動物模型及治療分子制造技術

本發明專利技術揭示了產生嵌合人-非人抗體及嵌合抗體鏈的方法，如此產生的抗體和抗體鏈，以及包括完全人源化抗體的其衍生物，本發明專利技術揭示了包含所述抗體、抗體鏈及衍生物的組合物，以及適用于所述方法中的細胞、非人哺乳動物和載體。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】動物模型及治療分子
技術介紹
本專利技術涉及非人動物和細胞，它們被工程化而含有外源DNA，如人免疫球蛋白基因DNA，本專利技術還涉及它們在醫學和疾病研究中的應用，產生非人動物和細胞的方法，以及由這種動物產生的抗體和抗體鏈及其衍生物。為了解決人源化抗體的問題，許多公司著手產生具有人免疫系統的小鼠。使用的策略是敲除ES細胞中的重鏈和輕鏈基因座并且用設計為表達人重鏈和輕鏈基因的轉基因互補這些遺傳損害。盡管可以產生完全人抗體，但是這些模型具有一些主要限制:(i)重鏈和輕鏈基因座的大小(均幾Mb)使得在這些模型中不能導入完整基因座。結果獲得的轉基因品系具有非常有限的V區組成部分，喪失了大多數恒定區并且重要的遠端增強子區未包含在轉基因中。(ii)產生大插入物轉基因品系的極低效率以及將這些雜交進重鏈和輕鏈敲除品系以及使它們再次純合的復雜性和所需要的時間，限制了可以被分析而優化表達的轉基因品系數量。(iii)個體抗體親和性很少會達到從完整動物(非轉基因)中可獲得的程度。W02007117410揭示了表達嵌合抗體的嵌合構建體。W02010039900揭示了具有編碼嵌合抗體的基因組的敲入(knock in)細胞和哺乳動物。本專利技術提供了在非人類哺乳動物中產生包含人類Ig可變區的抗體的方法，本專利技術進一步提供了產生這種抗體的非人動物模型。專利技術概述一方面，本專利技術涉及非人類哺乳動物，其基因組包含:(a)位于宿主非人類哺乳動物恒定區上游的多個人類IgH V區、一或多個人類D區及一或多個人類J區；(b)任選地，位于宿主非人類哺乳動物K恒定區上游的一或多個人類Ig輕鏈K V區和一或多個人類Ig輕鏈K J區和/或位于宿主非人類哺乳動物λ恒定區上游的一或多個人類Ig輕鏈λ V區和一或多個人類Ig輕鏈λ J區；其中所述非人類哺乳動物能產生具有非人類哺乳動物恒定區和人類可變區的嵌合抗體或者嵌合抗體輕鏈或重鏈的所有組成成分(repertoire)。一方面，本專利技術涉及非人類哺乳動物，其基因組包含:(a)位于宿主非人類哺乳動物K恒定區上游的多個人類Ig輕鏈K V區和一或多個人類Ig輕鏈K J區和/或位于宿主非人類哺乳動物λ恒定區上游的多個人類Ig輕鏈λ V區和一或多個人類Ig輕鏈λ J區；及(b)任選地，位于宿主非人類哺乳動物恒定區上游的一或多個人類IgHV區、一或多個人類D區和一或多個人類J區；其中所述非人類哺乳動物能產生具有非人類哺乳動物恒定區和人類可變區的嵌合抗體或者嵌合輕鏈或重 鏈的所有組成成分。一方面，本專利技術涉及非人類哺乳動物細胞，其基因組包含:(a)位于宿主非人類哺乳動物恒定區上游的多個人類IgH V區、一或多個人類D區和一或多個人類J區，及(b)任選地，位于宿主非人類哺乳動物K恒定區上游的一或多個人類Ig輕鏈K V區和一或多個人類Ig輕鏈K J區和/或位于宿主非人類哺乳動物λ恒定區上游的一或多個人類Ig輕鏈λ V區和一或多個人類Ig輕鏈λ J區。一方面，本專利技術涉及非人類哺乳動物細胞，其基因組包含:(a)位于宿主非人類哺乳動物K恒定區上游的多個人類Ig輕鏈K V區和一或多個人類Ig輕鏈K J區和/或位于宿主非人類哺乳動物λ恒定區上游的多個人類Ig輕鏈λ V區和一或多個人類Ig輕鏈λ J區；及(b)任選地，位于宿主非人類哺乳動物恒定區上游的一或多個人類IgHV區、一或多個人類D區和一或多個人類J區。