抗CXADR抗體制造技術

為了發現對癌的治療等有效的靶分子、提供與該分子特異性地結合的抗體、以及以該抗體作為有效成分的抗癌劑等，通過SST-REX來進行前列腺癌細胞株之間(LNCaP-CR細胞與LNCaP細胞之間)的比較，作為參與腫瘤發生等的分子鑒定了CXADR。然后，制作針對CXADR的單克隆抗體，研究抗癌活性、ADCC活性和CDC活性等，結果發現，與存在于源自人的CXADR蛋白質的181～230位的表位結合的抗體對前列腺癌細胞、胰癌細胞和大腸癌細胞發揮抗癌活性。進而，還弄清楚了該抗體具有ADCC活性和CDC活性。另外，成功地確定了該抗體的輕鏈和重鏈的可變區的結構。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及抗CXADR抗體，更詳細地，涉及與存在于源自人的CXADR蛋白質的181～230位的表位結合的抗體、以及以該抗體作為有效成分的藥物組合物和檢查藥。另外，本專利技術涉及以CXADR蛋白質存在或不存在作為指標，判定患者中所述抗體對癌治療的有效性的方法、對通過該方法判定為有效性高的患者施與所述抗體的癌的治療方法、以及以施與所述患者的所述抗體作為有效成分的癌的治療劑。
技術介紹
癌與冠狀動脈疾病同樣地是先進國中的主要死因，其比例也趨于逐年增加。另外，在癌中，肺癌、前列腺癌、胰癌、乳癌、結腸癌和卵巢癌是癌死因的代表。從世界范圍來看，特別前列腺癌是在男性中蔓延至第4位的癌，在歐美約2成的男性確認了其發病。并且，前列腺癌占日本的癌死亡患者的約3.5％，其比例近年也趨于激增。另外，針對前列腺癌等，外科切除、放射線療法、激素療法和化學療法作為主要治療方法被使用，但這些處置對多數人來說效果小，因而現狀是針對癌尚未確立有效的治療方法。由于這樣的現狀，近年來作為抗癌劑的抗體的利用受到關注，作為各種病狀(癌型)的治療的途徑，其重要性漸漸被認識到。例如，如果是以腫瘤特異性抗原為靶的抗體，則推定施與的抗體聚集于腫瘤，因而可以期待通過補體依賴性細胞毒(CDC)活性和/或抗體依賴性細胞毒(ADCC)活性而介由免疫系統來攻擊癌細胞。另外，通過在抗體上預先結合放射性核素、細胞毒性物質等藥劑，可以將所結合的藥劑效率良好地送達腫瘤部位。由此，可以減少向其他組織的藥劑到達量，進而可以預見副作用的減輕。在腫瘤特異性抗原有誘導細胞死亡的活性的情況下，通過施與具有激動活性的抗體，另外在腫瘤特異性抗原參與細胞的增殖和生存的情況下，通過施與具有中和活性的抗體，從而可以通過腫瘤特異性抗體的聚集和抗體的活性來期待腫瘤的增殖停止或退縮。由這樣的特性，認為抗體適合作為抗癌劑應用。作為到目前為止上市的抗體藥物，以白血病·淋巴瘤作為對象，開發了以CD20作為靶的利妥昔單抗(rituximab)(商品名：美羅華(Rituxan))、Inotuzumab?ozogamicin(商品名：澤娃靈(Zevailn))、以CD33作為靶的吉妥單抗(gemtuzumab?ozogamicin)(商品名：麥羅塔(Mylotarg))等。另外，作為以上皮性實體癌作為對象的抗體藥物，對乳癌開發了Her2/neu作為靶的曲妥珠單抗(Trastuzumab)(商品名：赫賽汀(Herceptin))、以VEGF作為靶的貝伐珠單抗(bevacizumab)(商品名：阿瓦斯汀(Avastin))等。然而，到2008年為止被認可的抗體藥物在美國有20種左右，在日本有10種左右，特別是關于實體癌被認為有效的抗體藥物尚少。因此，期望開發更有效的抗體藥物，特別是強烈期望鑒定對抗體藥物的有效性影響大的靶分子(抗原、表位)。此外，作為參與柯薩奇病毒等的感染的蛋白質，已知柯薩奇病毒-腺病毒受體(COXSACKIEVIRUS?AND?ADENOVIRUS?RECEPTOR；CXADR)。另外，關于該蛋白質，被報告了在卵巢癌和皮膚基底細胞癌中表達亢進(專利文獻1)。另一方面，在膽管癌中確認了CXADR的純合子缺失，啟示了CXADR作為癌抑制基因發揮功能(專利文獻2)。這樣，雖然有關于CXADR與癌的關聯的報告，但是現狀是CXADR是貢獻于癌的發病、惡性化等，還是對癌發揮抑制作用尚未確定。因此，關于針對CXADR的抗體是否具有抗癌活性也尚不明。現有技術文獻專利文獻專利文獻1：國際公開第2009/100159號專利文獻2：日本特開2005-304497號公報
技術實現思路
專利技術所要解決的課題本專利技術是鑒于上述現有技術中存在的課題而做出的，其目的是，發現對癌的治療等有效的靶分子，提供與該分子特異性地結合的抗體、以及以該抗體作為有效成分的藥物組合物。用于解決課題的方法雄激素依賴性的人前列腺癌細胞株LNCaP在免疫缺陷小鼠中的腫瘤發生性低，難以應用于動物實驗中的異種移植。另一方面，本專利技術者們所建立的LNCaP細胞亞株：LNCaP-CR在免疫缺陷小鼠中的腫瘤發生性極高，作為雄激素依賴性的人前列腺癌細胞的異種移植模型是有用的(參照“Kawada，M.等，Cancer?Lett.，2006年，242卷，46～52頁”，“Kawada，M.等，Cancer?Sci.、2007年、98卷、350～356頁”)。因此，本專利技術者們考慮，能夠通過將在LNCaP-CR細胞中表達的膜蛋白質和/或分泌蛋白質、與在作為親本株的LNCaP細胞中表達的膜蛋白質和/或分泌蛋白質進行比較，來發現參與癌的惡性化的因子，從而實施了作為特異性地分離鑒定膜蛋白質和分泌蛋白質技術的信號序列捕獲(SST-REX)法。其結果作為在LNCaP細胞中不表達、在LNCaP-CR細胞中表達的蛋白質，成功地鑒定出CXADR。接著，本專利技術者們制作了針對該蛋白質的單克隆抗體，研究了對各種癌細胞株的結合性、體外和體內的抗癌活性、ADCC活性和CDC活性。其結果發現，與存在于源自人的CXADR蛋白質的181～230位的表位結合的抗體在移植了LNCaP-CR細胞的小鼠、特別是在作為相同位置的前列腺移植了LNCaP-CR細胞的小鼠中具有優異的抗癌活性。另外發現，所述抗體不僅對前列腺癌發揮抗癌活性，對胰癌和大腸癌也發揮抗癌活性。進而確認了，該體內的癌抑制效果通過所述抗體與CXADR結合而發揮，即對CXADR蛋白質表達的癌，所述抗體能夠發揮癌抑制效果。另外還明確了，所述抗體具有ADCC活性和CDC活性。進而，本專利技術者們成功地確定了所述抗體的輕鏈和重鏈的可變區的結構，最終完成了本專利技術。即，本專利技術涉及與存在于源自人的CXADR蛋白質的181～230位的表位結合的抗體、以及以該抗體作為有效成分的藥物組合物等，更詳細地，提供以下(1)～(7)。(1)抗體，與存在于源自人的CXADR蛋白質的181～230位的表位結合。(2)根據(1)所述的抗體，具有下述(a)～(d)所述的任一特征，(a)具有：包含序列號1～3所記載的氨基酸序列或在該氨基酸序列的至少任一者中替換、缺失、添加和/或插入了1個或多個氨基酸的氨基酸序列的輕鏈可變區，以及包含序列號6～8所記載的氨基酸序列或在該氨基酸序列的至少任一者中替換、缺失、添加和/或插入了1個或多個氨基酸的氨基酸序列的重鏈可變區本文檔來自技高網...

