一種苯并大環內酰胺吲哚生物堿及其在制備抗補體藥物中的用途制造技術

本發明專利技術屬中藥制藥領域，涉及一種苯并大環內酰胺吲哚生物堿青黛堿C及其在制備抗補體藥物中的用途。本發明專利技術從青黛粉末中分離得到一個結構新穎獨特的苯并大環內酰胺吲哚生物堿青黛堿C，其由兩個完全相同的3-羰基吲哚螺合在苯并內酰胺大環上；本發明專利技術采用現代藥理實驗證實其對補體系統經典途徑和旁路途徑激活均有較強的抑制作用，其CH50和AP50值分別為0.018±0.004mg/ml、0.042±0.014mg/ml。所述化合物可用于制備補體抑制劑。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬中藥制藥領域，涉及青黛中一種苯并大環內酰胺吲哚生物堿及其在制備抗補體藥物中的用途。
技術介紹
研究公開了補體系統的過度激活會引發系統性紅斑狼瘡(SLE)、類風濕性關節炎(RA)、急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)等多種重大疾病?？寡a體藥物研究多年來一直是世界藥學研究的熱點和重點。然而目前對此類疾病尚缺乏較為理想的治療藥物，因此臨床上急需高效、低毒、專一的新型補體抑制劑。從天然產物中研究開發補體抑制劑是近年來一個受到越來越多關注的重要研究領域，其具有成本低、毒性低等特點。國內外學者已從包括海洋生物在內的多種天然產物中分離得到多種具有補體系統抑制作用的單體化合物，為抗補體藥物的研究與開發提供了廣闊的前景。青黛(Indigo Naturalis)為爵床科植物馬藍Baphicacanthus cusia(Nees)Bremek.、蓼科植物蓼藍Polygonum tinctorium Ait.或十字花科植物菘藍Isatisindigotica Fort.的葉或莖葉經加工制得的干燥粉末或團塊。其性咸味寒，歸肝經?？汕鍩峤舛?、涼血消斑、瀉火定驚。用于溫毒發斑、血熱吐衄、胸痛咳血、口瘡、痄腮、喉痹、小兒驚癇?，F代藥理研究表明，青黛具有抗菌、抗炎、抗腫瘤、抗氧化、治療銀屑病等作用，其活性成分主要是生物堿類成分，以吲哚生物堿二聚體靛玉紅、靛藍等為主。本專利技術擬提供一種苯并大環內酰胺吲哚生物堿的新化合物及其在制備抗補體藥物中的用途。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種苯并大環內酰胺吲哚生物堿青黛堿C及其在制備抗補體藥物中的用途。本專利技術提供的新結構化合物苯并大環內酰胺吲哚生物堿，命名為青黛堿C，由兩個完全相同的3-羰基吲哚螺合在苯并內酰胺大環上，具有以下化學結構：本專利技術應用現代藥理篩選方法，對中藥青黛中抗補體活性物質進行研究，從青黛的乙醇提取物分離得到一個苯并大環內酰胺吲哚生物堿類化合物青黛堿C，經活性測試，證實其對補體系統的經典途徑和旁路途徑激活均有較強的抑制作用。本專利技術所述的化合物通過下述方法制備：取青黛粉末，乙醇回流提取，合并提取液并濃縮得浸膏，加水混懸，分別以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，合并萃取液并濃縮至干。將乙酸乙酯萃取部位經硅膠柱色譜分離、Sephadex LH-20柱色譜、反相HPLC等手段純化，分離得到化合物青黛堿C。所述化合物青黛堿C：黃色粉末,分子式C24H17N3O4,。ESI-MS m/z:434[M+Na]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δH:7.59(1H,d,J＝7.7Hz),7.46(1H,dd,J＝8.3Hz,7.2Hz),7.44(1H,d,J＝7.8Hz),7.26(1H,dd,J＝8.3Hz,7.2Hz),7.14(1H,dd,J＝8.1Hz,7.1Hz),6.87(1H,d,J＝8.2Hz),6.84(1H,d,J＝8.2Hz),6.83(1H,dd,J＝7.8Hz,7.2Hz),6.69(1H,d,J＝8.1Hz),6.67(1H,dd,J＝8.3Hz,7.2Hz),6.53(1H,d,J＝8.3Hz),3.31(1H,d,J＝16.4Hz),2.71(1H,d,J＝16.4Hz).13C-NMR(100MHz,CDCl3)δC:70.3(C-2),202.9(C-3),118.6(C-3a),124.6(C-4),119.1(C-5),138.5(C-6),112.7(C-7),163.7(C-7a),36.3(C-8),172.8(C-9),128.8(C-11),154.6(C-12),116.1(C-13),130.1(C-14),119.4(C-15),120.5(C-16),83.6(C-2'),199.8(C-3'),118.2(C-3a'),123.9(C-4'),118.7(C-5'),138.2(C-6'),111.3(C-7'),162.0(C-7a').。上述青黛堿C經過體外抗補體活性試驗測定，結果表明其對補體系統的經典途徑和旁路途徑激活均有較強的補體抑制作用，其CH50和AP50值分別為其CH50和AP50值分別為0.018±0.004、0.042±0.014mg/ml。陽性對照肝素CH50和AP50值分別為0.026±0.005mg/ml、0.054±0.016mg/ml。所述的苯并大環內酰胺吲哚生物堿類化合物青黛堿C可用于制備抗補體藥
