一種路易斯安娜鳶尾雜交種子萌發的方法技術

本發明專利技術涉及種子萌發技術，旨在提供一種路易斯安娜鳶尾雜交種子萌發的方法。包括步驟：將成熟的路易斯安娜鳶尾雜交種子在無菌水中浸泡24h，吸水飽滿后消毒，剝取完整胚接種于固體培養基中進行離體暗培養，直至胚萌發后接種于相同組分的固體培養基中進行光照培養，得到雜交苗。本發明專利技術采用胚培養技術、對存在休眠期的雜交種子的胚進行離體培養，使雜交種子打破休眠，胚在培養基中迅速膨大、伸長。與常規播種方法相比，本發明專利技術中的萌發率提高60%，萌發時間縮短12天、出苗時間縮短20天，而且操作簡便并未增加很多工作量。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及種子萌發技術，特別涉及路易斯安娜鳶尾雜交種子萌發的方法。
技術介紹
路易斯安娜鳶尾是鳶尾科鳶尾屬多年生常綠宿根水生花卉，其花大、花色豐富艷麗、花型多、適應性較強，在華東地區冬季葉片保持常綠，可以作為雜交育種的優良材料。但路易斯安娜鳶尾自然繁殖系數低，而且在自然條件下雜交種子萌發率低，出苗不整齊。其原因在于，鳶尾屬植物大部分種的雜交種子具有休眠特性，阻礙其在園藝栽培上的應用，且給雜交育種工作帶來了一定的困難。造成鳶尾屬植物雜交種子休眠的主要因素是種皮和胚乳的作用，種皮和胚乳的作用包括機械阻力和含有抑制物質。胚具有形成新植株的潛能，離體萌發容易，不需經過休眠期；胚培養需要的設備及操作簡便，在普通的無菌實驗室即可進行，不受季節的限制；較無菌播種污染率低、萌發率高。利用胚培養技術可以有效的打破種皮和胚乳的機械阻力，縮短雜交種子萌發的時間，提高出苗整齊度，有利于雜交育種工作的開展。
技術實現思路
本專利技術要解決的技術問題是，克服現有技術中的不足，提供。通過預處理使雜交種子吸水飽滿，剝取種胚進行離體培養，保證雜交種子的胚能夠快速、穩定的萌發生長。為解決技術問題，本專利技術的解決方案是:提供，包括以下步驟:將成熟的路易斯安娜鳶尾雜交種子在無菌水中浸泡24h，吸水飽滿后消毒，剝取完整胚接種于固體培養基中進行離體暗培養，直至胚萌發后接種于相同組分的固體培養基中進行光照培養，得到雜交苗；所述的固體培養基的配方為:MS培養基2.2g/L、蔗糖50~60g/L、瓊脂4~6g/L、芐氨基嘌呤(BA)0.5 ~lmg/L。本專利技術中，所述的離體暗培養是指:將胚播種于固體培養基中恒溫靜置全遮光培養4d ;培養溫度為25°C。本專利技術中，所述的路易斯安娜鳶尾雜交種子為路易斯安娜鳶尾品種間雜交所獲得的種子。本專利技術中，所述的消毒是指:將路易斯安娜鳶尾雜交種子用85%~95%乙醇浸泡60s后，浸入2%的次氯酸鈉溶液中消毒lOmin，最后用蒸餾水沖洗干凈。本專利技術中，所述的光照培養的條件是:培養溫度為25°C，光強為1500LX，光照時間為 12h/d。與現有技術相比，本專利技術的有益效果在于:本專利技術提供的路易斯安娜鳶尾 雜交種子萌發方法采用胚培養技術、對存在休眠期的雜交種子的胚進行離體培養，使雜交種子打破休眠，胚在培養基中迅速膨大、伸長。與常規播種方法相比，本專利技術中的萌發率提高60%，萌發時間縮短12天、出苗時間縮短20天，而且操作簡便未增加太多工作量。【具體實施方式】實施例1(I)固體培養基的配方:MS培養基2.2g/L，蔗糖60g/L，瓊脂6g/L，BA0.5mg/L。(2)選取離體開裂的路易斯安娜鳶尾雜交蒴果，將蒴果內種子用自來水沖洗2h后，置于無菌水中浸泡24h ;然后用95%酒精消毒60s，再放入2%的次氯酸鈉的溶液中消毒IOmin,最后用蒸懼水沖洗干凈。(3)在超凈工作臺上將飽滿的雜交種子沿腹縫線小心的剖開，剝取完整的胚，轉入上述固體培養基中，每皿接種9粒胚。