一種測定卷煙主流煙氣中TSNAs含量的方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開一種測定卷煙主流煙氣中煙草特有亞硝胺含量的方法，包括以下步驟：煙氣捕集、提取目標物、凈化、標準儲備液和標準工作液的配制和超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜測定的步驟。本發(fā)明專利技術(shù)與傳統(tǒng)的GC?TEA檢測方法比較，采用醋酸銨萃取，渦旋振蕩，過濾進樣的方式，簡化了前處理過程，提高了分析靈敏度。與現(xiàn)有的LC?MS/MS方法相比，本發(fā)明專利技術(shù)用渦旋振蕩法振蕩時間明顯短于超聲萃取或振蕩萃取，提取效率增加，振蕩時間縮短了6倍。本發(fā)明專利技術(shù)具有操作簡便、快速、準確、靈敏度及重復(fù)性好的優(yōu)點。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)屬于卷煙煙氣分析
，具體涉及卷煙煙氣有害成分的檢驗，特別是卷煙主流煙氣中特有TSNAs含量的測定方法。
技術(shù)介紹
煙草特有TSNAs(TSNAs)主要包括N-亞硝基降煙堿(NNN)、4-(甲基TSNAs基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)、N-亞硝基假木賊堿(NAB)和N-亞硝基新煙堿(NAT)等。國際癌癥研究機構(gòu)(IARC)、Hecht研究團隊等，加拿大政府名單中有害成分的毒性評價結(jié)果表明，且有足夠的證據(jù)認為，TSNAs中的NNK對實驗室動物有致癌性。近年，國家煙草專賣局組織實施的“卷煙危害性指標體系研究”項目也表明，在卷煙煙氣的實際環(huán)境下，對人體影響最大的7種有害化學(xué)成分指標中，NNK是其中之一。目前，卷煙主流煙氣中TSNAs的檢測方法主要有氣相色譜-熱能分析法(GC-TEA)、氣質(zhì)聯(lián)用法(GC–MS)和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS/MS)。GC-TEA法作為CORESTA推薦的主流煙氣中TSNAs的檢測方法，使用的最為廣泛。但是GC-TEA方法的樣品前處理過程復(fù)雜，選擇性較差。現(xiàn)行最為流行的LC-MS/MS法一般選取醋酸銨水溶液萃取，然后直接上樣分析，方法簡單，但是對于TSNAs含量較低的中式烤煙型卷煙的測定較為困難，特別是含量最低的NAB，測定較為困難。
技術(shù)實現(xiàn)思路
鑒于此，本專利技術(shù)目的在于提供一種前處理相對簡單、靈敏度更高、分析速度快的TSNAs含量檢測方法，該方法專用于分析卷煙主流煙氣中TSNAs含量。為解決以上技術(shù)問題，本專利技術(shù)提供的技術(shù)方案是，提供一種測定卷煙主流煙氣中煙草特有亞硝胺含量的方法，包括以下步驟：步驟a)煙氣捕集選取玻璃纖維濾片捕集卷煙主流煙氣；步驟b)提取目標物將捕集過主流煙氣的濾片放入萃取管，加入萃取液和內(nèi)標,將第一離心管置于第一渦旋振蕩儀，渦旋振蕩，靜置；所述萃取管為離心管；步驟c)凈化吸取上清液于第二離心管，加入陶瓷均質(zhì)子、硫酸鎂和N-丙基乙二胺，將第二離心管置于第二渦旋振蕩儀，渦旋振蕩，離心；上清液經(jīng)有機相濾膜過濾，濾液待測；步驟d)標準儲備液和標準工作液的配制用甲醇配置TSNAs標準儲備液，儲存于棕色玻璃瓶中，低溫保存；量取儲備液用甲醇稀釋定容，制得TSNAs工作液；用甲醇準確配置TSNAs-d4內(nèi)標儲備液，用內(nèi)標儲備液配制內(nèi)標工作液，并儲存于棕色玻璃瓶中；所有的儲備液低溫保存，使用前將其恢復(fù)到室溫；用萃取液配制不同濃度的TSNAs標準工作溶液；步驟e)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定吸取配制好的不同濃度的TSNAs標準工作溶液，注入UPLC-MS/MS系統(tǒng)，按內(nèi)標法以峰面積計算出樣品待測液中TSNAs含量。根據(jù)本專利技術(shù)測定卷煙主流煙氣中煙草特有亞硝胺含量的方法的一個實施方式，所述步驟a)中，捕集主流煙氣的濾片直徑為44mm。根據(jù)本專利技術(shù)測定卷煙主流煙氣中煙草特有亞硝胺含量的方法的一個實施方式，所述步驟b)中，第一離心管為50mL，加入100mmol/L的萃取液15mL和1μg/mL混合內(nèi)標150μL；所述萃取液為醋酸銨水溶液。