本發明專利技術涉及一種確定藥劑是否會在人類中引起免疫毒性的方法。該方法包括向已被移植人造血干細胞(HSC)和施用一種或多種人細胞因子的非人類哺乳動物施用該藥劑；以及確定藥劑是否在非人類哺乳動物中引起免疫毒性，其中如果所述藥劑在非人類哺乳動物中引起免疫毒性，則所述藥劑在人類中引起毒性。在另一個方面，本發明專利技術涉及一種確定藥劑施用是否在需要的個體中引起細胞因子釋放綜合征的方法。該方法包括向已移植HSC和施用一種或多種人細胞因子的非人類哺乳動物施用該藥劑；和確定所述藥劑是否在非人類哺乳動物中引起細胞因子釋放綜合征，其中如果所述藥劑在非人類哺乳動物中引起細胞因子釋放綜合征，則該藥劑在人類中引起細胞因子釋放綜合征。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】【專利摘要】本專利技術涉及一種確定藥劑是否會在人類中引起免疫毒性的方法。該方法包括向已被移植人造血干細胞(HSC)和施用一種或多種人細胞因子的非人類哺乳動物施用該藥劑；以及確定藥劑是否在非人類哺乳動物中引起免疫毒性，其中如果所述藥劑在非人類哺乳動物中引起免疫毒性，則所述藥劑在人類中引起毒性。在另一個方面，本專利技術涉及一種確定藥劑施用是否在需要的個體中引起細胞因子釋放綜合征的方法。該方法包括向已移植HSC和施用一種或多種人細胞因子的非人類哺乳動物施用該藥劑；和確定所述藥劑是否在非人類哺乳動物中引起細胞因子釋放綜合征，其中如果所述藥劑在非人類哺乳動物中引起細胞因子釋放綜合征，則該藥劑在人類中引起細胞因子釋放綜合征。【專利說明】利用人源化的小鼠來確定毒性 相關申請 本申請要求2011年12月6日提交的61/567, 466號美國臨時申請的優先權。 上述申請的全文通過引用在此引入。 專利技術背景 由于接近于人體的模型往往無法準確地預測許多不利的影響，臨床前和臨床試驗 之間存在明顯的差距。在I期臨床試驗中，施用TGN1412(開發用于治療自身免疫性疾病的 人源化超激動（superagonistic)CD28單克隆抗體（IgG4))導致了與"細胞因子風暴"癥狀 相關的災難性事件。急需建立一個可以準確地預測這種不利影響的模型。具有增強的人免 疫細胞移植特性的免疫缺陷NOD-scid IL2rY null小鼠給出了一種有吸引力的模型。然而， 由于在當前的模型中觀察到弱的人類免疫反應，它們的廣泛使用受到限制。 因此，需要可以準確地預測藥劑（例如，治療劑）對人體免疫系統的不利影響的改 進的模型。 專利技術概沭 通過向小鼠注射人造血干細胞和人細胞因子（例如，人IL-I5和Flt-3L細胞因 子）改進人源化小鼠模型的免疫反應。本專利技術證明，細胞因子處理的人源化（CTH)小鼠模型 得以以高保真度預測了在臨床中或臨床前試驗中使用的四種不同單克隆抗體的不利影響。 因此，在一個方面中，本專利技術涉及一種確定（一種或多種）藥劑是否會在人類中引 起免疫毒性的方法。該方法包括向已移植人造血干細胞（HSC)和施用一種或多種人類細 胞因子的非人類哺乳動物施用該藥劑；以及確定藥劑是否會在非人類哺乳動物中引起免疫 毒性，其中，如果所述藥劑在非人類哺乳動物中引起免疫毒性，則所述藥劑在人類中引起毒 性。 在另一個方面，本專利技術涉及一種確定施用（一種或多種）藥劑是否會在需要的個 體（例如，人）中引起細胞因子釋放綜合征的方法。該方法包括向已移植人造血干細胞 (HSC)和施用一種或多種人類細胞因子的非人類哺乳動物施用該藥劑；以及確定所述藥劑 是否會在該非人類哺乳動物中引起細胞因子釋放綜合征，其中，如果所述藥劑在該非人類 哺乳動物中引起細胞因子釋放綜合征，則該藥劑在人類中引起細胞因子釋放綜合征。 附圖簡要說明 本專利或申請文件包含至少一張以彩色繪制的附圖。帶有彩色附圖的本專利或專 利申請的副本將經請求和支付必要費用后由專利局提供。 圖1 :注射TGN 1412引起一大組全身性促炎性細胞因子產生。在TGN 1412-IgG4(小鼠抗-人⑶28抗體5· 11A1的人源化形式（同種型：人IgG4/Kappa)，在本文 也被稱為TGN1412)和TGN1412-AA (小鼠抗-人⑶28抗體5. 11A1的人源化FcR-非結合形 式（同種型：人IgG4/Kappa))處理組的血清中在處理前48小時、注射后2小時和24小時 測量細胞因子產生。也將值與鹽水注射的對照組進行了比較。