Naucleamide G在制備抗炎藥物中的應用制造技術

本發明專利技術涉及醫藥技術領域，具體為一種從膽木中分離得到的新化合物，命名為naucleamide?G，在制備抗炎藥物中的用途。Naucleamide?G能夠顯著地抑制LPS刺激的RAW?264.7細胞中炎癥因子IL?1β和TNF?α的生成，同時也能抑制IL?1β和TNF?α?mRNA的表達；抗炎機制研究表明，naucleamide?G能夠抑制RAW?264.7細胞中LPS激活的NF?κB和MAPK信號通路。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于醫藥
，具體涉及一種從植物膽木莖中分離得到的新生物堿苷類化合物NaucleamideG在制備抗炎藥物中的應用。
技術介紹
抗炎藥物一般是通過調節對炎癥具有重要作用的促炎性因子(TNF-α、IL-1β、IL-6等)的水平，從而發揮其抗炎作用。關于抗炎機制方面的研究，文獻對很多信號通路在炎癥方面的作用進行了描述(GuhaM，MackmanN.LPSinductionofgeneexpressioninhumanmonocytes.CellSignal.2001，13：85-94)，其中，核因子-κB(NF-κB)與絲裂原激活的蛋白激酶(MAPK)是與炎癥相關的兩條重要通路。研究表明，NF-κB主要是通過IκB激酶(IKK)介導的IκB-α的磷酸化與降解而激活的；在MAPK信號通路中，ERK、JNK和p38是與炎癥關系密切的三個亞族，也被認為是抗炎藥物作用的重要靶點。膽木(Naucleaofficinalis)為茜草科烏檀屬植物，分布于我國的海南、廣西和廣東一帶，其莖、皮均可入藥，性味苦寒，具有清熱解毒，消腫止痛之功效。我國南方民間常用于感冒發熱、肺炎、腸炎、痢疾等病的治療(《中華本草》，1999，6：456)。同時，膽木也是一味黎族醫學中常用的植物藥，收載于《黎族醫藥》。目前，國內有“膽木注射液”和“膽木浸膏片”兩種中藥制劑，臨床用于急性扁桃炎、急性咽炎、急性結膜炎和上呼吸道感染。文獻報道膽木中主要含有生物堿、五環三萜等多種化學成分，以生物堿類成分居多(宣偉東.中藥膽木和云南狗牙花活性成分研究，復旦大學，2005；胡欣.烏檀化學成分分離分析與相關成分活性、藥動學研究.沈陽藥科大學，2007；孫靜勇.膽木和山香圓化學成分及其生物活性成分研究.山東大學，2008)。膽木制劑的主要工藝過程是水煎醇沉，其制劑中活性物質尚不明確。專利技術人前期研究了膽木提取物的抗炎活性，結果表明，膽木提取物具有較好的抗炎活性(ZhaiXT，ZhangZY，JiangCH，etal.JournalofEthnopharmacology2016，183：159-165)。本專利是前期研究的繼續。專利技術人前期利用柱色譜技術結合Waters自動純化系統從膽木中分離出了一個全新的化合物，命名為NaucleamideG(朱粉霞，王靜靜，宋捷，等.膽木的化學成分研究.藥學學報.2013，48(2)：276-280)，其分子式為C25H32N2O8，分子量為488.53，結構式如下圖所示：
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供NaucleamideG在制備抗炎藥物中的應用。本專利技術的第一方面，專利技術人研究了NaucleamideG對LPS刺激的RAW264.7細胞中炎癥因子IL-1β和TNF-α的生成以及IL-1β和TNF-αmRNA表達的影響，從而研究了NaucleamideG的抗炎活性。本專利技術的第二方面，專利技術人研究了NaucleamideG在LPS刺激的RAW264.7細胞中發揮抗炎作用的分子機制。NaucleamideG經LPS刺激的RAW264.7細胞體外實驗，發現該化合物可以抑制NF-κB信號通路中IKKα、IκB-α和p65的磷酸化；此外，NaucleamideG也能夠抑制MAPK信號通路中ERK、JNK和p38的磷酸化。研究結果表明，本專利技術中的化合物NaucleamideG能夠顯著地抑制IL-1β和TNF-α生成及其mRNA的表達，對炎癥有明顯的抑制作用，因此可以用于制備抗炎藥物。