本發(fā)明專利技術(shù)公開了抗壞血酸結(jié)合卡利比克畢赤酵母防治水果采后病害的方法,屬于水果采后病害生物防治領(lǐng)域。將卡利比克畢赤酵母（Pichiacaribbica）活化,接種到NYDB培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h，離心得到菌體，將菌體用兩倍終濃度抗壞血酸(VC)稀釋卡利比克畢赤酵母成1×108cells/mL的菌懸液（抗壞血酸的終濃度為150μg/mL-350μg/mL之間)；將菌懸液均勻噴灑于水果上，自然風(fēng)干；放在塑料筐中，用保鮮膜密封后，放在室溫條件下存放。本發(fā)明專利技術(shù)利用抗壞血酸(VC)和卡利比克畢赤酵母結(jié)合使用提高其對水果采后病害生物防治的效力，使用簡單，操作方便，效果好，成本低。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種抗壞血酸(VC)結(jié)合卡利比克畢赤酵母(/7ZcAia cariMica)使用防治水果采后病害的方法，屬于水果采后病害生物防治領(lǐng)域。
技術(shù)介紹
水果采后病害造成的損失是巨大的。根據(jù)一般保守的估計(jì)，我國水果采后損失為20% -25%左右。導(dǎo)致水果采后損失的因素很多，由于病原菌侵染造成的腐爛是造成水果采后損失的主要原因，其中霉菌是水果采后主要病原菌。引起水果貯藏期間腐爛的霉菌種類很多，但每種水果占優(yōu)勢的致病菌一般有2-3種。病原真菌對采后水果的危害不僅在于其導(dǎo)致水果在數(shù)量上的嚴(yán)重?fù)p失，而且許多病原真菌能分泌產(chǎn)生許多次生代謝產(chǎn)物會(huì)引起嚴(yán)重的食品安全問題，如曲霉菌(Aspergillus fIavus和Aspergillus parasiticus等)產(chǎn)生的黃曲霉毒素、擴(kuò)展青霉iPeniciIIium expansum)產(chǎn)生的棒曲霉素(patulin)等。長期以來，控制水果采后病害的主要措施是使用殺菌劑。根據(jù)一項(xiàng)最新的統(tǒng)計(jì)，殺菌劑在農(nóng)業(yè)作物保護(hù)總市場占有23.8%的份額，金額達(dá)73億美元。大部分的殺菌劑被用在水果和蔬菜上，并且果農(nóng)大多在采前和采后都使用化學(xué)殺菌劑以防止水果采后病害的發(fā)生，因此比起其它的農(nóng)藥來說人類更易直接接觸殺菌劑。殺菌劑的長期和大量使用，嚴(yán)重污染環(huán)境，有損于人類健康。過去十多年，公眾和科學(xué)界對于食品和環(huán)境中農(nóng)藥(尤其殺菌齊U)殘毒問題的關(guān)注日益增加。美國國家科學(xué)院(NAS)的報(bào)道(1987)指出，殺菌劑的應(yīng)用對人類健康造成了危害；全美9種致瘤化合物的銷售量中，殺菌劑占90%左右，在用于食物的全部農(nóng)藥中，殺菌劑構(gòu)成60%的致瘤危險(xiǎn)。隨著國家經(jīng)濟(jì)發(fā)展和消費(fèi)水平的提高，人們對食品安全和環(huán)境保護(hù)意識(shí)增強(qiáng)，我國食品中的農(nóng)藥(包括化學(xué)殺菌劑)殘留已引起了人們的高度重視。因此，研究并開發(fā)替代化學(xué)殺菌劑的安全、無毒、高效的新型水果采后病害防治方法，具有重大的社會(huì)意義和廣闊的應(yīng)用前景。當(dāng)前國際上越來越重視用有益微生物進(jìn)行水果采后病害生物防治的研究，并認(rèn)為這是最有希望取代化學(xué)殺菌劑的方向之一。自從以色列學(xué)者Guter首次報(bào)道枯草芽孢桿菌Qkicillus subtil is)對水果病原菌有拮抗作用以來，利用拮抗菌進(jìn)行水果采后病害的生物防治目前已取得了突破性的進(jìn)展，被認(rèn)為是最有希望替代化學(xué)殺菌劑的方法。