然后將其置于25°C恒溫無菌培養室進行暗培養，24h后胚根一端開始膨大，48h后胚變為黃綠色，4d后胚發生向地性彎曲，胚萌發率達到87.6% ；然后將生長健壯的芽轉入相同固體培養基的柱形瓶中進行光照培養，培養溫度為25°C，光強為1500Lx，每天光照時間為12h/d ;20d后苗高8cm，進行煉苗移栽。實施例2(I)固體培養基的配方:MS培養基2.2g/L，蔗糖53g/L，瓊脂4g/L，BA0.8mg/L。(2)采收未離體未開裂的成熟路易斯安娜鳶尾雜交蒴果，將采收的雜交蒴果輕輕的用軟毛刷刷洗干凈，于含有0.2%吐溫和洗潔精的自來水中沖洗2h。然后用85%酒精消毒60s，再放入2%的次氯酸鈉的溶液中消毒lOmin，最后用蒸餾水沖洗干凈。(3)在超凈工作臺上將消毒后的雜交蒴果切開，選取飽滿的雜交種子沿腹縫線小心的剖開，剝取完整的胚，轉入上述固體培`養基中，每皿接種9粒胚。然后將其置于25°C恒溫無菌培養室進行暗培養，24h后胚根一端開始膨大，48h后胚變為黃綠色，4d后胚發生向地性彎曲，胚萌發率達到90%;然后將生長健壯的芽轉入相同培養基的柱形瓶中進行光照培養，培養溫度為25°C，光強為1500Lx，每天光照時間為12h/d ;20d后苗高8cm，進行煉苗移栽。實施例3(I)固體培養基的配方:MS培養基2.2g/L，蔗糖50g/L，瓊脂5g/L，BA lmg/L 0(2)在超凈工作臺上將無菌播種60d而未萌動的路易斯安娜鳶尾雜交種子沿腹縫線小心的剖開，剝取完整的胚，轉入上述固體培養基中，每皿接種9粒胚。然后將其置于25°C恒溫無菌培養室進行暗培養，24h后胚根一端開始膨大，48h后胚變為黃綠色，4d后胚發生向地性彎曲，胚萌發率達到82.5% ;然后將生長健壯的芽轉入相同培養基的柱形瓶中進行光照培養，培養溫度為25°C，光強為1500Lx，每天光照時間為12h/d ;20d后苗高8cm，進行煉苗移栽。本專利技術中，MS培養基購自美國Sigma試劑公司。MS培養基是Murashige和Skoog于1962年為煙草細胞培養設計的，其特點是無機鹽和離子濃度較高，是較穩定的離子平衡溶液，它的硝酸鹽含量高，其養分的數量和比例合適，能滿足植物細胞的營養和生理需要，因而適用范圍比較廣，多數植物組織培養快速繁殖用它作為培養基的基本培養基。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種路易斯安娜鳶尾雜交種子萌發的方法，其特征在于，包括以下步驟：將成熟的路易斯安娜鳶尾雜交種子在無菌水中浸泡24h，吸水飽滿后消毒，剝取完整胚接種于固體培養基中進行離體暗培養，直至胚萌發后接種于相同組分的固體培養基中進行光照培養，得到雜交苗；所述的固體培養基的配方為：MS培養基2.2g/L、蔗糖50～60g/L、瓊脂4～6g/L、芐氨基嘌呤0.5～1mg/L。

【技術特征摘要】
1.一種路易斯安娜鳶尾雜交種子萌發的方法，其特征在于，包括以下步驟:將成熟的路易斯安娜鳶尾雜交種子在無菌水中浸泡24h，吸水飽滿后消毒，剝取完整胚接種于固體培養基中進行離體暗培養，直至胚萌發后接種于相同組分的固體培養基中進行光照培養，得到雜交苗；所述的固體培養基的配方為:MS培養基2.2g/L、蔗糖50~60g/L、瓊脂4~6g/L、芐氨基嘌呤0.5~lmg/L。2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的離體暗培養是指:將胚播種于固體培養基中恒...

【專利技術屬性】
技術研發人員：王冠群，夏宜平，李丹青，張佳平，
申請(專利權)人：浙江大學，
類型：發明
國別省市：