α-淀粉酶組合變體制造技術

本發明專利技術公開了與α-淀粉酶變體相關的組合物和方法。所述α-淀粉酶變體可用于例如淀粉液化和糖化，用于在衣物洗滌、餐具洗滌和其它應用中清潔含淀粉的污漬，用于紡織物加工(例如退漿)，用于動物飼料中以改善消化率，以及用于烘培和釀造。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】α-淀粉酶組合變體相關專利申請的交叉引用本專利申請要求2013年3月11日提交的美國臨時申請案USSN61/776,699、2013年11月20日提交的USSN61/906,617和2013年11月21日提交的USSN61/907,131的優先權，其全文以引用方式并入本文中。
本專利技術公開了與包含多種可組合突變的α-淀粉酶變體相關的組合物和方法。該α-淀粉酶變體可用于例如淀粉液化和糖化、清潔含淀粉的污漬、紡織物退漿、烘培、和釀造。
技術介紹
淀粉由直鏈淀粉(15-30％w/w)和支鏈淀粉(70-85％w/w)的混合物組成。直鏈淀粉由α-1,4-鍵連接的葡萄糖單元的直鏈組成，其分子量(MW)為約60,000至約800,000。支鏈淀粉是每24-30個葡萄糖單元包含α-1,6分支點的支鏈聚合物；其分子量(MW)可高達1億。當前通過酶催化方法由淀粉制備濃縮右旋糖糖漿形式的糖，該方法包括：(1)用α-淀粉酶液化固體淀粉成平均聚合度為約7-10的糊精(降低粘度)，以及(2)將所得的液化淀粉(即淀粉水解產物)用淀粉葡糖苷酶(也稱為葡糖淀粉酶或GA)糖化。所得的糖漿具有高葡萄糖含量。隨后將商業化生產的葡萄糖漿用酶促方法同分異構成右旋糖/果糖混合物(被稱為異糖漿)。所得的糖漿也可用微生物(諸如酵母)發酵以制備商業產品，例如包括乙醇、檸檬酸、乳酸、琥珀酸、衣康酸、谷氨酸一鈉、葡糖酸鹽、賴氨酸、其它有機酸、其它氨基酸、以及其它生化物品。發酵與糖化可同時進行(即SSF處理)以實現更經濟和更高效。α-淀粉酶通過隨機剪切內部α-1,4-糖苷鍵來水解淀粉、糖元和相關的多糖。α-淀粉酶，特別是來自桿菌(Bacilli)的α-淀粉酶，已被用于多種不同的目的，包括淀粉液化和糖化、紡織物退漿、在造紙和紙漿工業中的淀粉改性、釀造、烘培、制備用于食品工業的糖漿、制備用于發酵過程的原料以及在動物飼料中增加消化率。這些酶也可用于在餐具洗滌和衣物洗滌方法中去除含淀粉的污垢和污漬。多個出版物已經描述了α-淀粉酶中的突變。然而，并非所有突變在不同分子中產生相同的效應，并且并非所有突變都能組合。此外，許多突變產生的具有某些期望的特性的分子是以其它性能為代價的。對穩健工程化的α-淀粉酶分子的需求仍然存在。
技術實現思路
本專利技術的組合物和方法涉及多種淀粉酶變體多肽及其使用方法。本專利技術的組合物和方法的方面和實施例方案匯總在下列單獨編號的段落中：1.在一個方面，提供了親本α-淀粉酶的重組變體，其包含：在對應于E187或S241的氨基酸殘基處的突變；以及在對應于選自N126、Y150、F153、L171、T180、和I203的氨基酸殘基的氨基酸殘基處的至少一個突變；其中所述α-淀粉酶變體或親本α-淀粉酶相對于SEQIDNO:1(其用于編號)具有至少60％的氨基酸序列同一性；并且其中所述變體與親本α-淀粉酶或參考α-淀粉酶(與α-淀粉酶變體差別僅為不存在所述突變)相比具有增強的熱穩定性、洗滌劑穩定性、淀粉液化活性、和/或清潔性能。2.在一些實施方案中，根據段落1所述的α-淀粉酶變體包含在對應于N126、Y150、F153、L171、和I203的氨基酸殘基處的至少兩個突變，使用SEQIDNO:1來編號。3.在一些實施方案中，根據前述段落中任一個所述的α-淀粉酶變體還包含在對應于R178、G179、T180、和G181的至少一個氨基酸殘基處的缺失，使用SEQIDNO:1來編號。4.在一些實施方案中，根據前述段落中任一個所述的α-淀粉酶變體還包含對應于R178和G179、或者T180和G181的氨基酸殘基的缺失。5.在一些實施方案中，根據前述段落中任一個所述的α-淀粉酶變體還包含在對應于G476和/或G477的氨基酸殘基處的突變，使用SEQIDNO:1來編號。6.在一些實施方案中，根據前述前述段落中任一個所述的α-淀粉酶變體還包含在對應于選自E132、Q167、T180、和A277的氨基酸殘基的氨基酸殘基中的突變，使用SEQIDNO:1來編號。