一種湖州百合組培快繁方法技術

本發明專利技術公開了一種湖州百合組培快繁方法，包括：將洗凈的湖州百合的鱗片置于200~300mg/L甲基托布津中震蕩0.3~1h后，于70~75%酒精中浸泡20~30s，再浸入質量體積濃度為0.1%~0.2%升汞中15~25min，沖洗干凈；將沖洗干凈的鱗片接至誘導培養基進行誘導培養；誘導出芽后，轉移到增殖培養基進行增殖培養，獲得叢生芽；將叢生芽接至壯球生根培養基，獲得無菌苗。本發明專利技術的方法有效解決了湖州百合外植體在初代培養過程中易出現真菌、細菌污染的情況，將污染率控制在25%以下，此外死亡率也較低，且建立了一整套完整的初代、繼代、壯球、生根培養過程，具有高誘導率及增殖倍數。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及植物組織培養
，尤其涉及ー種湖州百合組培快繁方法。
技術介紹
食用百合是野生百合經過多年良種馴化、品種篩選及人工栽培后，可供食用、安全無毒的食品，是我國經濟價值較高的上等蔬菜，具較好的藥用價值和保健功能。食用百合可分為甜百合和苦百合兩大類，蘭州百合、龍牙百合、卷丹、川百合即為國內主要的食用百合。卷丹又名虎皮百合、南京百合，屬于苦百合類食用百合，野生種在我國分布廣泛，而以食用作為栽培目的則主要集中在江浙地區。湖州百合(Lilium Iancifolium)是卷丹的一個生態型，已有五六百年的栽培歷史，主要分布在湖州市的太湖、漾西、塘甸等鄉鎮，是浙江省的傳統特產。湖州百合栽培種鱗莖個大，肉質細嫩，營養(蛋白質、糖、礦物質及多種維生素)豐富，味甘中帶微苦，風味獨特，且含微量秋水仙堿等多種藥理成分，有潤肺化痰、安心寧神、清熱利尿、健胃益脾、補中益氣等功效，并具一定抗癌作用，被譽為“百合之王”。湖州百合除鮮食外，還被加工成百合干、百合粉、百合罐頭、百合飲料等加以出售。隨著我國人民生活水平的提高和飲食結構的改變，清涼滋補的百合，作為藥膳被人們所青睞，需求量逐年増加。然而，湖州百合雖種植歷史悠久，但由于該地農民長期使用當地老品種，不注意提純復壯，而小鱗莖、珠芽、鱗片扦插的無性繁殖方法，均導致后代容易積累病毒，使得百合病毒病頻發，加之新種質缺乏，導致品種退化現象嚴重。此外，傳統繁殖方式主要是去大留小,周期長，占有耕地且降低產量,大大增加了種植成本。目前， 植物快繁技術在以無性繁殖為主的園藝作物上應用廣泛，技術也相對成熟。利用組織培養繁殖湖州百合，可在短期內獲得保持原有品種優良性狀的大量種苗，大大提高其產量和品質。因此，若能推行組培エ廠化育苗方式，不僅能使一些優良株系得到迅速推廣，且能大大節約留種成本，產生顯著經濟效益。目前，針對蘭州百合、細葉百合、野百合及東方系百合等的組培育苗的已有很多研究，但是不同種百合，因基因型等遺傳背景差異，其所需的技術條件差別很大。而對湖州百合組培快繁技術進行系統研究還未見報道，特別是百合的鱗莖生長于地下，帶菌多，使得組培快繁過程中的消毒過程難度加大，始終存在著污染率較高的問題。
技術實現思路