此外，抗炎機制研究表明，NaucleamideG能夠抑制LPS刺激的RAW264.7細胞中的NF-κB和MAPK信號通路，從而解釋了NaucleamideG發揮抗炎作用的分子機制。附圖說明圖1是NaucleamideG對LPS刺激的RAW264.7細胞活力的影響；圖2是NaucleamideG對LPS刺激的RAW264.7細胞中炎癥因子生成的影響，其中A是NaucleamideG對IL-1β水平的影響，B是NaucleamideG對TNF-α水平的影響；圖3是NaucleamideG對IL-1β和TNF-αmRNA表達的影響，其中A是NaucleamideG對IL-1βmRNA生成的影響，B是NaucleamideG對TNF-αmRNA生成的影響；圖4是NaucleamideG對LPS刺激的RAW264.7細胞中NF-κB信號通路的抑制作用，其中A是NaucleamideG對IκB磷酸化的影響，B是NaucleamideG對p65磷酸化的影響，C是NaucleamideG對IKKα磷酸化的影響；圖5是NaucleamideG對LPS刺激的RAW264.7細胞中MAPK信號通路的抑制作用，其中A是NaucleamideG對ERK磷酸化的影響，B是NaucleamideG對JNK磷酸化的影響，C是NaucleamideG對p38磷酸化的影響。具體實施方法下面通過實施例和附圖進一步描述本專利技術，但本專利技術的實施不僅限于此。本專利技術所用試劑和原料均可購得或按文獻方法制備。實施例中未注明具體條件的試驗方法，通常按照常規條件，或按照制造廠商所建議的條件。實施例：本專利技術化合物NaucleamideG對LPS刺激的RAW264.7細胞中炎癥具有良好的抑制作用。(一)細胞培養小鼠RAW264.7巨噬細胞，購自中科院上海細胞庫。在37℃，5％CO2條件下，用含10％HyClone胎牛血清、100U/mL青霉素及100mg/mL鏈霉素的DMEM不完全培養基培養，0.5％胰酶消化傳代。所有操作均為無菌操作。(二)細胞活力實驗RAW264.7細胞接種于96孔板中(4×106個/mL)，每組六個復孔，每孔含200μL不完全高糖DMEM培養基。細胞貼壁后，用PBS洗滌細胞一遍，對照組加入不完全高糖培養基，誘導組加入含1μg/mLLPS的不完全高糖培養基，給藥組加入25、50、100和200μM的NaucleamideG溶液和含1μg/mLLPS的不完全高糖培養基，于37℃，5％CO2孵育箱中培養24h后，加20μL5mg/mLMTT培養4h，棄去培養液，細胞用PBS洗滌一遍，加150μLDMSO，微波震蕩15min，用酶標儀檢測570nm和490nm處的OD值。細胞活力＝[(OD570-OD490)sample/(OD570-OD490)control]×100％。結果如圖1所示，25～200μM濃度的NaucleamideG對細胞活性的影響與對照組和誘導組相比較無明顯差異(P＞0.05)，表明NaucleamideG沒有顯著的細胞毒性。(三)NaucleamideG對LPS刺激的RAW264.7細胞中IL-1β生成的影響本實驗通過ELISA試劑盒檢測異NaucleamideG加藥組對LPS刺激的RAW264.7細胞產生IL-1β的影響。RAW264.7細胞接種于96孔板中(4×106個/mL)，每組六個復孔，每孔含200μL不完全高糖DMEM培養基。細胞貼壁后，用PBS洗滌細胞一遍，對照組加入不完全高糖培養基，誘導組加入含1μg/mLLPS的不完全高糖培養基，給藥組加入25、50、100和200μM的NaucleamideG溶液和含1μg/mLLPS的不本文檔來自技高網...

【技術保護點】
Naucleamide?G在制備抗炎藥物中的應用。

【技術特征摘要】
1.NaucleamideG在制備抗炎藥物中的應用。2.根據權利要求1所述的在制備抗炎藥物中的應用，是通過抑制RAW264.7細胞中炎癥因子IL-1β和TNF-α及其mRNA的水平而發揮治療炎...

【專利技術屬性】
技術研發人員：朱粉霞，葉霽青，陳家全，翟小婷，張振海，
申請(專利權)人：江蘇省中醫藥研究院，
類型：發明
國別省市：江蘇;32