本發(fā)明專利技術(shù)主要公開一種從牡丹花中提取牡丹花總黃酮的方法，包括采用乙醇溶液提取、牡丹花總黃酮粗品樹脂富集、牡丹花總黃酮精制品沉淀富集和牡丹花總黃酮進(jìn)一步純化四大步驟，本發(fā)明專利技術(shù)通過先加醋酸鉛沉淀，再加H2S脫鉛的方式，有效提高了產(chǎn)品純度，達(dá)到96%以上，產(chǎn)率達(dá)到1.0%以上，所得到的黃酮組成明確，適合于工業(yè)化制備等優(yōu)點(diǎn)，得到的黃酮類化合物活性測試顯示出較好的活血化瘀作用。本方法可以用于從牡丹花中較大規(guī)模的提取牡丹花總黃酮類化合物，為牡丹花及其中所含黃酮類化合物在今后的研究開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于天然產(chǎn)物中有效成分提取及分離
，具體涉及。
技術(shù)介紹
牡丹原產(chǎn)于中國西部秦嶺和大巴山一帶山區(qū)，為多年生落葉小灌木，是我國特有的木本名貴花卉，有數(shù)千年的自然生長和兩千多年的人工栽培歷史。牡丹全身是寶，其根、莖、葉、花、種子等均居有重要的價(jià)值。目前，在牡丹培育和研究方法做了很多工作，在牡丹花研究方面，吳龍奇等[吳龍奇，朱文學(xué)，易軍鵬，等.牡丹花紅色素類型判定及提取工藝試驗(yàn)[J].農(nóng)業(yè)機(jī)械學(xué)報(bào)，2005,36(10): 77-80]研究確定了牡丹花色素為花青素類色素，提取牡丹花紅色素適宜的條件為:浸取劑為鹽酸體積分?jǐn)?shù)為I %的酸性無水乙醇，浸取溫度50°C，浸取時(shí)間3h。樊金玲等[樊金玲，朱文學(xué)，馬海樂，等.高效液相色譜-電噴霧質(zhì)譜法分析牡丹花 中花色苷類化合物[J].食品科學(xué)，2007,28(8): 367-371]利用高效液相質(zhì)譜一電噴霧質(zhì)譜法分離檢測了 5種花色苷，分別鑒定為矢車菊_3，5-0-二葡萄糖苷、矢車菊-3-0-葡萄糖苷、芍藥_3，5-0- 二葡萄糖苷、芍藥-3-0-葡萄糖苷和天竺葵-3，5-0- 二葡萄糖苷。但是，在牡丹花黃酮類化合物制備分離，物質(zhì)基礎(chǔ)確認(rèn)及活性研究方面，目前研究還相對較少。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的為針對現(xiàn)有技術(shù)中牡丹花黃酮類化合物提取技術(shù)不足的問題，提供了一種從牡丹花中提取高純度牡丹花總黃酮的方法。本專利技術(shù)實(shí)現(xiàn)上述目的采用的技術(shù)方案是:，包括以下步驟: 1)采用乙醇溶液提取 采摘牡丹花原料，除去花萼、花托，得到牡丹花瓣，將牡丹花瓣在室溫下干燥后進(jìn)行粉碎，然后加入到質(zhì)量濃度為70-90%的乙醇溶液中浸泡6-48h，浸泡結(jié)束后進(jìn)行超聲提取20-40min，提取結(jié)束后進(jìn)行過濾，收集濾液，并向得到的濾渣中加入質(zhì)量濃度為70-90%的乙醇溶液，重復(fù)上述超聲提取和過濾操作2次，合并所有濾液，減壓濃縮至無溶劑，得提取浸膏，備用； 2)牡丹花總黃酮粗品樹脂富集 將步驟I)得到的提取浸膏用蒸餾水溶解，過濾，將得到的濾液用樹脂進(jìn)行吸附，裝柱，然后依次用體積濃度為0%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95%的乙醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集體積濃度為60%的乙醇水溶液洗脫餾分，減壓濃縮至浸膏狀物，并將浸膏狀物在50-60°C下真空減壓干燥，干燥完成即得牡丹花總黃酮粗品，備用； 3)牡丹花總黃酮精制品沉淀富集將步驟2)得到的牡丹花總黃酮粗品用其重量20-30倍的體積濃度為95%的乙醇溶液溶解，溶解完全后加入醋酸鉛溶液至不再有沉淀生成，過濾，將得到的沉淀用水洗滌2-3次，棄去濾液和洗滌液，得到沉淀物，備用；將沉淀物干燥后懸浮于其重量40-50倍的體積濃度為95%的乙醇溶液中，通入H2S脫鉛，過濾，濾渣用體積濃度為95%的乙醇溶液洗滌2-3次，合并濾液和洗液，調(diào)節(jié)PH為6.5-7.0，減壓濃縮回收乙醇，即得到牡丹花總黃酮精制品，備用； 4)牡丹花總黃酮進(jìn)一步純化 將步驟3)得到的牡丹花總黃酮精制品用其重量30-50倍的甲醇溶解，甲醇的溫度為50-60°C，然后趁熱用牡丹花總黃酮精制品重量10-20倍的活性炭過濾，收集濾液，減壓回收甲醇，即得到經(jīng)過進(jìn)一步純化的牡丹花總黃酮。