抗體可變區，其包含ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所示的氨基酸序列。（*該技術在2023年保護過期，可自由使用*）
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術總體上涉及經修飾抗體。更具體地，本專利技術涉及特異結合人細胞表面鞘糖酯GD2的具有已降低免疫原性的經修飾抗體，以及它們作為治療劑的用途。
技術介紹
許多年來，在研發基于抗體的治療中有很大進展。例如，研究者不僅鑒定了許多癌特異標記物，也鑒定了許多與此類標記物特異結合的抗體。抗體可用于向表達標記物的癌細胞遞送特定的分子，例如毒素或免疫刺激物如細胞因子以選擇性殺死癌細胞。14.18抗體為針對細胞表面鞘糖脂GD2的小鼠來源單克隆抗體。GD2為通常只在神經元細胞外表面膜以顯著水平表達的二唾液酸神經節苷酯，其中它暴露于免疫系統是受到血腦屏障限制的。相反的，許多腫瘤細胞鞘糖酯細胞表面表達具有異常水平。例如，GD2在廣泛的腫瘤細胞表面表達，所述腫瘤細胞包括成神經細胞瘤、成神經管細胞瘤、星形細胞瘤、黑素瘤、小細胞肺癌、骨肉瘤及其它軟組織肉瘤。因此，GD2為用于將免疫刺激性蛋白質結構域靶向腫瘤細胞，以對腫瘤細胞引起有效的免疫反應而破壞它們的一種便利的腫瘤特異標記物。雖然14.18小鼠抗體(m14.18抗體)可有助于將此類蛋白質結構域靶向腫瘤細胞，但其小鼠來源的氨基酸序列可降低目的治療作用。當施用于患者時，抗體在宿主哺乳動物中具有伴隨的免疫原性。當抗體不是自體的時，這更有可能發生。結果基于抗體治療的有效性常常受到針對治療性抗體的免疫原性反應的限制。當抗體整個或部分來自與宿主哺乳動物不同的哺乳動物，例如當抗體來自小鼠且受者為人時，免疫原性反應一般增加。對于在人中的臨床用途，將小鼠來源抗體修飾成與人抗體更接近，以將小鼠來源抗體的免疫原性降低或降到最小可能是有利的。小鼠來源抗體的免疫原性可通過制備嵌合抗體降低，所述嵌合抗體將人抗體的恒定區與小鼠可變結構域進行融合。然而，殘留的小鼠可變結構域在人中一般仍具有免疫原性并因此可降低基于抗體治療的功效。降低免疫原性的一些方法，如“鑲嵌術(veneering)”及“人源化”涉及導入許多氨基酸替代并可破壞抗體與抗原的結合。m14.18抗體與GD2的結合具有中等親和力。因此，預計顯著降低m14.18對GD2親和力的突變使得m14.18在人中的治療性目的的作用降低。因此，本領域需要可有效靶向GD2并在施用于人時具有降低免疫原性的治療性抗體。專利技術概述總體上，本專利技術提供了在人中具有較低免疫原性但仍保持m14.18對人GD2結合親和力的m14.18抗體的經修飾形式。更具體地，本專利技術提供了m14.18抗體的人源化形式(hu14.18抗體)，其中一個或多個構架區的一些小鼠特異氨基酸用不同氨基酸替代以降低它們在人中的免疫原性。本專利技術也提供了hu14.18抗體與一種或多種非免疫球蛋白分子融合以增強靶向免疫治療的作用。一方面，本專利技術提供了包括定義了免疫球蛋白輕鏈可變區(VL區)的SEQ ID N01所示氨基酸序列的抗體可變區。另一方面，本專利技術涉及包括定義了免疫球蛋白重鏈可變區(VH區)的SEQ ID NO2所示氨基酸序列的抗體可變區。在一個實施方案中，本專利技術提供了SEQ ID NO1所示氨基酸序列與SEQ ID NO2所示氨基酸序列連接的抗體可變區。氨基酸序列可例如通過二硫鍵或肽鍵連接。另一方面，本專利技術涉及與GD2特異結合并包括至少SEQ ID NO1的第1-23位氨基酸、SEQ ID NO2的第1-25位氨基酸或SEQ ID NO2的第67-98位氨基酸的抗體可變區。此類序列定義了hu14.18抗體的免疫球蛋白可變區中的構架區。構架區在以下進行更詳細的描述。本專利技術的一方面涉及用于靶向表面具有GD2的細胞并包括向患者施用本專利技術所述抗體可變區的方法。在一個實施方案中，靶細胞為腫瘤細胞。