一種EZH2蛋白的表位肽及其應用制造技術

本發明專利技術提供了一種EZH2表位肽，以及所述表位肽的應用。所述表位肽含有1)YMCSFLFNL(SEQ?ID?No.1)；或者2)序列1)經過取代、缺失、或添加一個或多個氨基酸、且具有EZH2抗原表位肽功能的氨基酸序列。本發明專利技術EZH2表位肽，該EZH2表位肽能夠誘導出EZH2?CTLs，在體外試驗中有明確殺傷HLA?A0201+骨髓瘤細胞作用，并且對正常造血細胞沒有殺傷，可以作為靶點達到體內/體外殺傷骨髓瘤細胞的目的。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種肽，尤其涉及一種EZH2-CTL表位肽及其應用。
技術介紹
多發性骨髓瘤是造血系統來源于B細胞的惡性腫瘤，在美國多發性骨髓瘤是排在非霍奇金淋巴瘤之后發病率第二的血液系統惡性腫瘤，它占所有腫瘤的1％及血液系統惡性腫瘤的13％。多發性骨髓瘤是由漿細胞在骨髓內的惡性克隆性增殖并侵潤引起，最終導致高丙種球蛋白血癥、免疫機能下降及各靶器官損害。對于大多數患者而言這種疾病是無法治愈的。接受常規化療患者的中位生存在3-4年，而在接受自體外周血造血干細胞移植后，有50％的患者可以達到完全緩解，這些患者的中位生存可以延長到5-7年。但是，絕大部分患者最終會復發。目前認為這些患者復發的根源是因為體內存在微小殘留病灶，因此，需要一種有效的方法，能使接受化療或自體造血干細胞移植之后患者體內的微小殘留病灶被有效清除。免疫治療就是一種非常合適的選擇。骨髓瘤細胞分泌的獨特型抗原是一種腫瘤特異性抗原。有學者用這種獨特型抗原給多發性骨髓瘤患者接種以進行免疫治療，但是這種治療療效讓人失望，一部分原因被歸咎于這種獨特型抗原的免疫原性不夠強。因此，我們迫切的需要發現一種大部分患者共有的新型的腫瘤抗原來改善免疫治療對多發性骨髓瘤的療效。理想的腫瘤抗原應該在不同起源的腫瘤細胞表明表達，在正常組織中低表達或者不表達，而且在腫瘤細胞的生長及生存中不可或缺，這樣腫瘤細胞才不可能通過不表達或者下調表達該抗原以逃避免疫攻擊。免疫治療一直是醫學領域研究的熱點，眾多研究者尋找到許多多發性骨髓瘤的靶點，比如熱休克蛋白(HSP)、未折疊蛋白(XBP1)及CD138+等，但這些靶點都有各自的局限性，比如CD138+理論上表達于所有骨髓瘤細胞表面，但是近期的一些研究卻認為，骨髓瘤干細胞可能存在于一群CD138-的細胞中，而XBP1及Hsp在患者中的表達率也無法達到100％。這就需要我們不斷尋找新的骨髓瘤治療靶點，以最終達到個體化治療的目的，即：對于每位患者檢測其體內各種腫瘤抗原的表達情況，根據其強弱選擇合適的靶點，以達到最佳的治療效果，這種個體化的有差異的治療也許是今后腫瘤免疫治療的發展方向。
技術實現思路
本專利技術提供了一種EZH2表位肽，以及所述表位肽的應用。本專利技術第一個方面是提供一種EZH2表位肽，所述表位肽含有、并優選組成為如下序列：1)YMCSFLFNL(SEQIDNo.1)；或者2)序列1)經過取代、缺失、或添加一個或多個氨基酸、且具有EZH2抗原表位肽功能的氨基酸序列。本專利技術第二個方面是提供所述EZH2表位肽的應用，所說應用包括制備藥物、疫苗中的應用。其中，所述藥物或疫苗以所述EZH2表位肽為作用靶點。其中，所述藥物或疫苗為治療/預防腫瘤的藥物。所述腫瘤優選為至少包括前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌及血液腫瘤(如淋巴瘤和骨髓瘤等)。更優選地，所述藥物為治療骨髓瘤和/或血液腫瘤的藥物。其中，所述疫苗為預防骨髓瘤和/或血液腫瘤的疫苗。其中，所述藥物和/或疫苗還可以包括佐劑、輔料。在本專利技術一種優選實施例中，所述EZH2表位肽誘導的CTL細胞作為藥物的全部或部分活性成分。本專利技術還提供一種所述EZH2表位肽誘導的CTL細胞(EZH2-CTLs)。本專利技術提供了一種EZH2表位肽，該EZH2表位肽能夠誘導出EZH2-CTLs，在體外試驗中有明確殺傷HLA-A0201+骨髓瘤細胞作用，并且對正常造血細胞沒有殺傷。附圖說明圖1EZH2肽段與T2細胞結合力預實驗結果，A為EZH2肽段與其他肽對T2細胞結合力對比預實驗結果，B為EZH2肽段與其他肽對T2細胞結合穩定性預實驗結果；圖2為健康供者及患者外周血中EZH2-CTLs水平測定；圖3為T細胞增殖實驗；圖4為乳酸脫氫酶釋放試驗檢測EZH2-CTL對靶細胞殺傷作用；圖5為EZH2-CTLs細胞殺傷骨髓瘤細胞時的脫顆粒作用。