例如在美國，自1979年美國環(huán)境保護(hù)署批準(zhǔn)使用首個(gè)生物防治微生物作為生防菌以來，截止到2004年已有26個(gè)微生物(14種細(xì)菌和12種真菌)被該機(jī)構(gòu)認(rèn)可并注冊。隨著酵母分類、生態(tài)、生理、生物化學(xué)和分子生物學(xué)的研究取得進(jìn)展，人們對農(nóng)產(chǎn)品加工貯藏中利用酵母的興趣日益提高。國內(nèi)外的研究表明，許多酵母菌應(yīng)用于水果表面，可以防治水果由致病霉菌引起的病害，這些酵母被稱為拮抗酵母。酵母菌遺傳穩(wěn)定，抑菌譜廣、效價(jià)高，一般不產(chǎn)生對人和寄主植物有害的代謝產(chǎn)物，安全性高，且對營養(yǎng)要求低，生長快，并對多種脅迫、逆境具有較強(qiáng)的耐受力，對大多數(shù)殺菌劑不敏感，對其它化學(xué)和物理處理能夠相容，因此近年來拮抗酵母作為水果采后病害生防菌，受到國際上的廣泛關(guān)注。畢赤酵母OcYcAia guiIliermondii)是國際上最早被報(bào)道能抑制果實(shí)病原真菌的生物防治酵母，而Candida oleophilia isolate 1-182已經(jīng)在1995年作為生物殺菌劑在美國環(huán)境保護(hù)署(EPA)登記，并已經(jīng)由美國Ecogen公司商業(yè)化。此外，在南非一株采后拮抗酵母白隱球磨 母iCryptococcus albidus')也已經(jīng)商業(yè)化，商品名為Yield Plus。從國內(nèi)外文獻(xiàn)中可知，以有效微生物取代化學(xué)殺菌劑用于水果采后病害的防治已顯示出巨大的應(yīng)用前景，水果采后病害的生物防治已成為一個(gè)新的研究熱點(diǎn)。但到目前為止，已實(shí)際應(yīng)用于生產(chǎn)的拮抗菌種類不多，只有Biosave和Aspire等少數(shù)幾種產(chǎn)品上市，而我國目前尚沒有拮抗菌應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)。主要原因在于商業(yè)生產(chǎn)條件下，由于環(huán)境條件的不確定性，微生物防治的效果往往不如化學(xué)殺菌劑的效果，從而達(dá)不到保鮮要求。這些因素影響了拮抗菌作為果蔬保鮮劑在生產(chǎn)中的使用。拮抗酵母防治水果采后病害的一個(gè)主要特點(diǎn)是利用其能在果實(shí)受傷處或表面快速生長，從而與病原菌開展?fàn)I養(yǎng)和空間上的競爭，以達(dá)到抑制病原菌的目的。目前即使是已經(jīng)商業(yè)化生產(chǎn)的Candida oleophila (商品名為ASPIRE)也只有在與低劑量殺菌劑同時(shí)使用時(shí)才能達(dá)到足夠有效的防護(hù)作用，而且它們一般都不能有效地控制處于潛伏狀態(tài)的病原菌，即僅具有保護(hù)效果而缺乏治療能力，并且對病原菌拮抗的穩(wěn)定性和廣譜性上與化學(xué)殺菌劑相比也還有很大的差距。此外，拮抗酵母需要較高濃度下才能有效作用的特點(diǎn)也將產(chǎn)生很大的經(jīng)濟(jì)成本壓力。這些因素都對其商業(yè)化造成了諸多限制。因此拮抗酵母生物防治的效力必須得到進(jìn)一步的提聞和改進(jìn)。抗壞血酸(Ascorbic acid)是一種天然存在的具有抗氧化性質(zhì)的有機(jī)化合物。抗壞血酸易溶于水，形成輕度酸性的溶液。抗壞血酸是維生素C的一種形式(類維生素)。抗壞血酸衍生于葡萄糖，是人類必須的營養(yǎng)素之一，也是常用的食品添加劑之一。因此可作為誘導(dǎo)拮抗劑的激發(fā)子。另外，抗壞血酸作為抗氧化劑和拮抗酵母結(jié)合使用，可以提高拮抗酵母對氧化脅迫的耐受性，從而提高其對水果采后病害的生物防治效力。本專利技術(shù)利用抗壞血酸(VC)和卡利比克畢赤酵母結(jié)合使用提高其對水果采后病害生物防治的效力，從而降低水果的腐爛率，進(jìn)而達(dá)到水果貯藏保鮮的目的。