另一方面，本專利技術涉及產生非人類細胞或哺乳動物的方法，包括在非人類哺乳動物細胞基因組例如ES細胞基因組中插入:(a)多個人類IgH V區、一或多個人類D區和一或多個人類J區在宿主非人類哺乳動物恒定區上游 '及(b)任選地，一或多個人類Ig輕鏈K V區和一或多個人類Ig輕鏈K J區在宿主非人類哺乳動物K恒定區上游和/或一或多個人類Ig輕鏈λ V區和一或多個人類Ig輕鏈λJ區在宿主非人類哺乳動物λ恒定區上游；所述插入是使得所 述非人類細胞或哺乳動物能產生具有非人類哺乳動物恒定區和人類可變區的嵌合抗體的所有組成成分，其中步驟(a)和(b)可以任意順序進行并且(a)和(b)步驟的每一步可以逐步或單步進行。插入可以通過同源重組實現。另一方面，本專利技術涉及產生特異于希望抗原的抗體或抗體鏈的方法，所述方法包括用希望抗原免疫本文揭示的轉基因非人類哺乳動物及回收所述抗體或抗體鏈。另一方面，本專利技術涉及產生完全人源化抗體的方法，包括用希望抗原免疫本文揭示的轉基因非人類哺乳動物，回收所述抗體或產生所述抗體的細胞，然后例如通過蛋白質或DNA工程用人類恒定區置換非人類哺乳動物恒定區。另一方面，本專利技術涉及根據本專利技術產生的人源化抗體和抗體鏈，所述抗體和抗體鏈均是嵌合的(例如小鼠-人類)及完全人源化形式，以及所述抗體和抗體鏈的片段和衍生物，以及涉及所述抗體、抗體鏈和片段在醫學包括診斷中的應用。另一方面，本專利技術涉及本文揭示的非人類哺乳動物作為模型檢測藥物和疫苗的應用。附圖簡述附圖說明圖1-8示出在小鼠Ig基因座中插入一系列人類BAC的重復過程。圖9-18更詳細示出針對IgH和κ基因座的圖1_8的過程。圖19和20示出在嵌合小鼠中的抗體產生原理。圖21示出在小鼠染色體中人類DNA的可能插入位點。圖22-26示出在小鼠Ig基因座中插入一系列人類BAC的另一重復過程。圖27-29示出宿主VDJ區倒位的機制。圖30示出使用RMCE方法插入質粒的原理證據。圖31示出在著陸區(Landing Pad)中相繼的RMCE-整合。圖32示出證實成功插入著陸區中。圖33示出3’末端消除(End Curing)的PCR證實。圖34示出BAC#1插入和PCR診斷。圖35示出JH和JK使用。圖36示出DH使用。圖37示出在來自嵌合小鼠的人類VDJCy轉錄物中⑶R-H3長度分布。圖38示出在IGH-VDI或IGK-VJ連接中缺失和插入核苷酸數的分布。圖39示出每個VH內JH使用的分布。圖40示出每個VH內DH使用的分布。圖41示出在V J連接點核苷酸獲得或喪失產生IGK變體。圖42示出J區內的超變產生IGK變體。圖43示出連接多樣性產生功能性⑶S。SEQ ID No:1是大鼠轉換序列。SEQ ID No: 2是著陸區祀向載體的序列(長版本)。SEQ ID No: 3是著陸區靶向載體的序列(較短版本)。SEQ ID No:4是小鼠品系129轉換序列。SEQ ID No: 5是小鼠品系C57轉換序列。SEQ ID No:6是著陸區的5’同源臂。SEQ ID No:7 是寡核苷酸 HV2-5SEQ ID No:8 是寡核苷酸 HV4-4SEQ ID No: 9 是寡核苷酸 HV1-3SEQ ID No: 10 是寡核苷酸 HV1-2SEQ ID No: 11 是寡核苷酸 HV6-1SEQ ID No: 12 是寡核苷酸 CμSEQ ID No: 13 是寡核苷酸 KV1-9SEQ ID No: 14 是寡核苷酸 KV1-8SEQ ID No: 15 是寡核苷酸 KV1-6SEQ ID Νο:16 是寡核苷酸 KV1-5SEQ ID No: 17 是寡核苷酸 C κ。一般描述除非特別指出，小鼠的所有核苷酸坐標是相應于小鼠C57BL/6J品系的NCBI m37的那些，例如 April2007ENSEMBL Releas本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：A·布拉德利，EC·李，梁琦，汪瑋，
申請(專利權)人：科馬布有限公司，
類型：
國別省市：