所述的步驟I)中浸泡牡丹花瓣時(shí)采用的質(zhì)量濃度為70-90%的乙醇溶液的添加量為干燥牡丹花瓣重量的10-20倍，超聲提取濾渣時(shí)乙醇溶液的添加量為濾渣重量的10-20倍。所述的步驟2)中溶解提取浸膏時(shí)蒸餾水的用量為提取浸膏重量的200-400倍。所述的步驟2)中的樹脂為DlOl或AB-8型大孔吸附樹脂，或者聚酰胺樹脂。所述的步驟2)中樹脂的用量為提取浸膏重量的200-400倍。所述的步驟2)中不同濃度的乙醇水溶液的洗脫體積均為柱體積的3-5倍。本專利技術(shù)的有益效果 本專利技術(shù)提供的提取方法與現(xiàn)有技術(shù)相比，方法簡便、快捷，通過先加醋酸鉛沉淀，再加H2S脫鉛的方式，有效提高了產(chǎn)品純度，達(dá)到96%以上，產(chǎn)率達(dá)到1.0%以上，所得到的黃酮組成明確，適合于工業(yè)化制備等優(yōu)點(diǎn)，得到的黃酮類化合物活性測試顯示出較好的活血化瘀作用。本方法可以用于從牡丹花中較大規(guī)模的提取牡丹花總黃酮類化合物，為牡丹花及其中所含黃酮類化合物在今后的研究開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。【附圖說明】圖1為蘆丁的紫外吸收光譜圖； 圖2為蘆丁的吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線； 圖3為化合物I的核磁共振氫譜圖； 圖4為化合物I的核磁共振碳譜圖； 圖5為化合物II的核磁共振氫譜圖； 圖6為化合物II的核磁共振碳譜圖； 圖7為化合物III的核磁共振氫譜圖； 圖8為化合物III的核磁共振碳譜圖； 圖9為化合物IV的核磁共振氫譜圖； 圖10為化合物IV的核磁共振碳譜圖； 圖11為化合物V的核磁共振氫譜圖。【具體實(shí)施方式】，包括以下步驟:1)采用乙醇溶液提取 采摘牡丹花原料，除去花萼、花托，得到牡丹花瓣，將牡丹花瓣在室溫下干燥后進(jìn)行粉碎，然后加入到質(zhì)量濃度為70-90%的乙醇溶液中浸泡6-48h，浸泡結(jié)束后進(jìn)行超聲提取20-40min，提取結(jié)束后進(jìn)行過濾，收集濾液，并向得到的濾渣中加入質(zhì)量濃度為70-90%的乙醇溶液，重復(fù)上述超聲提取和過濾操作2次，合并所有濾液，減壓濃縮至無溶劑，得提取浸膏，備用； 2)牡丹花總黃酮粗品樹脂富集 將步驟I)得到的提取浸膏用蒸餾水溶解，過濾，將得到的濾液用樹脂進(jìn)行吸附，裝柱，然后依次用體積濃度為0%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95%的乙醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集體積濃度為60%的乙醇水溶液洗脫餾分，減壓濃縮至浸膏狀物，并將浸膏狀物在50-60°C下真空減壓干燥，干燥完成即得牡丹花總黃酮粗品，備用； 3)牡丹花總黃酮精制品沉淀富集 將步驟2)得到的牡丹花總黃酮粗品用其重量20-30倍的體積濃度為95%的乙醇溶液溶解，溶解完全后加入醋酸鉛溶液至不再有沉淀生成，過濾，將得到的沉淀用水洗滌2-3次，棄去濾液和洗滌液，得到沉淀物，備用；將沉淀物干燥后懸浮于其重量40-50倍的體積濃度為95%的乙醇溶液中，通入H2S脫鉛，過濾，濾渣用體積濃度為95%的乙醇溶液洗滌2-3次，合并濾液和洗液，調(diào)節(jié)PH為6.5-7.0，減壓濃縮回收乙醇，即得到牡丹花總黃酮精制品，備用； 4)牡丹花總黃酮進(jìn)一步純化 將步驟3)得到的牡丹花總黃酮精制品用其重量30-50倍的甲醇溶解，甲醇的溫度為50-60°C，然后趁熱用牡丹花總黃酮精制品重量10-20倍的活性炭過濾，收集濾液，減壓回收甲醇，即得到經(jīng)過進(jìn)一步純化的牡丹花總黃酮。所述的步驟I)中浸泡牡丹花瓣時(shí)采用的質(zhì)量濃度為70-90%的乙醇溶液的添加量為干燥牡丹花瓣重量的10-20倍，超聲提取濾渣時(shí)乙醇溶液的添加量為濾渣重量的10-20倍。所述的步驟2)中溶解提取浸膏時(shí)蒸餾水的用量為提取浸膏重量的200-400倍。所述的步驟2)中的樹脂為DlOl或AB-8型大孔吸附樹脂，或者聚酰胺樹脂。所述的步驟2)中樹脂的用量為提取浸膏重量的200-400倍。所述的步驟2)中不同濃度的乙醇水溶液的洗脫體積均為柱體積的3-5倍。