本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種I型糖尿病的分子標(biāo)志物，KIAA0226L基因在I型糖尿病患者的血液中表達(dá)上調(diào)，通過檢測KIAA0226L基因的表達(dá)水平可以為I型糖尿病患者提供早期診斷，從而實現(xiàn)早發(fā)現(xiàn)早治療，降低I型糖尿病患者的死亡率。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)設(shè)及生物
，具體地設(shè)及一種I型糖尿病的分子標(biāo)志物。
技術(shù)介紹
糖尿病是W膜島素絕對或相對缺乏，而導(dǎo)致的高慢性血葡萄糖(簡稱血糖)水平為 主要特征的代謝素亂性疾病，是當(dāng)前威脅全球人類健康的最重要的非傳染性疾病之一，根 據(jù)國際糖尿病聯(lián)盟統(tǒng)計，2011年全球糖尿病患者人數(shù)已達(dá)3.7億，其中80%在發(fā)展中國家， 估計到2030年全球?qū)⒂薪?.5億糖尿病患者。2011年全球共有460萬人死于糖尿病，當(dāng)年糖 尿病的全球醫(yī)療花費達(dá)4650億美元。其中糖尿病在中國和其他發(fā)展中國家中的快速增長， 已給運(yùn)些國家的社會和經(jīng)濟(jì)發(fā)展帶來了沉重負(fù)擔(dān)。糖尿病作為常見病與多發(fā)病在我國有逐 年上升趨勢，臨床常見的多為I型和II型糖尿病。 I型糖尿病(T1DM)最常見的形式是免疫介導(dǎo)的疾病，其中的膜島素分泌β細(xì)胞被自 身免疫應(yīng)答破壞。若干遺傳和環(huán)境因素都與所述疾病的發(fā)病相關(guān)，運(yùn)設(shè)及到特異性祀向膜 島素分泌β細(xì)胞的免疫細(xì)胞對膜島的進(jìn)行性炎性浸潤。運(yùn)種病變在臨床發(fā)病前(前糖尿病） 的一段不確定時間形成并且在患者被診斷患有所述疾病之后繼續(xù)。 隨著人類基因組計劃的完成和分子遺傳學(xué)的發(fā)展，基因的研究受到廣泛重視，尋 找與疾病相關(guān)的基因成為當(dāng)前研究的熱點。越來越多的研究證實，基因在I型糖尿病的發(fā)生 發(fā)展過程中起著重要的調(diào)控作用，因此基因與I型糖尿病發(fā)病風(fēng)險的關(guān)系也備受關(guān)注。[000引目前，I型糖尿病的診斷主要依靠臨床檢查和各種輔助技術(shù)，盡管相比W往來說， 醫(yī)學(xué)技術(shù)已高度發(fā)達(dá)，但是臨床上尚無可靠的生物標(biāo)志物可W對I型糖尿病進(jìn)行風(fēng)險預(yù)測 和早期診斷。
技術(shù)實現(xiàn)思路
為了彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本專利技術(shù)的目的在于提供與I型糖尿病相關(guān)的基因標(biāo)志 物，使用基因標(biāo)志物來診斷疾病具有及時性、特異性和靈敏性，使患者在糖尿病早期就能知 曉風(fēng)險，針對風(fēng)險高低，采取相應(yīng)的預(yù)防和治療措施。 為了實現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采用如下技術(shù)方案：[000引本專利技術(shù)提供了一種ΚΙΑΑ022化基因在制備診斷I型糖尿病產(chǎn)品中的應(yīng)用。 進(jìn)一步，上面所述診斷產(chǎn)品包括:通過實時定量PCR、RT-PCR、免疫檢測、原位雜交 或忍片檢測KIAA022化基因的表達(dá)水平W診斷I型糖尿病的產(chǎn)品。 進(jìn)一步，所述用實時定量PCR診斷I型糖尿病的產(chǎn)品至少包括一對特異擴(kuò)增 KIAA0226L基因的引物；所述用RT-PCR診斷I型糖尿病的產(chǎn)品至少包括一對特異擴(kuò)增 KIAA022化基因的引物;所述用免疫檢測診斷I型糖尿病的產(chǎn)品包括:與KIAA022化蛋白特異 性結(jié)合的抗體;所述用原位雜交診斷I型糖尿病的產(chǎn)品包括：與KIAA022化基因的核酸序列 雜交的探針;所述用忍片診斷I型糖尿病的產(chǎn)品包括:蛋白忍片和基因忍片;其中，蛋白忍片 包括與KIAA022化蛋白特異性結(jié)合的抗體，基因忍片包括與KIAA022化基因的核酸序列雜交 的探針。 進(jìn)一步，所述診斷產(chǎn)品包括忍片和/或試劑盒；其中所述忍片包括基因忍片、蛋白 質(zhì)忍片;所述試劑盒包括基因檢測試劑盒和蛋白免疫檢測試劑盒。所述基因檢測試劑盒包 括SYBR Green聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體系、用于擴(kuò)增KIAA022化基因和管家基因的引物對;所述 SYBR Green聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體系包含:PCR緩沖液、dNTPs、SYBR Green巧光染料。 本專利技術(shù)提供了一種診斷I型糖尿病的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品能夠通過檢測KIAA022化基因 的表達(dá)水平來診斷I型糖尿病。 