本專利技術的另一方面包括編碼抗體可變區的核酸或包括此核酸的細胞，所述核酸或包括此核酸的細胞可向患者施用或用于體外蛋白質產生。本專利技術也提供了包括本專利技術所述抗體可變區及至少包含CH2結構域的Fc部分的多肽、編碼多肽的核酸、包括核酸的細胞以及通過向患者施用多肽、核酸或細胞用于靶向表面具有GD2的細胞的方法。在本專利技術的一些實施方案中，Fc部分來自IgG1。有或無插入Fc部分的抗體可變區可與非免疫球蛋白分子連接。具體地，非免疫球蛋白分子可為細胞因子，如白細胞介素、造血因子、淋巴因子、干擾素或趨化因子。白細胞介素可為例如白細胞介素-2或白細胞介素-12。造血因子及淋巴因子可分別為例如粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)及淋巴毒素。干擾素可為例如干擾素-α、干擾素-β或干擾素-γ。在本專利技術的一些實施方案中，融合蛋白包括第二種非免疫球蛋白分子，如第二種細胞因子。在具體的實施方案中，融合蛋白包括抗體可變區、IL-2及IL-12。可以理解文中描述的多種實施方案的特征不是互相排斥的并可以多種組合及互換存在。附圖描述附圖說明圖1A顯示根據本專利技術所述的免疫球蛋白輕鏈可變區的氨基酸序列。圖1B顯示根據本專利技術所述的免疫球蛋白重鏈可變區的氨基酸序列。圖2A-D顯示表達載體的核苷酸序列，包括編碼根據本專利技術所述的免疫球蛋白輕鏈及免疫球蛋白重鏈-IL-2融合蛋白的核酸構建體。圖3A顯示根據本專利技術所述的免疫球蛋白輕鏈的氨基酸序列。圖3B顯示根據本專利技術所述的免疫球蛋白重鏈的氨基酸序列。專利技術詳述本專利技術提供了在人中具有較低免疫原性但仍能特異結合人GD2的m14.18抗體的經修飾形式。降低的免疫原性是由免疫球蛋白可變結構域中一個或多個經改變氨基酸序列提供的。抗體用于治療GD2陽性腫瘤，特別是當與細胞因子或其它免疫調節劑融合時，抗體用于治療GD2陽性腫瘤。如文中應用的，術語“抗體”及“免疫球蛋白”理解為表示(i)完整抗體(例如，單克隆抗體或多克隆抗體)，(ii)其抗原結合部分，包括例如Fab片段、Fab’片段、(Fab’)2片段、Fv片段、單鏈抗體結合部位、sFv，(iii)雙特異抗體及其抗原結合部分，和(iv)多特異性抗體及其抗原結合部分。如文中應用的，術語“特異結合”及“特異性結合”理解為表示抗體對特定抗原具有至少約106M-1，更優選地至少約107M-1，更優選地至少約108M-1及最優選地至少約1010M-1的結合親和力。如文中應用的，術語“構架區”及“FR”理解為表示與互補性決定區(CDR)相鄰的免疫球蛋白可變區的區域。CDR為與抗原主要相互作用的免疫球蛋白部分。如圖1中顯示的，VH及VL區域均包含四個FR并位于氨基酸序列的加框部分。特別地，對于圖1A(SEQ ID NO1)顯示的氨基酸序列，輕鏈FR由自Aspl至Cys23(huVLFR1)、自His39至His54(huVLFR2)、自Gly62至Cys93(huVLFR3)及自Phe104至Lys113(huVLFR4)的氨基酸序列定義。對于圖1B(SEQ ID NO2)中顯示的氨基酸序列，重鏈FR由自Glu1至Ser25(huVHFR1)、自Trp36至Gly49(huVHFR2)、自Arg67至Ser98(huVHFR3)及自Trp103至Ser113(huVHFR4)的氨基酸序列定義。本專利技術的蛋白質序列本專利技術以與人細胞表面鞘糖酯GD2結合優選地特異結合、并具有衍生自m14.18抗體的經修飾區域的抗體為特征。將VH或VL氨基酸序列(或兩者的氨基酸序列)進行修飾或人源化以在向人施用時，降低本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】
【專利技術屬性】
技術研發人員：S·D·吉利斯，勞健明，
申請(專利權)人：默克專利有限公司，
類型：發明
國別省市：
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