本發明專利技術公布一種食品中農獸藥殘留、添加劑等小分子化合物ELISA檢測試劑盒的評價方法。其特征在于：通過線性驗證、選擇性驗證、基體適用性試驗、耐變性評價、批間變異與穩定性評價，進行實驗室內實驗；通過準確度驗證，進行實驗室間協同實驗。其中，核心的基體適用性實驗步驟包括：確定適用的基體范圍、準確度驗證、偏離計算、重復性評價、檢測限和定量限確證。該方法結合室內驗證與室間協同實驗兩個單元，能對商品化ELISA檢測試劑盒進行較為準確的評價。
【技術實現步驟摘要】
—種食品中小分子化合物ELISA檢測試劑盒的評價方法
本專利技術涉及一種ELISA檢測試劑盒的評價技術，尤其涉及一種食品中農獸藥殘留、添加劑等小分子化合物ELISA檢測試劑盒質量評價方法。
技術介紹
試劑盒在分析檢測工作中主要是作為一種快速篩查的方法而存在，開始的時候是以傳統經典方法的替代方法出現的，幾乎所有的試劑盒方法在發現問題時都需要以傳統的檢測方法作為最終確認的依據(尤其是在食品理化及微生物檢測中更是如此)，因此，人們大多認同試劑盒方法的一些方法學上的不穩定性，比如假陽性率、假陰性率、定量精密度較差等等，并接受了這種可能的結果錯誤。而恰恰是這種認同使得人們忽視了對試劑盒方法進行更為科學深入的方法學性能指標探討，而這種忽視在一些敏感領域的分析中是十分危險的。目前，商品化試劑盒比較適合企業生產控制或執法現場檢測，因其操作方便，結果可快速獲得。但試劑盒的生產、銷售及認證認可體制尚不完善，沒有相應的標準或質量評價政策。且其靈敏度，穩定性及假陰/陽性控制尚不能滿足檢測需要。一方面是試劑盒的發展向好，而另一方而試劑盒存在的問題也愈來愈突出，尤其是許多國產試劑盒存在的質量問題限制了其發展。實驗室檢測人員尤其是企業實驗室人員希望國家對試劑盒生產廠家進行管理，并對其產品進行驗證，使購買者有信心使用國產檢測試劑盒，正是基于目前試劑盒產品的現狀，需要對試劑盒進行規范管理，以保證市場上流通的試劑盒性能指標滿足相關要求。目前我國尚未有針對試劑盒的完整評價體系，食品安全領域是當前問題最多、最受關注的領域，這個領域的檢測包括了物理、化學、微生物及分子生物學基礎理論，無論是按檢測原理、用途還是其它分類方式，涉及食品安全檢測項目的試劑盒的品種是最全最多的。因此，從該領域著手從事評價制度的研究，便于獲得基礎性數據結果。國外自20世紀80年代末起就開始了對試劑盒的評價工作，取得了相當大的進展，獲得了良好的效果。但出于種種原因，幾乎現所有的評價體系都存在一些缺陷。最為關鍵的就是由于試劑盒品種繁多，事實上“試劑盒”這個術語至今沒有規范的定義，在市場上銷售的稱之為“試劑盒”的產品各式各樣，而不同的試劑盒檢測原理差異懸殊，使得在構建評價體系的技術法規時存在相當大的技術難度，迄今為止，國內尚未開展對試劑盒的管理規范工作，而國外官方僅采用直接注冊進行管理，國際上最為成功的評定機構之一 AFNOR僅對微生物檢測用試劑盒進行評價，依據是IS016140《食品和動物飼料的微生物學替代檢測方法驗證準則》，而另一影響廣泛的機構AOAC更多地依靠技術專家的力量，以專家小組來決定需要驗證的技術指標。鑒于目前國內外對可供借鑒的成熟的評價制度方案不多，而試劑盒本身的性質也使其不能直接照搬其他產品的評價方案和技術，同時，各種復雜的食品基質會引起諸多干擾因素，因此如何準確評價食品中小分子化合物ELISA檢測試劑盒的評價有相當大的技術難度。