一、總黃酮含量的計(jì)算方法: (I)最大波長掃描 取少量蘆丁，加入70%乙醇溶解，然后移取2 mL溶液至10 mL容量瓶中，繼續(xù)加入7本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種從牡丹花中提取牡丹花總黃酮的方法，其特征在于：包括以下步驟：1）采用乙醇溶液提取采摘牡丹花原料，除去花萼、花托，得到牡丹花瓣，將牡丹花瓣在室溫下干燥后進(jìn)行粉碎，然后加入到質(zhì)量濃度為70?90%的乙醇溶液中浸泡6?48h，浸泡結(jié)束后進(jìn)行超聲提取20?40min，提取結(jié)束后進(jìn)行過濾，收集濾液，并向得到的濾渣中加入質(zhì)量濃度為70?90%的乙醇溶液，重復(fù)上述超聲提取和過濾操作2次，合并所有濾液，減壓濃縮至無溶劑，得提取浸膏，備用；2）牡丹花總黃酮粗品樹脂富集將步驟1）得到的提取浸膏用蒸餾水溶解，過濾，將得到的濾液用樹脂進(jìn)行吸附，裝柱，然后依次用體積濃度為0%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95%的乙醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集體積濃度為60%的乙醇水溶液洗脫餾分，減壓濃縮至浸膏狀物，并將浸膏狀物在50?60℃下真空減壓干燥，干燥完成即得牡丹花總黃酮粗品，備用；3）牡丹花總黃酮精制品沉淀富集將步驟2）得到的牡丹花總黃酮粗品用其重量20?30倍的體積濃度為95%的乙醇溶液溶解，溶解完全后加入醋酸鉛溶液至不再有沉淀生成，過濾，將得到的沉淀用水洗滌2?3次，棄去濾液和洗滌液，得到沉淀物，備用；將沉淀物干燥后懸浮于其重量40?50倍的體積濃度為95%的乙醇溶液中，通入H2S?脫鉛，過濾，濾渣用體積濃度為95%的乙醇溶液洗滌2?3次，合并濾液和洗液，調(diào)節(jié)pH為6.5?7.0，減壓濃縮回收乙醇，即得到牡丹花總黃酮精制品，備用；4）牡丹花總黃酮進(jìn)一步純化將步驟3）得到的牡丹花總黃酮精制品用其重量30?50倍的甲醇溶解，甲醇的溫度為50?60℃，然后趁熱用牡丹花總黃酮精制品重量10?20倍的活性炭過濾，收集濾液，減壓回收甲醇，即得到經(jīng)過進(jìn)一步純化的牡丹花總黃酮。...
【技術(shù)特征摘要】
1.一種從牡丹花中提取牡丹花總黃酮的方法，其特征在于:包括以下步驟: 1)采用乙醇溶液提取 采摘牡丹花原料，除去花萼、花托，得到牡丹花瓣，將牡丹花瓣在室溫下干燥后進(jìn)行粉碎，然后加入到質(zhì)量濃度為70-90%的乙醇溶液中浸泡6-48h，浸泡結(jié)束后進(jìn)行超聲提取20-40min，提取結(jié)束后進(jìn)行過濾，收集濾液，并向得到的濾渣中加入質(zhì)量濃度為70-90%的乙醇溶液，重復(fù)上述超聲提取和過濾操作2次，合并所有濾液，減壓濃縮至無溶劑，得提取浸膏，備用； 2)牡丹花總黃酮粗品樹脂富集 將步驟I)得到的提取浸膏用蒸餾水溶解，過濾，將得到的濾液用樹脂進(jìn)行吸附，裝柱，然后依次用體積濃度為0%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95%的乙醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集體積濃度為60%的乙醇水溶液洗脫餾分，減壓濃縮至浸膏狀物，并將浸膏狀物在50-60°C下真空減壓干燥，干燥完成即得牡丹花總黃酮粗品，備用； 3)牡丹花總黃酮精制品沉淀富集 將步驟2)得到的牡丹花總黃酮粗品用其重量20-30倍的體積濃度為95%的乙醇溶液溶解，溶解完全后加入醋酸鉛溶液至不再有沉淀生成，過濾，將得到的沉淀用水洗滌2-3次，棄去濾液和 洗滌液，得到沉淀物，備用；將沉淀物干燥后懸浮于其重量40-50倍的體積濃度為95%的乙醇溶液中，通入H2S脫鉛，過濾，濾渣用體積濃度為95%...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉普，鄧瑞雪，易軍鵬，李小方，高嘉嶼，尹衛(wèi)平，柴元武，時(shí)清亮，
申請(專利權(quán))人：河南科技大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：河南;41
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