物。附圖說明圖1是青黛中青黛堿C的提取分離流程圖。具體實施方式實施例1制備青黛堿C取青黛粉末5kg，95％乙醇回流提取3次(50L×3)，每次2h，合并提取液并濃縮得浸膏0.25kg，加水(4L)混懸，分別以等體積石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取5次，合并萃取液并濃縮至干，得乙酸乙酯萃取物50g。將乙酸乙酯萃取部位經硅膠(200-300目)柱色譜分離，依次以二氯甲烷-甲醇(50:1-0:1)梯度洗脫，得到8個流份(Fr.1-8)，其中流份Fr.5(4g)再經硅膠柱色譜(二氯甲烷-甲醇，30:1,20:1，10:1，5:1，3:1，1:1)、Sephadex LH-20柱色譜(氯仿-甲醇，1:1)和反相HPLC(甲醇-水，20:80-80:20梯度洗脫)等手段純化，分離得到化合物青黛堿C。所述化合物青黛堿C：黃色粉末,分子式C24H17N3O4,。ESI-MS m/z:434[M+Na]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δH:7.59(1H,d,J＝7.7Hz),7.46(1H,dd,J＝8.3Hz,7.2Hz),7.44(1H,d,J＝7.8Hz),7.26(1H,dd,J＝8.3Hz,7.2Hz),7.14(1H,dd,J＝8.1Hz,7.1Hz),6.87(1H,d,J＝8.2Hz),6.84(1H,d,J＝8.2Hz),6.83(1H,dd,J＝7.8Hz,7.2Hz),6.69(1H,d,J＝8.1Hz),6.67(1H,dd,J＝8.3Hz,7.2Hz),6.53(1H,d,J＝8.3Hz),3.31(1H,d,J＝16.4Hz),2.71(1H,d,J＝16.4Hz).13C-NMR(100MHz,CDCl3)δC:70.3(C-2),202.9(C-3),118.6(C-3a),124.6(C-4),119.1(C-5),138.5(C-6),112.7(C-7),163.7(C-7a),36.3(C-8),172.8(C-9),128.8(C-11),154.6(C-12),116.1(C-13),130.1(C-14),119.4(C-15),120.5(C-16),83.6(C-2'),199.8(C-3'),118.2(C-3a'),123.9(C-4'),118.7(C-5'),138.2(C-6'),111.3(C-7'),162.0(C-7a').。實施例2體外抗補體經典途徑試驗取補體(豚鼠血清)0.04ml，加入巴比妥緩沖液(BBS)配制成1:10的溶液，用BBS對倍稀釋成1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640和1:1280的溶液，
取1:1000溶血素、2％羊紅細胞(SRBC)各0.1ml及各濃度補本文檔來自技高網...

【技術保護點】
具有如下化學結構的苯并大環內酰胺吲哚生物堿類化合物，所述化合物命名為青黛堿C，由兩個完全相同的3?羰基吲哚螺合在苯并內酰胺大環上。

【技術特征摘要】
1.具有如下化學結構的苯并大環內酰胺吲哚生物堿類化合物，所述化合物命名為青黛堿C，由兩個完全相同的3-羰基吲哚螺合在苯并內酰胺大環上。2.按權利要求1所述的苯并大環內酰胺吲哚生物堿類化合物，其特征在于，通過下述方法制備：取中藥青黛粉末，95％乙醇回流提取3次，每次2h，合并提取液并濃縮得浸膏，加水混懸，分別以等體積石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取5次，合并萃取液并濃縮至干，得乙酸乙酯萃取物；將乙酸乙酯萃取部位經硅膠，200-300目，柱色譜分離，依次以二氯甲烷-甲醇，50:1-0:1，梯度洗脫，得到8個流份，Fr.1-8，其中流份Fr.5再經...

【專利技術屬性】
技術研發人員：陳道峰，范明松，黃成鋼，
申請(專利權)人：復旦大學，
類型：發明
國別省市：上海;31