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種食品中農獸藥殘留、添加劑等小分子化合物ELISA檢測試劑盒的評價方法，以對待評價的商品化ELISA試劑盒作為更為準確的評價。本專利技術的評價方法，其特征在于包括:通過結合室內驗證與室間協同實驗兩個評價單元，根據待評價試劑盒說明書提取特征參數設計評價指標，構架評價單元內各評價指標的計算模型，對食品中小分子化合物ELISA商品化試劑盒進行較為準確的評價。實驗室內測試實驗，包括:線性驗證，用于尋找非隨機模型，消除或降低潛在的關鍵變異；選擇性驗證，用于評價同類藥物的交叉反應以及不同基體的交叉反應；基體適用性試驗，用于評價對于不同食品基質，待評價試劑盒的準確度、重現性、檢測限、定量限；耐變性試驗，包括確定測試樣品和數量，選擇需要評價的耐變因素。用于評價可能影響檢測結果的因素；批間變異與穩定性，用于評價待評價試劑盒的產品穩定性。其中，核心的基體適用性試驗步驟包括:確定適用的基體范圍、準確度驗證、偏離計算、重復性評價、檢測限和定量限確證。實驗室間協同實驗，包括:準確度驗證，用于評價在不同實驗室、不同操作人員情況下，待評價試劑盒的準確度。采用該評價方法，能夠對待評價的商品化ELISA檢測試劑盒作出較為準確的評價。【具體實施方式】本專利技術的評價步驟如下:(一)室內驗證單元1、線性驗證用試劑盒提供的樣品稀釋液分別配制包括Oyg / L在內的6個濃度水平的標準溶液，濃度水平涵蓋試劑盒說明書提供的線性范圍，每個濃度水平分3天、每天2平行共檢測6平行，以響應信號對濃度作圖，列出回歸方程，并進行回歸分析。計算差值(實際信號響應值與曲線圖示值之間的差)，并以差值(Y軸)對濃度(X軸)做圖，尋找非隨機模型；如果發現存在潛在的關鍵變異，需要建立模型以降低或消除，直到僅余隨機噪音值。其中，測試數量:6個濃度水平X 2平行X 3次重復(3天)=36個(0D值)2、選擇性驗證2.1同類藥物的選擇性配制5個濃度水平的標準溶液，濃度水平涵蓋且大于試劑盒說明書提供的線性范圍。對照組為不加任何藥物的空白溶液(試劑盒中提供的樣品稀釋液)，其信號響應值(三次測定平均值)記為B。，不同濃度的三聚氰胺所得的信號響應值(三次測定平均值)為B，以藥物濃度對數為橫坐標，B / BciXlOO1^為縱坐標作標準曲線，得直線回歸方程和IC5(I(50%抑制濃度)值。同樣方法配制至少五種同類類似物的標準溶液并按上述步驟測定其標準曲線和IC5tl值。各藥物的交叉反應率計算公式如下:交叉反應率=IC5tl (待測目標物)/ IC50 (同類類似物)X 100 %2.2基體的選擇性配制5個濃度水平的標準溶液，濃度水平與線性驗證時使用的標準溶液濃度相同(不包括Oyg / L在內)。對照組為不加任何藥物的空白溶液，其信號響應值(三次測定平均值)記為B。，不同濃度的三聚氰胺所得的信號響應值(三次測定平均值)為B，以藥物濃度對數為橫坐標，B / BtlX 100%為縱坐標作標準曲線，得直線回歸方程和IC5tl(50%抑制濃度)值。分別以不含待測目標物的的其他適用基體按說明書所述步驟進行樣品前處理，所得溶液用以配制待測目標物基體標準溶液，濃度水平與線性驗證時使用的標準溶液濃度相同(不包括O μ g/L在內)，并按上述步驟測定其標準曲線和IC5tl值。各基體間的交叉反應率計算公式如下:交叉反應率=IC5tl(空白試劑配制的待測目標物溶液)/ IC5tl (各基體配制的待測目標物溶液)X100%。