一種從金銀花粗取物中精制綠原酸的方法技術

本發明專利技術涉及提取綠原酸的方法，具體的說是一種從金銀花粗取物中精制綠原酸的方法。具體采用大孔樹脂A柱除雜過程，大孔樹脂B柱富集純化過程和中壓液相色譜（MPLC）精制過程。本發明專利技術以金銀花粗提物為原料，用去離子水充分溶解后，配制成金銀花粗提物的水溶液，將上述水溶液經大孔樹脂柱A吸附除去雜質，流出液直接過大孔樹脂柱B，動態吸附飽和后，流加洗雜液洗雜至流出液無色，用洗脫液洗脫大孔樹脂B至高效液相色譜（HPLC）檢測無綠原酸流出，并收集洗脫液，洗脫液減壓濃縮，經裝有C18反相硅膠柱的MPLC梯度洗脫得純度大于98%的綠原酸產品。該方法首次提出用MPLC制備高純度綠原酸，樣品處理量大，操作簡單，適用于大規模制備。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及提取綠原酸的方法，具體的說是一種從金銀花粗取物中精制綠原酸的方法。
技術介紹
金銀花，別名忍冬，是忍冬科多年生半常綠纏繞木質藤本植物。金銀花為干燥花蕾或初開的花，在我國東三省、廣東、海南、山東、喜馬拉雅山均有廣泛分布。金銀花甘寒清熱而不傷胃，芳香透達可以祛邪，還可散風熱，對發疹、發斑、熱毒瘡癰、咽喉腫痛等癥均有明顯療效，是清熱解毒的良藥。綠原酸為金銀花的特征活性成分，具有抗菌、抗病毒及抗真菌、增強機體防御機能的作用。中藥制劑中綠原酸的精制方法主要有有機溶劑萃取法、重結晶法和聚酰胺法等。中國專利200310111180.2公開了“一種綠原酸提取分離的方法”，以杜仲樹葉和元寶楓葉為原料，經溶劑浸出、樹脂吸附、萃取、干燥、結晶，得純度為98%以上的綠原酸產品。中國專利200910264401.7公開了“一種菊芋制備綠原酸的方法”，以菊芋葉為原料，經超聲提取，固液分離，聚酰胺精制后得精制綠原酸產品。但采用中壓液相色譜法制備高純度綠原酸的方法尚屬首次報導。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種從金銀花粗提物中精制綠原酸的新方法。為實現上述目的，本專利技術采用的技術方案為：一種從金銀花粗取物中精制綠原酸的方法：1）大孔樹脂柱A除雜過程，將金銀花提取物的水溶液以1-5BV/h的流速通過大孔樹脂柱A，吸附除雜質，收集流出液；2）大孔樹脂柱B富集純化過程，將步驟1）收集的流出液以1-5BV/h的流速過大孔樹脂柱B，動態吸附飽和后，用去離子水以1-10BV/h的流速淋洗大孔樹脂柱B至流出液無色，再用體積分數為10%-80%的乙醇水溶液以5-10BV/h的流速進行洗脫，收集乙醇洗脫液直至無綠原酸流出，最后將收集所得洗脫液減壓濃縮至膏狀；3）MPLC精制過程，將步驟2）所得的浸膏用30%的甲醇溶解，將溶液注入20-45μm的C18反相硅膠柱，以甲醇和水為流動相，洗脫流速為50-250mL/min進行梯度洗脫，收集出峰時間為10-15min的流出液，流出液經減壓濃縮、冷凍干燥后，得綠原酸純度大于98%的綠原酸產品。所述步驟1）金銀花提取物的水溶液為以金銀花為原料經水提醇沉法提取所得的提取物中加入去離子水，室溫下充分攪拌后，配制成，其中金銀花提取物與去離子水的比例為1:10（W/V）。所述步驟1）的大孔樹脂A為符合藥用要求的非極性大孔樹脂。所述步驟1）的大孔樹脂A為D3520型、D4006型、HPD-100型、HPD-200A型或H103型大孔樹脂中的一種。所述步驟2）的大孔吸附樹脂為符合藥用要求的極性或中極性大孔樹脂。所述步驟2）的大孔吸附樹脂為ADS-F8型、NKA型、NKA-2型、ADS-7型或S-8型大孔樹脂中的一種。所述步驟1）和步驟2）的大孔樹脂A和大孔樹脂B均可經再生液再生后重復使用，進而達到連續操作的目的。所述再生液為無水乙醇。所述步驟3）MPLC精制時流動相甲醇的體積分數在0-20min內從10%到50%梯度變化。本專利技術有益效果在于：1.本專利技術采用中壓液相色譜的方法制備高純度綠原酸，為綠原酸的精制提供一種新方法。2.本專利技術采用大孔樹脂除雜與大孔樹脂吸附洗脫聯用技術，處理量大，操作連續簡便，大大提高了洗脫過程中綠原酸的純度。3.本專利技術采用的洗脫劑和再生劑均可重復利用，且整個過程操作方法簡單，控制參數少，時間短，效率高，適用于工業化生產。4.本專利技術的方法相對于傳統綠原酸精制方法而言，采用中壓液相色譜法精制高純度綠原酸不但可以大大縮短制備時間（0.5h內即可完成），明顯提高工作效率。附圖說明圖1為金銀花粗提物水溶液中綠原酸的HPLC圖；圖2為經大孔樹脂柱A除雜后的綠原酸的HPLC圖；圖3為經大孔樹脂柱B富集純化后的綠原酸的HPLC圖；圖4為經MPLC精制后的綠原酸的HPLC圖；具體實施方式以下實施例是對本專利技術的進一步說明，但本專利技術不限于此。本專利技術所述實施例中，金銀花提取物是以金銀花為原料，經干燥、粉碎后，加水浸提，過濾，濾液加入乙醇，低溫冷藏，靜置過夜，使雜質沉淀；過濾，濾液濃縮干燥后得到的。本專利技術所述實施例中，綠原酸的純度采用高效液相色譜法進行檢測，所用色譜柱為Hypersil?BDS?C-18（4.6mm×250mm，5μm)，檢測波長為327nm，流動相A為0.1%三氟乙酸水溶液，B為乙腈，流速為1mL/min，進樣量為10μL，梯度洗脫程序如表1。表1?HPLC梯度洗脫程序實施例1（1）D3520型大孔樹脂柱除雜過程100g金銀花提取物用1000mL去離子水溶解，充分攪拌后，配制成金銀花提取物的水溶液（水溶液中綠原酸的HPLC圖如圖1所示），將上述水溶液以5BV/h的流速通過D3520型大孔樹脂柱吸附除去黃酮類、糖類等雜質，收集流出液，流出液中綠原酸的HPLC圖如圖2所示。（2）ADS-F8型大孔樹脂柱富集純化過程將步驟（1）收集的流出液直接以5BV/h的流速過ADS-F8型大孔樹脂柱，動態吸附飽和后，用去離子水以2BV/h的流速淋洗上述大孔樹脂柱至流出液無色，再用體積分數為30%的乙醇水溶液以10BV/h的流速進行洗脫，收集洗脫液直至HPLC檢測無綠原酸流出，最后將收集所得洗脫液減壓濃縮得到浸膏，浸膏中綠原酸的HPLC圖如圖3所示。（3）MPLC精制過程將步驟（2）所得的浸膏用30%的甲醇按料液比1:2（g/mL）的比例溶解，MPLC系統進一步精制，具體為以粒徑為15-40μm的C18硅膠鍵合固定相為色譜填料，以甲醇和水為流動相，梯度洗脫程序如表2，分3次進樣，分別收集出峰時間為10-15min的洗脫液，合并3次收集的洗脫液，減壓濃縮，冷凍干燥得9.6gHPLC檢測（圖4）純度為98.9%的綠原酸產品。表2?MPLC梯度洗脫程序1實施例2（1）D4006型大孔樹脂柱除雜過程500g金銀花提取物用5000mL去離子水溶解，充分攪拌后，配制成金銀花提取物水溶液，將上述水溶液以3BV/h的流速通過D4006型大孔樹脂柱吸附除去黃酮類、糖類等雜質，收集流出液。（2）NKA型大孔樹脂柱富集純化過程將步驟（1）收集的流出液直接以3BV/h的流速過NKA型大孔樹脂柱，動態吸附飽和后，用去離子水以4BV/h的流速淋洗上述大孔樹脂柱至流出液無色，再用體積分數為50%的乙醇水溶液以8BV/h本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種從金銀花粗取物中精制綠原酸的方法，其特征在于：1）大孔樹脂柱A除雜過程，將金銀花提取物的水溶液以1?5BV/h的流速通過大孔樹脂柱A，吸附除雜質，收集流出液；2）大孔樹脂柱B富集純化過程，將步驟1）收集的流出液以1?5BV/h的流速過大孔樹脂柱B，動態吸附飽和后，用去離子水以1?10BV/h的流速淋洗大孔樹脂柱B至流出液無色，再用體積分數為10%?80%的乙醇水溶液以5?10BV/h的流速進行洗脫，收集乙醇洗脫液直至無綠原酸流出，最后將收集所得洗脫液減壓濃縮至膏狀；3）MPLC精制過程，將步驟2）所得的浸膏用30%的甲醇溶解，將溶液注入20?45μm的C18反相硅膠柱，以甲醇和水為流動相，洗脫流速為50?250mL/min進行梯度洗脫，收集出峰時間為10?15min的流出液，流出液經減壓濃縮、冷凍干燥后，得綠原酸純度大于98%的綠原酸產品。

