一種蟲草素納米緩釋囊及其制備方法技術

一種蟲草素納米緩釋囊及其制備方法，涉及醫藥以及醫藥中間體化合物改性領域，解決了現有蟲草素使用過程中出現的半衰期短的問題。通過將蟲草素溶于弱酸性溶液得蟲草素溶液，將海藻酸鈉溶于堿性溶液得海藻酸鈉溶液，將上述溶液按蟲草素與海藻酸鈉的摩爾比為1:10～10:1混合至少20min，經離心洗滌、超聲分散后得蟲草素納米緩釋球，將蟲草素納米緩釋球與0.125mol/L的CaCl2溶液等體積混合固化后，得直徑為200nm～300nm的蟲草素納米緩釋囊粉狀物。本發明專利技術通過蟲草素溶液與海藻酸鈉溶液混合法，同時采用CaCl2固化技術，工藝流程可操作性強，具有良好的蟲草素緩釋性能和抑菌效果，抑菌率可達到70％。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及醫藥以及醫藥中間體化合物改性
，具體涉及。
技術介紹
蟲草菌素又稱蟲草素、蛹蟲草菌素，3’ -脫氧腺苷，它是第一個從真菌中分離出來的核苷類抗菌素。其分子式為CltlH13N5O3，分子量為251.24，熔點230~231°C，溶于水、熱乙醇和甲醇，不溶于苯、乙醚和氯仿，紫外光的最大吸收波長為259nm。蟲草素有抗腫瘤、抗白血病、抗菌、免疫調節、清除體內自由基等多方面的藥理作用。另據報道，蟲草素一方面具有對DNA和RNA合成過程、加RNA和mRNA轉錄后修飾過程及腺苷酸環化酶活化等三方面的抑制作用，另一方面它又能促進細胞分化，重建細胞骨架。蟲草素有降低膽固醇、降血糖、抗感染、抗瘧原蟲、抗蚊蟲的作用，含蟲草素的蟲草發酵液對哮喘及支氣管疾病、腎衰竭病人的腎功能等方面都有良好的輔助治療效果。目前，蟲草素在體內經過脫氨作用而發生降解，導致體內使用半衰期短。研究人員一般采用防脫氨保護劑與蟲草素配和使用，解決蟲草素脫氨造成的半衰期短的問題。但是，蟲草素體內脫氨反應屬于正常的生理代謝，防脫氨保護劑的使用同時會造成其它正常脫氨降解途徑異常， 影響機體的生理過程。同時，現有防脫氨保護劑的作用有限，不能根本延長蟲草素半衰期。現代納米緩釋藥物技術在延長小分子藥物半衰期、降低藥物副作用、靶向治療、提高藥物療效等方面具有巨大優勢。目前，沒有發現制備蟲草素納米緩釋囊的報道。
技術實現思路
為了解決蟲草素使用過程中出現的半衰期短的問題，本專利技術提供。本專利技術為解決技術問題所采用的技術方案如下:本專利技術的一種蟲草素納米緩釋囊，通過將蟲草素溶于弱酸性溶液得100mol/L蟲草素溶液，將海藻酸鈉溶于堿性溶液得lmol/L海藻酸鈉溶液，在20°C~40°C條件下，將上述兩種溶液按蟲草素與海藻酸鈉的摩爾比為1:10~10:1比例混合至少20min，經離心洗滌、超聲分散后得蟲草素納米緩釋球，將該蟲草素納米緩釋球與0.125mol/L的CaCl2溶液等體積混合固化后，經離心洗滌、干燥后得到直徑為200nm~300nm的蟲草素納米緩釋囊粉狀物。所述弱酸性溶液為經過去離子水稀釋的I %甲酸、I %乙酸、0.5%磷酸、I %檸檬酸或0.5%硼酸；所述堿性溶液為I % KOH溶液或I % NaOH溶液。所述蟲草素購自Sigma，純度為99.9%。