本專利技術提供了ー種湖州百合組培快繁方法，具有高誘導率及増殖倍數，且在獲取無菌苗的過程中污染率及死亡率均較低。ー種湖州百合組培快繁方法，包括:(I)將洗凈的湖州百合的鱗片置于20(T300mg/L甲基托布津中震蕩0.3 Ih后，于70 75%酒精中浸泡20 30s，再浸入質量體積濃度為0.1% 0.2%升汞中15 25min，沖洗干凈；(2)將沖洗干凈的鱗片接至誘導培養基進行誘導培養；(3)誘導出芽后，轉移到増殖培養基進行増殖培養，獲得叢生芽；(4)將叢生芽接至壯球生根培養基，獲得無菌苗；其中，所述誘導培養基為:瓊脂，6 8g/L ;蔗糖，30 35g/L ；MS粉，4 5g/L ;6_BA，0.5 1.0mg/L ；NAA,0.1 0.5mg/L ；所述增殖培養基為:瓊脂，6 8g/L ；蔗糖，6(T65g/L ；MS粉，4 5g/L ;6_BA，1.(Tl.5mg/L ；NAA,0.1 0.2mg/L ；所述壯球生根培養基為:瓊脂，6 8g/L ；蔗糖，7(T80g/L ；MS粉，4 5g/L ；NAA,0.r0.2mg/L;活性炭，2 3g/L。所述湖州百合的鱗片在洗浄消毒前置于2 4°C處理f 4周。將外植體材料進行一段時間的低溫處理，不僅可以減少組織褐化現象的發生，提高誘導率，還能有效降低外植體的帶菌率。但低溫時間過長過短均不適宜，時間過長易滋生真菌，過短則達不到降低污染率的作用，優選的，所述處理的時間為2 4周，更優選為2周。將甲基托布津、酒精和升汞配合使用，可進行深度滅菌，達到比単一消毒劑更好的消毒效果。另外，需嚴格控制消毒劑的濃度和消毒時間，防止殺死外植體細胞，影響誘導率。甲基托布津是ー種廣譜性的高效、低毒、低殘留的內吸殺菌劑，被植物吸收后轉化為多菌靈，干擾真菌有絲分裂中紡錘體的形成，影響細菌細胞分裂，使細胞壁中毒，孢子萌發長出的芽管畸形，從而殺死病菌。優選的，所述甲基托布津的濃度為25(T300mg/L，震蕩時間為0.3 0.45h ;更優選的，所述甲基托布津的濃度為250mg/L，震蕩時間為0.3h。7(T75%的酒精具有強滲透性，可進入細菌的細胞內使蛋白變性，但是在殺死細菌的同時易損傷植物細胞，故將酒精消毒時間控制在30s以內。優選的，所述酒精的濃度為75%，浸泡時間為30s。升汞可以使病菌的蛋白變性，且對細菌的消毒能力比真菌強。優選的，所述升汞的質量體積濃度為0.1%，浸泡時間為2(T25min ;更優選的，所述升汞的濃度為0.1%，浸泡時間為20min。優選的，所述升汞中含有體積比為f 2%的表面活性剤。表面活性劑可以使升汞更好的與外植體的表面接觸，增強消毒效果，所述的表面活性劑通常為聚山梨醇酯類表面活性剤，具體可以為吐溫-20，價格低廉，且能顯著增強附著作用。在培養基中添加外源激素可以誘導外植體出芽、生根，這主要是外源激素與植物外植體內源激素互作的結果，而不同種植物外植體內源激素的錯綜復雜及內源激素與外源激素作用機理不同，導致了不同種植物外植體所需添加的激素種類、激素含量、激素配比都有很大差別。 優選的，所述誘導培養基為:瓊脂，6^8g/L ;蔗糖，30g/L ；MS粉，4^5g/L ;6_BA，1.0mg/L ；NAA, 0.5mg/L。優選的，所述增殖培養基為:瓊脂，6^8g/L ；蔗糖，60g/L ；MS粉，4^5g/L ;6_BA，1.5mg/L ；NAA, 0.lmg/し優選的，所述壯球生根培養基為:瓊脂，6 8g/L ;蔗糖，80g/L ；MS粉，4 5g/L ；NAA,0.lmg/L ;活性炭，3g/L。百合的組培苗生長勢弱，根葉細長柔軟，移栽過程中成活率低，容易重新感染病毒，是我國百合種球エ廠化生產中遇到的突出問題。因此，通過組織培養條件，培養膨大的試管鱗莖，可促進壯苗、改善試管苗質量、縮短組培苗在大田生長周期、提高移栽成活率，且有利于種球的貯藏、運輸和種質保存。本專利技術專設壯球生根培養基，為獲得成活率更高的組培苗提供保障。適宜的培養條件有利于湖州百合的鱗片出芽，快速生長增殖及生根。