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)利用抗壞血酸(VC)和卡利比克畢赤酵母結(jié)合使用提高其對水果采后病害生物防治的效力，經(jīng)抗壞血酸(VC)和卡利比克畢赤酵母結(jié)合使用，可以明顯地抑制蘋果青霉病，桃果根霉病，防治其采后腐爛。本專利技術(shù)具有安全，高效，成本低等優(yōu)點(diǎn)，可以廣泛地用于水果采后病害的生物防治過程中，減少水果采后病害造成的損失。本專利技術(shù)提供了抗壞血酸(VC)結(jié)合卡利比克畢赤酵母使用防治水果采后病害的方法，按照下述步驟進(jìn)行:將卡利比克畢赤酵母活化，用NYDB培養(yǎng)基培養(yǎng)卡利比克畢赤酵母，離心得到菌體，配制含抗壞血酸(VC)的酵母濃度為I X IO8個(gè)/mL菌懸液；將菌懸液均勻噴灑在水果上，自然風(fēng)干；放在塑料筐中，用保鮮膜密封后，放在室溫條件下存放。其中所述的NYDB培養(yǎng)基為:酵母膏5 g，牛肉浸膏8 g，葡萄糖10 g，純化水1000ml, pH自然。其中所述的卡利比克畢赤酵母(/7ZcAia Caribbioa^0其中所述的配制含抗壞血酸(VC)的酵母濃度為I X IO8個(gè)/mL菌懸液方法，按照下述步驟進(jìn)行:將菌體用無菌水稀釋制備成2 X IO8個(gè)/mL菌懸液，與濃度為兩倍終濃度的抗壞血酸(VC)按體積比1:1混合，而抗壞血酸(VC)的最終濃度為150 μ g/mL-350 μ g/mL。其中所述的水果為蘋果，桃果。本專利技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): (I)本專利技術(shù)所使用的卡利比克畢赤酵母OcYcAia cari bbi ca)為本實(shí)驗(yàn)室篩選,其拮抗效力強(qiáng)，對人體無害。(2)本專利技術(shù)所使用的抗壞血酸(VC)來源廣泛，價(jià)格低廉，無毒無害。(3)本專利技術(shù)使用抗壞血酸(VC)和卡利比克畢赤酵母結(jié)合使用，與單獨(dú)使用抗壞血酸(VC)處 理或卡利比克畢赤酵母處理相比，可以顯著提高卡利比克畢赤酵本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
抗壞血酸(VC)結(jié)合卡利比克畢赤酵母防治水果采后病害的方法，其特征在于按照下述步驟進(jìn)行：將卡利比克畢赤酵母活化，用NYDB培養(yǎng)基培養(yǎng)卡利比克畢赤酵母，離心得到菌體，配制含抗壞血酸(VC)的酵母濃度為1×108個(gè)/mL菌懸液；將菌懸液均勻噴灑在水果上，自然風(fēng)干；放在塑料筐中，用保鮮膜密封后，放在室溫條件下存放。
【技術(shù)特征摘要】
1.抗壞血酸(VC)結(jié)合卡利比克畢赤酵母防治水果采后病害的方法，其特征在于按照下述步驟進(jìn)行:將卡利比克畢赤酵母活化，用NYDB培養(yǎng)基培養(yǎng)卡利比克畢赤酵母，離心得到菌體，配制含抗壞血酸(VC)的酵母濃度為I X IO8個(gè)/mL菌懸液；將菌懸液均勻噴灑在水果上，自然風(fēng)干；放在塑料筐中，用保鮮膜密封后，放在室溫條件下存放。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗壞血酸(VC)結(jié)合卡利比克畢赤酵母使用防治水果采后病害的方法，其特征在于其中所述的NYDB培養(yǎng)基為:酵母膏5 g，牛肉浸膏8 g，葡萄糖10 g，純化水1000 ml，pH自然。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗壞血酸(VC)結(jié)合卡利比克畢赤酵母使用防治水果采后...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張紅印，李超蘭，張曉云，楊其亞，
申請(專利權(quán))人：江蘇大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：江蘇;32
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