本專利技術還提供一種蟲草素納米緩釋囊的制備方法，由以下步驟實現:(I)將蟲草素溶解于弱酸性溶液中，得到濃度為100mol/L的蟲草素溶液；所述弱酸性溶液為經過去離子水稀釋的1%甲酸、1%乙酸、0.5%磷酸、1%檸檬酸或0.5%硼酸，優選1%乙酸；(2)將海藻酸鈉溶解于堿性溶液中，得到濃度為lmol/L的海藻酸鈉溶液；所述堿性溶液為I % KOH溶液或I % NaOH溶液；(3)將步驟(1)得到的蟲草素溶液與步驟(2)得到的海藻酸鈉溶液按照蟲草素與海藻酸鈉的摩爾比為1:10~10:1(優選摩爾比為5:1,10:1)的比例混合至少20min，經離心、洗滌、超聲分散后得到蟲草素納米緩釋球；所述蟲草素溶液與海藻酸鈉溶液的混合溫度為 20°C~40°C ；(4)將步驟(3)得到的蟲草素納米緩釋球與濃度為0.125mol/L的CaCl2溶液等體積混合，固化后，經離心、洗滌、干燥后得到直徑為200nm~300nm的蟲草素納米緩釋囊粉狀物；所述蟲草素納米緩釋球與CaCl2溶液的混合時間IOmin~20min。本專利技術的有益效果是:本專利技術使用海藻酸鈉作為載體材料，通過蟲草素溶液與海藻酸鈉溶液混合法，以保護蟲草素活性、使其更好的發揮抗菌作用；同時采用CaCl2固化技術，CaCl2溶液的濃度設定在0.125mol/L，工藝流程可操作性強，易于工廠化，經過測試，本專利技術得到的蟲草素納米緩釋囊粒徑范圍為200nm~300nm，具有良好的蟲草素緩釋性能和抑菌效果，抑菌率可達到70%。 【附圖說明】圖1為實施例1中得到的蟲草素納米緩釋囊的掃描電子顯微鏡檢測圖。圖2為實施例1中得到的蟲草素納米緩釋囊的蟲草素釋放曲線示意圖；A線表示經CaCl2溶液固化的蟲草素納米緩釋囊的蟲草素釋放曲線；B線表示未采用CaCl2溶液固化的蟲草素納米緩釋囊的蟲草素釋放曲線。圖3為實施例1中得到的蟲草素納米緩釋囊的抑菌效果圖；圖3八為枯草芽孢桿菌的抑菌情況，圖3B為大腸桿菌的抑菌情況。圖4為實施例2中得到的蟲草素納米緩釋囊的掃描電子顯微鏡檢測圖。圖5為實施例3中得到的蟲草素納米緩釋囊的掃描電子顯微鏡檢測圖。圖6為實施例4中得到的蟲草素納米緩釋囊的掃描電子顯微鏡檢測圖。圖7為實施例5中得到的蟲草素納米緩釋囊的掃描電子顯微鏡檢測圖。圖8為實施例2、3、4、5中得到的蟲草素納米緩釋囊的蟲草素釋放曲線示意圖；A線表示實施例2中的蟲草素釋放曲線示意圖，B線表示實施例3中的蟲草素釋放曲線示意圖，C線表示實施例4中的蟲草素釋放曲線示意圖，D線表示蟲草素釋放曲線示意圖。圖9為實施例2中得到的蟲草素納米緩釋囊的抑菌效果圖；圖9A為枯草芽孢桿菌的抑菌情況(374個菌落)，圖9B為大腸桿菌的的抑菌情況(249個菌落)。圖10為實施例3、4、5中得到的蟲草素納米緩釋囊的抑菌效果圖；圖1OA為實施例3中得到的蟲草素納米緩釋囊對大腸桿菌的抑菌效果圖，圖1OB為實施例4中得到的蟲草素納米緩釋囊對大腸桿菌的抑菌效果圖，圖1OC為實施例5中蟲草素納米緩釋囊對大腸桿菌的抑菌效果圖。【具體實施方式】以下結合實施例對本專利技術作進一步詳細說明。實施例1(I)將購自Sigma、純度99.9%的蟲草素溶解于1%乙酸(去離子水稀釋)中，得到濃度為lOOmol/L的蟲草素溶液；(2)將海藻酸鈉溶解于I % NaOH溶液中，得到濃度為lmol/L的海藻酸鈉溶液；(3)將步驟⑵得到的lmol/L海藻酸鈉溶液向步驟⑴得到的lOOmol/L蟲草素溶液中滴加，按照100mol/L蟲草素溶液中含有的蟲草素與lmol/L海藻酸鈉溶液中含有的海藻酸鈉的摩爾比為10:1的比例混合，25°C條件下混合20min，1000rpm離心棄上清，沉淀用去離子水1%稀釋，超聲分散20min，重復離心、去離子水洗滌和超聲分散過程三次，得到蟲草素納米緩釋球；(4)將步驟(3)得到的蟲草素納米緩釋球用去離子水I %稀釋、超聲分散，再與濃度為0.125mol/L的CaCl2溶液等體積混合，緩慢攪拌IOmin即可，固化后離心洗滌三次，經干燥后得到蟲草素納米緩釋囊粉狀物；(5)將步驟(4)得到的蟲草素納米緩釋囊粉狀物進行場發射環境掃描電子顯微鏡檢測，測定其直徑約為200nm，如圖1所示。