3、基體試驗3.1基體適用性試 驗根據試劑盒使用說明書，任意選擇2種基質。3.2準確度/回收率試驗選擇樣品基體時盡可能采用本身含有分析物的樣品基體，在不能獲得時，可選擇人工加標方式進行制備。分析物的濃度應涵蓋試劑盒檢測方法給出的濃度范圍。在人工加標時，對于液體樣品，選擇在大體積樣品中添加加標液后混勻；對于濕潤的樣品，選擇在大量樣品中滴加加標液，混勻并均質；對于干樣，選擇在基體中添加干燥的加標物，混勻。在加標過程中應保證樣品基體的完好，同時須保證基體未在加標過程中被稀釋。采用基體加標進行回收率實驗，對6個濃度水平進行實驗，濃度水平與線性驗證時使用的標準溶液濃度相同(包括陰性樣品在內)。每個濃度水平8平行。3.3 偏離偏離指采用試劑盒方法進行檢測的結果與真值之間的差異。偏差=檢測濃本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種食品中農獸藥殘留、添加劑等小分子化合物ELISA檢測試劑盒的評價方法，其特征在于：通過線性驗證、選擇性驗證、基質適用性實驗、耐變性考察、批間變異與穩定性考察，進行實驗室內測試實驗；通過準確度驗證，進行實驗室間協同實驗，以評價試劑盒的技術性能。所述基質適用性實驗包括以下步驟：(1)確定適用的基質范圍：任意選取兩種適用基質；(2)準確度驗證：采用基質加標進行準確度檢驗實驗，配制包括陰性樣品在內的6個濃度水平的標準溶液，濃度水平涵蓋線性范圍，每個濃度水平做8次平行測定，以響應信號對濃度作圖，列出回歸方程并進行回歸分析；(3)偏離程度計算：用偏差表示偏離程度，計算公式為：偏差=檢測濃度平均值添加濃度值，相對偏差=偏差／添加濃度值；(4)重復性：根據準確度試驗數據，計算標準偏差和相對標準偏差；(5)檢測限和定量限計算：以標準偏差對檢測結果的平均值作圖，其中為未加標樣品重復測定值，Sb為截距，m為斜率，定量限=3×LOD；(6)檢測限的試驗驗證：向陰性試樣中添加如步驟(5)計算所得檢測限水平的待測小分子化合物，制備大于等于20個標準物質或加標樣品，檢出概率=檢出樣品／制備樣品×100％，當檢出概率大于或等于95％時，表明待評價試劑盒在95％置信度下的檢測限滿足要求；(7)定量限的試驗驗證：定量限直接采用試劑盒說明書標識的定量限進行試驗驗證。FSA0000094520370000011.tif,FSA0000094520370000012.tif...
【技術特征摘要】
1.一種食品中農獸藥殘留、添加劑等小分子化合物ELISA檢測試劑盒的評價方法，其特征在于:通過線性驗證、選擇性驗證、基質適用性實驗、耐變性考察、批間變異與穩定性考察，進行實驗室內測試實驗；通過準確度驗證，進行實驗室間協同實驗，以評價試劑盒的技術性能。 所述基質適用性實驗包括以下步驟: (1)確定適用的基質范圍:任意選取兩種適用基質； (2)準確度驗證:采用基質加標進行準確度檢驗實驗，配制包括陰性樣品在內的6個濃度水平的標準溶液，濃度水平涵蓋線性范圍，每個濃度水平做8次平行測定，以響應信號對濃度作圖，列出回歸方程并進行回歸分析； (3)偏離程度計算:用偏差表示偏離程度，計算公式為:偏差=檢測濃度平均值添加...
【專利技術屬性】
技術研發人員：鄒明強，王燕飛，薛強，
申請(專利權)人：中國檢驗檢疫科學研究院，
類型：發明
國別省市：
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