7.在一些實施方案中，根據前述段落中任一個所述的α-淀粉酶變體還包含在對應于選自R458、T459、和D460的氨基酸殘基的氨基酸殘基中的突變，使用SEQIDNO:1來編號。8.在一些實施方案中，根據前述段落中任一個所述的α-淀粉酶變體還包含在對應于T180的氨基酸殘基中的突變，使用SEQIDNO:1來編號。9.在一些實施方案中，根據前述段落中任一個所述的α-淀粉酶變體還包含在對應于N205的氨基酸殘基中的突變，使用SEQIDNO:3來編號。10.在一些實施方案中，根據前述段落中任一個所述的α-淀粉酶變體還包含在對應于選自T333G、A335S、和Q337E的氨基酸殘基的氨基酸殘基中的突變，使用SEQIDNO:3來編號。11.在一些實施方案中，根據前述段落中任一個所述的α-淀粉酶變體還包含在對應于選自下列的氨基酸殘基位置的氨基酸殘基中的突變，使用SEQIDNO:1來編號：6，7，8，11，14，15，20，L1，23，26，27，28，37，38，39，40，42，45，46，48，49，50，51，52，53，54，58，61，62，68，70，71，72，73，79，80，81，82，84，85，87，88，89，92，93，94，95，96，97，98，101，108，111，112，113，114，115，116，117，118，120，122，123，124，126，127，129，130，131，132，133，134，136，137，138，140，142，143，144，147，148，149，150，151，152，153，154，155，156，158，159，165，167，168，170，171，172，175，176，177，180，181，182，187，190，191，193，199，200，201，203，206，208，210，211，212，214，215，216，219，221，223，225，226，227，235，238，239，240，241，242，243，245，246，247，248，249，250，252，253，254，256，257，258，260，261，262，266，267，268，269，270，271，273，276，277，279，280，282，284，285，286，288，296，299，300，301，302，303，304，307，308，310，311，312，313，316，317，318，320，321，325，327，335，338，342，348，349，352，356，357，360，362，363，368，369，377，381，382，383，384，385，388，390，392，394，395，396，397，398，400，401，402，403，404，405，407，408，410，414，415，416，418，419，420，421，422，423，424，426，428，429，430，431，434，435，436，439，441，442，444，445，446，447，448，449，450，451，454，4本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種親本α?淀粉酶的重組變體，其包含：在對應于E187或S241的氨基酸殘基處的突變；和在對應于選自N126、Y150、F153、L171、T180、和I203的氨基酸殘基的氨基酸殘基處的至少一個突變；其中所述α?淀粉酶變體或所述親本α?淀粉酶相對于SEQ?ID?NO:1具有至少60％的氨基酸序列同一性，使用SEQ?ID?NO:1來編號；并且其中所述變體與所述親本α?淀粉酶或參考α?淀粉酶相比具有增強的熱穩定性、洗滌劑穩定性、淀粉液化活性、和/或清潔性能，所述參考α?淀粉酶與所述α?淀粉酶變體的差別僅為不存在所述突變。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2013.03.11 US 61/776,699;2013.11.20 US 61/906,617;1.