(6)稱取步驟⑷得到的蟲草素納米緩釋囊粉狀物Ig置于容器中，加入100mL濃度為0.2mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.0)，37 °C避光條件下搖床IOOrpm進行釋放；在lh、4h、8h、12h、18h、24h、48h時間點各取出I管樣品，15000rpm離心20min，取上清，分光光度法260nm測定蟲草素濃度。結果如圖2所示:24h時平均只有大約40%的蟲草素釋放，48h后仍有大約60%蟲草素保留在海藻酸鈉納米粒中，蟲草素緩慢釋放(見圖2中A線)；而未采用CaCl2溶液固化的蟲草素納米緩釋囊在0.5h之內釋放大約45%蟲草素，8h之內蟲草素釋本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種蟲草素納米緩釋囊，其特征在于，通過將蟲草素溶于弱酸性溶液得100mol/L蟲草素溶液，將海藻酸鈉溶于堿性溶液得1mol/L海藻酸鈉溶液，在20℃～40℃條件下，將上述兩種溶液按蟲草素與海藻酸鈉的摩爾比為1:10～10:1比例混合至少20min，經離心洗滌、超聲分散后得蟲草素納米緩釋球，將該蟲草素納米緩釋球與0.125mol/L的CaCl2溶液等體積混合固化后，經離心洗滌、干燥后得到直徑為200nm～300nm的蟲草素納米緩釋囊粉狀物。

【技術特征摘要】
1.一種蟲草素納米緩釋囊，其特征在于，通過將蟲草素溶于弱酸性溶液得lOOmol/L蟲草素溶液，將海藻酸鈉溶于堿性溶液得lmol/L海藻酸鈉溶液，在20°C~40°C條件下，將上述兩種溶液按蟲草素與海藻酸鈉的摩爾比為1:10~10:1比例混合至少20min，經離心洗滌、超聲分散后得蟲草素納米緩釋球，將該蟲草素納米緩釋球與0.125mol/L的CaCl2溶液等體積混合固化后，經離心洗滌、干燥后得到直徑為200nm~300nm的蟲草素納米緩釋囊粉狀物。2.根據權利要求1所述的蟲草素納米緩釋囊，其特征在于，所述弱酸性溶液為經過去離子水稀釋的I %甲酸、I %乙酸、0.5%磷酸、I %檸檬酸或0.5%硼酸。3.根據權利要求1所述的蟲草素納米緩釋囊，其特征在于，所述堿性溶液為1%KOH溶液或1% NaOH溶液。4.一種蟲草素納米緩釋囊的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)將蟲草素溶解于弱酸性溶液中，得到濃度為100mol/L的蟲草素溶液； (2)將海藻酸鈉溶解于堿性溶液中，得到濃度為lmol/L的海藻酸鈉溶液； (3)將步驟(1)得到的蟲草素溶液與步驟(2)得到的海藻酸鈉溶液按照蟲草素與海藻酸鈉的摩爾比為1:10~10:1的比例混合至少20min，經離心、洗滌、超聲分散后得到蟲草素納米緩釋球； (4)將步驟(3)得到的蟲草素納米緩...

【專利技術屬性】
技術研發人員：盧天成，王秀然，劉洪章，張林波，李雙雙，劉思陽，賈宇，王巖，李雪，
申請(專利權)人：吉林農業大學，
類型：發明
國別省市：吉林;22