【技術特征摘要】
1.一種從金銀花粗取物中精制綠原酸的方法，其特征在于：
1）大孔樹脂柱A除雜過程，將金銀花提取物的水溶液以1-5BV/h的
流速通過大孔樹脂柱A，吸附除雜質，收集流出液；
2）大孔樹脂柱B富集純化過程，將步驟1）收集的流出液以1-5BV/h
的流速過大孔樹脂柱B，動態吸附飽和后，用去離子水以1-10BV/h的流速
淋洗大孔樹脂柱B至流出液無色，再用體積分數為10%-80%的乙醇水溶液以
5-10BV/h的流速進行洗脫，收集乙醇洗脫液直至無綠原酸流出，最后將收
集所得洗脫液減壓濃縮至膏狀；
3）MPLC精制過程，將步驟2）所得的浸膏用30%的甲醇溶解，將溶液
注入20-45μm的C18反相硅膠柱，以甲醇和水為流動相，洗脫流速為
50-250mL/min進行梯度洗脫，收集出峰時間為10-15min的流出液，流出液
經減壓濃縮、冷凍干燥后，得綠原酸純度大于98%的綠原酸產品。
2.按權利要求1所述的從金銀花粗取物中精制綠原酸的方法，其特征
在于：所述步驟1）金銀花提取物的水溶液為以金銀花為原料經水提醇沉法
提取所得的提取物中加入去離子水，室溫下充分攪拌后，配制成，其中金
銀花提取物與去離子水的比例為1:10（W/V）。
3.按權利要求1所述的從...

【專利技術屬性】
技術研發人員：夏傳海，孫鵬程，王建華，孔娜娜，
申請(專利權)人：中國科學院煙臺海岸帶研究所，
類型：發明
國別省市：山東;37