具體實施方式EZH2蛋白氨基酸序列(SEQIDNo.3)，Genbank登錄號為：AAC51520.1，如下所述：mgqtgkksekgpvcwrkrvkseymrlrqlkrfrradevksmfssnrqkilerteilnqewkqrriqpvhiltsvsslrgtrecsvtsdldfptqviplktlnavasvpimyswsplqqnfmvedetvlhnipymgdevldqdgtfieeliknydgkvhgdrecgfindeifvelvnalgqyndddddddgddpeereekqkdledhrddkesrpprkfpsdkifeaissmfpdkgtaeelkekykelteqqlpgalppectpnidgpnaksvqreqslhsfhtlfcrrcfkydcflhpfhatpntykrkntetaldnkpcgpqcyqhlegakefaaaltaeriktppkrpggrrrgrlpnnssrpstptinvleskdtdsdreagtetggenndkeeeekkdetsssseansrcqtpikmkpnieppenvewsgaeasmfrvligtyydnfcaiarligtktcrqvyefrvkessiiapapaedvdtpprkkkrkhrlwaahcrkiqlkkdgssnhvynyqpcdhprqpcdsscpcviaqnfcekfcqcssecqnrfpgcrckaqcntkqcpcylavrecdpdlcltcgaadhwdsknvsckncsiqrgskkhlllapsdvagwgifikdpvqknefiseycgeiisqdeadrrgkvydkymcsflfnlnndfvvdatrkgnkirfanhsvnpncyakvmmvngdhrigifakraiqtgeelffdyrysqadalkyvgieremeip本專利技術提供了兩種EZH2表位肽：YMCSFLFNL(SEQIDNo.1)、SQADALKYV(SEQIDNo.2)。表1，EZH2表位肽及其與人HLA-A0201親和力預測積分表1中：a：NIHBIMAShttp://www-bimas.cit.nih.gov/molbio/hla_bindb：SYFPEITHIhttp://www.syfpeithi.de/本專利技術選取合成了兩條HLAA0201陽性肽HIV-1pol肽段(序列：ILKEPVHGV)、流感病毒基質蛋白肽段(序列：GILGFVFTL)作為本實驗的陽性對照。T2細胞表位肽結合親和及穩定性實驗1)T2細胞親和實驗收集T2細胞，用4℃的無菌PBS離心洗滌三次，加入無血清1640培養基，2×105/孔細胞接種于24孔細胞培養板中，設立實驗組及對照組，每組重復三個副孔，將未加肽刺激的T2細胞作為空白對照，每孔加入相應的候選肽段及對照肽段(終濃度50uM)，同時加入β2微球蛋白(終濃度2.5ug/ml)，將細胞置于37℃，5％CO2培養箱中孵育18h，再次收集細胞，4℃、PBS洗滌三次，加入FITC標記的HLA-A0201單克隆抗體BB7.2(2ul/孔)，4℃避光孵育15分鐘，4℃、PBS洗滌3次，流式細胞儀檢測平均熒光強度。用熒光指數(FI，熒光系數)作為衡量親和力指標，熒光系數>1的表位肽被認為與HLA-A0201分子本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種EZH2表位肽，其特征在于，所述表位肽含有如下序列：1)YMCSFLFNL；或者2)序列1)經過取代、缺失、或添加一個或多個氨基酸、且具有EZH2抗原表位肽功能的氨基酸序列。

【技術特征摘要】
1.一種EZH2表位肽，其特征在于，所述表位肽含有如下序列：1)YMCSFLFNL；或者2)序列1)經過取代、缺失、或添加一個或多個氨基酸、且具有EZH2抗原表位肽功能的氨基酸序列。2.根據權利要求1所述的EZH2表位肽，其特征在于，所述表位肽為YMCSFLFNL。3.一種權利要求1所述EZH2表位肽的應用，其特征在于，所說應用包括制備藥物、疫苗中的應用。4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述藥物或疫苗以所述EZH2表位肽為作用靶點。5.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述藥物或疫苗為治療\...

【專利技術屬性】
技術研發人員：張文皓，郝思國，陶榮，
申請(專利權)人：上海交通大學醫學院附屬新華醫院，
類型：發明
國別省市：上海;31