【技術保護點】
抗體，與存在于源自人的CXADR蛋白質的181～230位的表位結合。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2012.05.11 JP 2012-1099021.抗體，與存在于源自人的CXADR蛋白質的181～230位的表位結
合。
2.根據權利要求1所述的抗體，具有下述(a)～(d)所述的任一特征，
(a)具有：包含序列號1～3所記載的氨基酸序列或在該氨基酸序列的
至少任一者中替換、缺失、添加和/或插入了1個或多個氨基酸的氨基酸序
列的輕鏈可變區，以及包含序列號6～8所記載的氨基酸序列或在該氨基酸
序列的至少任一者中替換、缺失、添加和/或插入了1個或多個氨基酸的氨
基酸序列的重鏈可變區，
(b)具有：包含序列號5所記載的氨基酸序列或從該氨基酸序列除去
了信號序列的氨基酸序列、或在這些氨基酸序列的至少任一者中替換、缺
失、添加和/或插入了1個或多個氨基酸的氨基酸序列的輕鏈可變區，以及
包含序列號10所記載的氨基酸序列或從該氨基酸序列除去了信號序列的
氨基酸序列、或在這些氨基酸序列的至少任一者中替換、缺失、添加和/
或插入了1個或多個氨基酸的氨基酸序列的重鏈可變區，
(c)具有：包含序列號11～13所記載的氨基酸序列或在該氨基酸序列
的至少任一者中替換、缺失、添加和/或插入了1個或多個氨基酸的氨基酸
序列的輕鏈可變區，以及包含序列號16～18所記載的氨基酸序列或在該氨
基酸序列...

【專利技術屬性】
技術研發人員：川田學，井上裕幸，坂本修一，梶川益紀，杉浦雅仁，浦野咲子，
申請(專利權)人：公益財團法人微生物化學研究會，株式會社醫學生物學研究所，
類型：發明
國別省市：日本;JP