進(jìn)一步，上面所述的產(chǎn)品包括忍片、或試劑盒。其中，所述忍片包括基因忍片、蛋白 質(zhì)忍片;所述基因忍片包括固相載體W及固定在固相載體上的寡核巧酸探針，所述寡核巧 酸探針包括用于檢測KIAA022化基因轉(zhuǎn)錄水平的針對KIAA022化基因的寡核巧酸探針;所述 蛋白質(zhì)忍片包括固相載體W及固定在固相載體上的KIAA0226L蛋白的特異性抗體;所述試 劑盒包括基因檢測試劑盒和蛋白免疫檢測試劑盒；所述基因檢測試劑盒包括用于檢測 KIAA022化基因轉(zhuǎn)錄水平的試劑;所述蛋白免疫檢測試劑盒包括KIAA022化蛋白的特異性抗 體。其中，所述基因忍片可用于檢測包括KIAA022化基因在內(nèi)的多個基因（例如，與I型糖尿 病相關(guān)的多個基因）的表達(dá)水平。所述蛋白質(zhì)忍片可用于檢測包括KIAA022化蛋白在內(nèi)的多 個蛋白質(zhì)(例如與I型糖尿病相關(guān)的多個蛋白質(zhì)）的表達(dá)水平。通過將多個與I型糖尿病的標(biāo) 志物同時檢測，可大大提高I型糖尿病診斷的準(zhǔn)確率。 進(jìn)一步，上面所述試劑包括使用實時定量PCR、RT-PCR、免疫檢測、原位雜交或忍片 方法檢測KIA A 0 2 2 6 L基因表達(dá)水平過程中所需的試劑。優(yōu)選地，所述試劑包括針對 KIAA022化基因的引物和/或探針。 進(jìn)一步，所述基因檢測試劑盒包含SYBR Green聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體系、用于擴(kuò)增 KIAA022化基因和管家基因的引物對;所述SYBR Green聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體系包含:PCR緩沖 液、dNTPs、SYBR Green巧光染料。 進(jìn)一步，所述擴(kuò)增KIAA0226L基因的引物對序列如下：正向引物序列為5 ' - 了八了4批46〔44了664644-3'；反向引物序列為5'-了6了4了6446446了464464-3'；所述管家基因為 GAPDH，擴(kuò)增GAPDH的引物序列對如下：正向引物序列為5'-CTCTGGTAAAGTGGATATTGT-3' ；反 向引物序列為5 ' -GGTGGAATCATATTGGAACA-3 '。 所述基因檢測試劑盒可用于檢測包括KIAA022化基因在內(nèi)的多個基因（例如，與I 型糖尿病相關(guān)的多個基因）的表達(dá)水平。 本專利技術(shù)中與KIAA022化基因的核酸序列雜交的探針可W是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合 體、PNA或其它衍生物。所述探針的長度沒有限制，只要完成特異性雜交、與目的核巧酸序列 特異性結(jié)合，任何長度都可W。所述探針的長度可短至25、20、15、13或10個堿基長度。同樣， 所述探針的長度可長至60、80、100、150、300個堿基對或更長，甚至整個基因。由于不同的探 針長度對雜交效率、信號特異性有不同的影響，所述探針的長度通常至少是14個堿基對，最 長一般不超過30個堿基對，與目的核巧酸序列互補(bǔ)的長度W15-25個堿基對最佳。所述探針 自身互補(bǔ)序列最好少于4個堿基對，W免影響雜交效率。 本專利技術(shù)中所述KIAA022化蛋白的特異性抗體包括單克隆抗體、多克隆抗體。所述 KIAA022化蛋白的特異性抗體包括完整的抗體分子、抗體的任何片段或修飾，例如，嵌合抗 體、3〇。乂^曰6^(曰13'）2爪等。只要所述片段能夠保留與1(^4022化蛋白的結(jié)合能力即可。用 于檢測蛋白質(zhì)水平的抗體的制備是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且本專利技術(shù)可w使用任何方法 來制備所述抗體，如所述的片段可W通過化學(xué)法從頭合成或利用重組DNA技術(shù)合成。 在本專利技術(shù)的上下文中/'KIAA022化基因"包括人KIAA0226L基因 W及人KIAA0226L 基因的任何功能等同物的多核巧酸。KIAA022化基因包括與目前國際公共核酸序列數(shù)據(jù)庫 GeneBank中KIAA022化基因（NC_000013.11)DNA序列具有70%W上同源性，且編碼相同功能 蛋白質(zhì)的DNA序列； 優(yōu)選地，KIAA022化基因的編碼序本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點】
KIAA0226L基因在制備診斷I型糖尿病產(chǎn)品中的應(yīng)用。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：宋宏濤，肖楓，
申請(專利權(quán))人：北京泱深生物信息技術(shù)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：北京;11
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