根據(jù)本專利技術(shù)測定卷煙主流煙氣中煙草特有亞硝胺含量的方法的一個實施方式，所述步驟b)中，所述第一渦旋振蕩儀的渦旋振蕩時間為5min，渦旋振蕩轉(zhuǎn)速為2000轉(zhuǎn)/min。根據(jù)本專利技術(shù)測定卷煙主流煙氣中煙草特有亞硝胺含量的方法的一個實施方式，所述步驟c)中，第二離心管為2mL，移取的上清液為1mL,加入陶瓷均質(zhì)子兩顆，加入的無水硫酸鎂和N-丙基乙二胺分別為150mg和25mg。根據(jù)本專利技術(shù)測定卷煙主流煙氣中煙草特有亞硝胺含量的方法的一個實施方式，所述步驟c)中，所述第二渦旋震蕩儀的渦旋振蕩時間為2min，渦旋振蕩轉(zhuǎn)速為2000轉(zhuǎn)/min。根據(jù)本專利技術(shù)測定卷煙主流煙氣中煙草特有亞硝胺含量的方法的一個實施方式，所述步驟c)中，離心時間為4min，離心機轉(zhuǎn)速為6000轉(zhuǎn)/min。根據(jù)本專利技術(shù)測定卷煙主流煙氣中煙草特有亞硝胺含量的方法的一個實施方式，所述步驟e)具體操作為：吸取配制好的不同濃度的TSNAs標準工作溶液，注入UPLC-MS/MS系統(tǒng)，繪制TSNAs的線性回歸方程，對純化稀釋后的樣品待測液進行測定，測得分析物與內(nèi)標峰面積的比值，代入一元線性回歸方程，求得樣品待測液中分析物的含量。根據(jù)本專利技術(shù)測定卷煙主流煙氣中煙草特有亞硝胺含量的方法的一個實施方式，所述步驟d)中，UPLC-MS/MS系統(tǒng)的色譜條件：選用色譜柱為C18，規(guī)格為100mm×2.1mm，1.7μm；流動相A：0.1％甲酸水和流動相B：甲醇；梯度洗脫條件為：0～0.5min，80％A～80％A；0.5～1.0min，80％A～10％A；1.0～2.9min，10％A～10％A；2.9～3.5min，10％A～80％A；3.51～5.0min，80％A～80％A；流動相流速為0.6mL/min。根據(jù)本專利技術(shù)測定卷煙主流煙氣中煙草特有亞硝胺含量的方法的一個實施方式，所述步驟d)中，串聯(lián)質(zhì)譜檢測的條件為：電噴霧離子源，噴霧電壓(IS)3.0kV；離子化溫度450℃；霧化氣流量800L/Hr；錐孔氣流量50L/Hr；碰撞氣為氬氣，流量0.15ml/min；其余氣體為氮氣；駐留時間為100msec，正離子MRM模式采集。與現(xiàn)有技術(shù)相比，上述技術(shù)方案中的一個技術(shù)方案具有如下優(yōu)點：1、與傳統(tǒng)的GC-TEA檢測方法比較，采用醋酸銨萃取，渦旋振蕩，過濾進樣的方式，簡化了前處理過程，提高了分析靈敏度。2、與現(xiàn)有的LC-MS/MS方法相比，用渦旋振蕩法振蕩時間明顯短于超聲萃取或振蕩萃取，提取效率增加，振蕩時間縮短了6倍。3、與現(xiàn)有的LC-MS/MS方法相比，選取了分散固相萃取凈化主流煙氣樣品，有利于低TSNAs含量的烤煙型卷煙的測定。4、本專利技術(shù)選取了超高效液相色譜柱，使得柱子的分離度明顯提高，分析時間顯著縮短，提高檢測通量。串聯(lián)質(zhì)譜的使用使得方法的選擇性和靈敏度提高，更有利于吸煙者主流煙氣中低含量TSNAs的測定。5、本專利技術(shù)使用內(nèi)標為氘代內(nèi)標，使用氘代內(nèi)標定量，有效消除基質(zhì)干擾和前處理過程中引起的誤差。6、本專利技術(shù)具有操作簡便、快速、準確、靈敏度及重復(fù)性好的優(yōu)點。附圖說明圖1是振蕩萃取-LC-MS/MS法檢測1號烤煙樣品中TSNAs的選擇離子流色譜圖。圖2是本專利技術(shù)檢測1號烤煙樣品中TSNAs的選擇離子流色譜圖。具體實施方式以下結(jié)合具體實例做進一步描述。本實施例所用儀器與試劑為：WatersXevoTQ超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(美國Waters公司)，配備電噴霧電離源(ESI)；VtexMixer230VeU振蕩器(美國Labnet公司)。甲酸為HPLC級(濃度為49-51％，德國Sigma公司)；乙腈、甲醇均為色譜純(美國Thermo-Fisher公司)；TSNAs，TSNAs-d4(純度：98％；同位素純度：99％，TorontoResearchChemicalsInc.)，水為超純水。