，離子強度為0.1，溫度-4.40C，乙醇濃度40.2%。向上清液中加入上述預處理的活化硅藻土 0.5kg，以60轉/分的速度攪拌30分鐘后，上濾板壓濾，分別得到組分IV沉淀和組分IV上清液。壓濾過程采用pall公司的50P濾板，所需濾板面積為5 8平方米/噸血衆,過濾壓力控制在0 3.0bar。3、PKA靜電吸附 在過濾器中安裝帶正電荷的ZETAPLUS除脂濾芯，用冷注射用水預洗過濾器15分鐘，再用12%的乙醇溶液(pH值4.56)約50L沖洗過濾器，吹干。取低溫乙醇法分離制備人血白蛋白過程中純化后的組分V，以0 2.0bar的壓力通過上述過濾器進行過濾。實施例2 1、硅藻土活化預處理 取IOOg枸櫞酸鈉溶解在50L 20 30°C 注射用水中，加入5kg硅藻土，攪拌8分鐘，混懸，靜置4分鐘，去除懸浮物和上清； 以不加枸櫞酸鈉的注射用水重復上述操作，反復抽干，至洗液PH值呈中性； 將25mL冰醋酸溶解在IOL 20 30°C注射用水中，加入上述抽干固體，攪拌8分鐘，混懸，靜置4分鐘，抽干得固體； 用注射用水反復洗滌固體，至洗液pH值呈中性，抽干，得到活化硅藻土，置于冷操作間待用。2、凝血因子XD吸附 取低溫乙醇法分離制備人血白蛋白過程中得到的組分I + II +III上清液100L，該上清液已經被調節至pH值5.93，蛋白濃度1.4%，離子強度為0.1，溫度-4.3°C，乙醇濃度40.8%。向上清液中加入上述預處理的活化硅藻土 0.7kg，以90轉/分的速度攪拌45分鐘后，上濾板壓濾，分別得到組分本文檔來自技高網...
【技術保護點】
人血白蛋白制品中激肽釋放酶原激活劑的控制方法，包括在低溫乙醇法分離制備人血白蛋白的工藝中，其特征是在低溫乙醇法分離制備人血白蛋白的過程中增加下述兩步工藝：1）、在從組分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ上清液中分離組分Ⅳ的步驟中加入經枸櫞酸鈉預處理的活化硅藻土，對凝血因子Ⅻ進行吸附，以降低凝血因子Ⅻ含量；2）、將超濾透析純化后的組分Ⅴ通過帶正電荷的除脂濾芯，吸附除去殘留在人血白蛋白溶液中的活化因子Ⅻɑ片段；通過以上兩步工藝，降低人血白蛋白制品中的激肽釋放酶原激活劑含量。
【技術特征摘要】
1.血白蛋白制品中激肽釋放酶原激活劑的控制方法，包括在低溫乙醇法分離制備人血白蛋白的工藝中，其特征是在低溫乙醇法分離制備人血白蛋白的過程中增加下述兩步工藝: 1)、在從組分I+ II +III上清液中分離組分IV的步驟中加入經枸櫞酸鈉預處理的活化硅藻土，對凝血因子XD進行吸附，以降低凝血因子XD含量； 2)、將超濾透析純化后的組分V通過帶正電荷的除脂濾芯，吸附除去殘留在人血白蛋白溶液中的活化因子XDa片段； 通過以上兩步工藝，降低人血白蛋白制品中的激肽釋放酶原激活劑含量。2.根據權利要求1所述的人血白蛋白制品中激肽釋放酶原激活劑的控制方法，其特征是所述的經枸櫞酸鈉預處理的活化硅藻土采用以下步驟制備: 1)、將娃藻土加入2g/L的枸櫞酸鈉水溶液中，攪拌5 10分鐘,混懸,靜置3 5分鐘，去除懸浮物和上清； 2)、用不加枸櫞酸鈉的水重 復上述操作，反復抽干，至洗液pH值呈中性； 3)、再加入體積百分濃度0.025%的冰醋酸水溶液，攪拌...
【專利技術屬性】
技術研發人員：周滿祥，楊向有，申云飛，張慧蘭，
申請(專利權)人：山西康寶生物制品股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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