一種親本α-淀粉酶的重組變體，其包含突變E187P+I203Y+G476K并缺失氨基酸殘基R178和G179，或突變E187P+I203Y+G476K+R458N+T459S+D460T并缺失氨基酸殘基R178和G179，其中所述親本α-淀粉酶如SEQIDNO:1所示并使用SEQIDNO:1來編號；并且其中所述變體與所述親本α-淀粉酶或參考α-淀粉酶相比具有增強的熱穩定性、洗滌劑穩定性、淀粉液化活性、和/或清潔性能，所述參考α-淀粉酶與所述α-淀粉酶變體的差別僅為不存在所述突變。2.一種組合物，其包含根據權利要求1所述的α-淀粉酶變體。3.根據權利要求2所述的組合物，其中所述組合物有效用于從餐具或紡織物中去除含淀粉的污漬。4.根據權利要求3所述的組合物，其中所述所述紡織物是衣物。5.根據權利要求2或3所述的組合物，其還包含表面活性劑。6.根據權利要求2或3所述的組合物，其中所述組合物是洗滌劑組合物。7.根據權利要求2或3所述的組合物，其中所述組合物是衣物洗滌劑或衣物洗滌劑添加劑。8.根據權利要求2或3所述的組合物，其中所述組合物是手動餐具洗滌劑或自動餐具洗滌劑。9.根據權利要求2或3所述的組合物，其還包含一種或多種其他的酶，所述其他的酶選自蛋白酶、半纖維素酶、纖維素酶、脂解酶、木聚糖酶、酯酶、過水解酶、角質酶、果膠酶、果膠酸裂合酶、甘露聚糖酶、還原酶、氧化酶、木質酶、支鏈淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、麥拉寧酶、β-葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明質酸酶、軟骨素酶、阿馬多里酶、葡糖淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、植酸酶、異構酶、轉移酶、以及根據權利要求1所述的淀粉酶之外的淀粉酶。10.根據權利要求9所述的組合物，其中所述蛋白酶是角蛋白酶、金屬蛋白酶。11.根據權利要求9所述的組合物，其中所述氧化酶是過氧化物酶、酚氧化酶、脂氧合酶。12.根據權利要求11所述的組合物，其中所述酚氧化酶是漆酶。13.根據權利要求9所述的組合物，其中所述脂解酶是金屬脂解酶。14.根據權利要求9所述的組合物，其中所述酯酶是脂肪酶。15.根據權利要求14所述的組合物，其中所述脂肪酶是磷脂酶。16.根據權利要求2所述的組合物，其中所述組合物用于液化淀粉。17.根據權利要求2所述的組合物，其中所述組合物用于糖化包含淀粉的組合物、用于SSF后液化、或用于無在先液化的直接SSF。18.根據權利要求2所述的組合物，其中所述組合物用于制備發酵飲料。19.根據權利要求2所述的組合物，其中所述組合物用于制備烘培的食物產品。20.根據權利要求2所述的組合物，其中所述組合物用于紡織物退漿。21.一種用于從表面去除含淀粉的污漬或污垢的方法，該方法包括：在包含有效量的根據權利要求1所述的α-淀粉酶重組變體的組合物存在下，接觸所述表面，以及使所述α-淀粉酶重組變體水解含淀粉的污漬中存在的淀粉組分以生成溶解在含水組合物中的更小的淀粉衍生分子，從而從所述表面去除所述含淀粉的污漬。22.根據權利要求21所述的方法，其中所述含水組合物還包含表面活性劑。23.根據權利要求21或22所述的方法，其中所述表面是紡織物表面或餐具表面。24.根據權利要求21或22所述的方法，其中所述組合物還包含至少一種其他的酶，所述其他的酶選自蛋白酶、半纖維素酶、纖維素酶、脂解酶、木聚糖酶、酯酶、過水解酶、角質酶、果膠酶、果膠酸裂合酶、甘露聚糖酶、還原酶、氧化酶、木質酶、支鏈淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、麥拉寧酶、β-葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明質酸酶、軟骨素酶、阿馬多里酶、葡糖淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、植酸酶、異構酶、轉移酶、以及根據權利要求1所述的淀粉酶之外的淀粉酶。25.根據權利要求24所述的組合物，其中所述蛋白酶是角蛋白酶、金屬蛋白酶。26.根據權利要求24所述的...

【專利技術屬性】
技術研發人員：L·G·卡斯康佩雷拉，D·芬南，D·E·維爾德斯，M·科爾克曼，R·R·博特，P·奧古斯丁，R·赫曼特，M·O·魯伊斯，D·范托爾，
申請(專利權)人：丹尼斯科美國公司，
類型：發明
國別省市：美國;US