所述誘導培養和增殖培養的條件為:光照強度150(T20001ux，光照時間為10 12小吋/天，溫度為25±2°C。將叢生芽接至壯球生根培養基吋，于黑暗條件下培養3(T35d后轉至弱光條件(光照強度一般為8001ux，光照時間一般為12小時/天)培養3飛d，再調整成與所述誘導培養和増殖培養相同的條件下進行培養，即可獲得無菌苗。與現有技術相比，本專利技術的有益效果為:本專利技術的方法有效解決了湖州百合外植體在初代培養過程中易出現真菌、細菌污染的情況，將污染率控制在25%以下，此外，死亡率也較低。本專利技術建立了一整套完整的初代、繼代、壯球、生根培養過程，尤其是針對外植體消毒滅菌及不同培養階段的培養基配方，從而可滿足湖州百合離體條件下不同時期的生長發育需求，在較短時間內獲得大量増殖，繁殖系數高達15，且無菌苗小鱗莖可達直徑Icm以上，在一定程度上可進行エ廠化組培苗生產。附圖說本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種湖州百合組培快繁方法，包括：（1）將洗凈的湖州百合的鱗片置于200~300mg/L甲基托布津中震蕩0.3~1h后，于70~75%酒精中浸泡20~30s，再浸入質量體積濃度為0.1%~0.2%升汞中15~25min，沖洗干凈；（2）將沖洗干凈的鱗片接至誘導培養基進行誘導培養；（3）誘導出芽后，轉移到增殖培養基進行增殖培養，獲得叢生芽；（4）將叢生芽接至壯球生根培養基，獲得無菌苗；其中，所述誘導培養基為：瓊脂，6~8g/L；蔗糖，30~35g/L；MS粉，4~5g/L；6?BA，0.5~1.0mg/L；NAA，0.1~0.5mg/L；所述增殖培養基為：瓊脂，6~8g/L；蔗糖，60~65g/L；MS粉，4~5g/L；6?BA，1.0~1.5mg/L；NAA，0.1~0.2mg/L；所述壯球生根培養基為：瓊脂，6~8g/L；蔗糖，70~80g/L；MS粉，4~5g/L；NAA，0.1~0.2mg/L；活性炭，2~3g/L。

【技術特征摘要】
1.ー種湖州百合組培快繁方法，包括: (1)將洗凈的湖州百合的鱗片置于20(T300mg/L甲基托布津中震蕩0.3 lh后，于70 75%酒精中浸泡20 30s，再浸入質量體積濃度為0.1% 0.2%升汞中15 25min，沖洗干凈; (2)將沖洗干凈的鱗片接至誘導培養基進行誘導培養； (3)誘導出芽后，轉移到増殖培養基進行増殖培養，獲得叢生芽； (4)將叢生芽接至壯球生根培養基，獲得無菌苗； 其中，所述誘導培養基為:瓊脂，6 8g/L ；蔗糖，30 35g/L ；MS粉，4 5g/L ;6_BA，0.5 1.0mg/L ；NAA,0.1 0.5mg/L ； 所述增殖培養基為:瓊脂，6 8g/L ;蔗糖，6(T65g/L ；MS粉，4 5g/L ;6_BA，1.(Tl.5mg/L ；NAA,0.r0.2mg/L ； 所述壯球生根培養基為:瓊脂，6 8g/L ；蔗糖，7(T80g/L ；MS粉，4 5g/L ；NAA,0.2mg/L;活性炭，2 3g/L。2.如權利要求1所述的ー種湖州百合組培快繁方法，其特征在于，所述湖州百合的鱗片在洗浄消毒前置于2 4°C處理f 4周。3.如權利要求1所述的湖 州百合組培快繁方法，其特征在于，所述甲基托布津的濃度為25(T300m...

【專利技術屬性】
技術研發人員：吳昀，常樂，夏宜平，張琳，馬怡迪，張佳平，
申請(專利權)人：浙江大學，
類型：發明
國別省市：