本專利技術(shù)采用醋酸銨水溶液為萃取液，渦旋振蕩萃取，基質(zhì)分散萃取凈化，氘代內(nèi)標定量，UPLC-MS/MS測定等步驟對主流煙氣中TSNAs進行測定，可快速、準確、同時檢測出主流煙氣中4種TSNAs的含量，即N-亞硝基降煙堿(NNN)、4-(甲基TSNAs基)-1-(3-吡啶基)-本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種測定卷煙主流煙氣中TSNAs含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：步驟a)煙氣捕集選取玻璃纖維濾片捕集卷煙主流煙氣；步驟b)提取目標物將捕集過主流煙氣的濾片放入萃取管，加入萃取液和內(nèi)標,將第一離心管置于第一渦旋振蕩儀，渦旋振蕩，靜置；所述萃取管為離心管；步驟c)凈化吸取上清液于第二離心管，加入陶瓷均質(zhì)子、硫酸鎂和N?丙基乙二胺，將第二離心管置于第二渦旋振蕩儀，渦旋振蕩，離心；上清液經(jīng)有機相濾膜過濾，濾液待測；步驟d)標準儲備液和標準工作液的配制用甲醇配置TSNAs標準儲備液，儲存于棕色玻璃瓶中，低溫保存；量取儲備液用甲醇稀釋定容，制得TSNAs工作液；用甲醇準確配置TSNAs?d4內(nèi)標儲備液，用內(nèi)標儲備液配制內(nèi)標工作液，并儲存于棕色玻璃瓶中；所有的儲備液低溫保存，使用前將其恢復(fù)到室溫；用萃取液配制不同濃度的TSNAs標準工作溶液；步驟e)超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜測定吸取配制好的不同濃度的TSNAs標準工作溶液，注入UPLC?MS/MS系統(tǒng)，按內(nèi)標法以峰面積計算出樣品待測液中TSNAs含量。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種測定卷煙主流煙氣中TSNAs含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：步驟a)煙氣捕集選取玻璃纖維濾片捕集卷煙主流煙氣；步驟b)提取目標物將捕集過主流煙氣的濾片放入萃取管，加入萃取液和內(nèi)標,將第一離心管置于第一渦旋振蕩儀，渦旋振蕩，靜置；所述萃取管為離心管；步驟c)凈化吸取上清液于第二離心管，加入陶瓷均質(zhì)子、硫酸鎂和N-丙基乙二胺，將第二離心管置于第二渦旋振蕩儀，渦旋振蕩，離心；上清液經(jīng)有機相濾膜過濾，濾液待測；步驟d)標準儲備液和標準工作液的配制用甲醇配置TSNAs標準儲備液，儲存于棕色玻璃瓶中，低溫保存；量取儲備液用甲醇稀釋定容，制得TSNAs工作液；用甲醇準確配置TSNAs-d4內(nèi)標儲備液，用內(nèi)標儲備液配制內(nèi)標工作液，并儲存于棕色玻璃瓶中；所有的儲備液低溫保存，使用前將其恢復(fù)到室溫；用萃取液配制不同濃度的TSNAs標準工作溶液；步驟e)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定吸取配制好的不同濃度的TSNAs標準工作溶液，注入UPLC-MS/MS系統(tǒng)，按內(nèi)標法以峰面積計算出樣品待測液中TSNAs含量。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定卷煙主流煙氣中TSNAs含量的方法，其特征在于，所述步驟a)中，捕集主流煙氣的濾片直徑為44mm。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定卷煙主流煙氣中TSNAs含量的方法，其特征在于，所述步驟b)中，第一離心管為50mL，加入100mmol/L的萃取液15mL和1μg/mL混合內(nèi)標150μL；所述萃取液為醋酸銨水溶液。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的測定卷煙主流煙氣中TSNAs含量的方法，所述步驟b)中，所述第一渦旋振蕩儀的渦旋振蕩時間為5min，渦旋振蕩轉(zhuǎn)速為2000轉(zhuǎn)/min。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定卷煙主流煙氣中TSNAs含量的方法，所述步驟c)中，第二離心管為2mL，移取的...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：熊巍，韶濟民，龐夙，陶曉秋，黃玫，張海燕，楊雪，
申請(專利權(quán))人：中國煙草總公司四川省公司，
類型：發(fā)明
國別省市：四川;51