通過BD FACSArray分析來 測定人白介素-2〇111^-2)、1111^-6、1111^-8、1111^-10、1111^-4、11正^￥和於嚦-〇的量。各個 符號代表一只小鼠。相同的符號表不在不同時間點的相同的小鼠。η值表不在每一組中使 用的小鼠的數目，來自兩個獨立的實驗。 圖2A-2B :在TGN1412處理后注意到T細胞和NK細胞百分比和絕對數的變化。在指 示時間點對小鼠采血和分析PBMC的人CD45 (hCD45)。（2A)顯示了按照流式細胞分析，門控 于人⑶45細胞上的⑶3+、⑶14+、⑶19+、⑶56+的百分比和門控于來自小鼠 PBMC的⑶45+⑶3+ 細胞上的CD4+和CD8+的百分比的比較。（2B)根據使用血細胞計數儀計算的活細胞數和從 流式細胞分析獲得的相應細胞群的百分比之間的相關性計算不同細胞譜系的絕對數。 圖3 :向沒有用IL-15和FLT3L細胞因子處理的人源化小鼠注射TGN1412-lgG4未 伴隨細胞因子產生的增加。在處理前48小時、注射后2和24小時測量TGN1412-IgG4處理 組的血清中的細胞因子產生。也將值與鹽水注射的對照組進行比較。通過BD FACSArray 分析測定 1111^-2、1111^-6、1111^-8、1111^-113、11幾 -4、11正^￥和1^嚦-〇的量。各個符號代表一 只小鼠。相同的符號表示在不同時間點的相同的小鼠。η值表示在每組中使用的小鼠的數 目，來自單一的實驗。 圖4Α-4Β :在未用IL-15和FLT3L細胞因子處理的人源化小鼠的TGN1412處理后 注意到Τ、Β和ΝΚ細胞百分比和絕對數的變化。在指示時間點對小鼠采血和分析PBMC的人 ⑶45(h⑶45)。（4Α)顯示了按照流式細胞分析，門控于人⑶45細胞上的⑶3+、⑶14+、⑶19+、 ⑶56+的百分比和門控于來自小鼠的PBMC的⑶45+⑶3+細胞上的⑶4+和⑶8+的百分比的比 較。（4B)根據使用血細胞計數儀計算的活細胞數和從流式細胞分析獲得的相應細胞群的百 分比之間的相關性計算不同細胞譜系的絕對數。 圖5 :注射0KT3引起一大組全身的促炎性細胞因子產生。在處理前48小時、注射 后2小時和24小時，在0KT3治療組的血清中測量細胞因子的產生。也將值與鹽水注射的 對照組進行比較。通過 BDFACSArray 測定 hIL-2、hIL-6、hIL-8、hIL-Ι β、hIL-4、hlFN- γ 和hTNF-α的量。各個符號代表一只小鼠。相同的符號表不在不同時間點的相同的小鼠。 η值表示在每一組中使用的小鼠的數目，來自三個獨立的實驗。 圖6Α-6Β :在0ΚΤ3處理后注意到幾個細胞百分比和絕對數的變化。在指示時間點 對小鼠采血和按在圖1中提到的分析PBMC的人CD45(hCD45)。（6Α)顯示了按照流式細胞 儀分析，門控于來自小鼠 PBMC的人⑶45細胞上的⑶3+、⑶14+、⑶19+、⑶56+的百分數的比 較。（6B)示出不同細胞譜系的絕對數。 圖7 :阿侖單抗注射表現出促炎性細胞因子的略微增加。在在處理前48小時、注 射后2小時和24小時測量阿侖單抗治療組的血清中的細胞因子的產生。也將值與鹽水注 射的對照組進行比較。η值表示在每一組中使用的小鼠的數目，來自兩個獨立的實驗。 圖8Α-8Β :阿侖單抗的注射與淋巴細胞、ΝΚ細胞和單核細胞的急劇減少相關聯。在 指示時間點對小鼠采血和按在圖1中提到的分析PBMC的人CD45(hCD45)。（8Α)顯示了按 照流式細胞分析，門控于來自小鼠 PBMC的人⑶45+細胞上的⑶3+、⑶14+、⑶19+和⑶56+的 百分數的比較。（8B)示本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種確定藥劑是否在人類中引起免疫毒性的方法，包括：a)向已移植人造血干細胞(HSC)和施用一種或多種人細胞因子的非人類哺乳動物施用該藥劑；和b)確定該藥劑是否在該非人類哺乳動物中引起免疫毒性，其中，如果所述藥劑在該非人類哺乳動物中引起免疫毒性，則所述藥劑在人類中引起毒性。
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：S·鮑格爾莫哈，M·庫利，陳清風，陳建竹，
申請(專利權)人：麻省理工學院，
類型：發明
國別省市：美國;US
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