一種B族鏈球菌鑒別培養(yǎng)基制造技術

一種B族鏈球菌鑒別培養(yǎng)基，每100ML水中包括以下質量的成分：月示蛋白胨3g，KH2PO40.2g，Na2HPO40.4g，粗制米粉4g，瓊脂1.3g，抗生素0.2g，腦-心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基0.2g，馬血清2g。本發(fā)明專利技術的培養(yǎng)基可以利用采樣的待檢拭子直接進行劃線檢測，相對現(xiàn)有技術需對純種菌株進行鑒定，本發(fā)明專利技術的培養(yǎng)基提高了B群鏈球菌的檢測正確率和檢測效率，且本發(fā)明專利技術使用方法操作簡單，不需要特殊的儀器設備。適合在醫(yī)院，尤其是基層醫(yī)療機構應用，方便了樣品的采樣工作，同時保證了B群鏈球菌的檢出效果。

【技術實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術涉及一種微生物培養(yǎng)基，尤其涉及一種B族鏈球菌選擇性培養(yǎng)基。
技術介紹
B族鏈球菌(GBS)，又稱B群鏈球菌或無乳鏈球菌，屬于革蘭氏陽性菌，是棲息在人體胃腸道和下生殖道的正常菌群，從20世紀70年代以來，GBS逐漸成為新生兒嚴重感染性疾病的重要致病菌之一，已經(jīng)引起全世界的廣泛關注。GBS感染是引起圍產(chǎn)期胎兒宮內感染、新生兒肺炎、敗血癥、腦膜炎等嚴重感染的主要原因。可引發(fā)早產(chǎn)，胎兒發(fā)育遲緩(低出生體重兒)、胎膜早破及晚期流產(chǎn)等嚴重后果，在圍產(chǎn)期醫(yī)學中占重要地位。目前，在對孕產(chǎn)婦是否攜帶GBS進行篩查的時候主要有兩種方法，第一種是使用檢測試劑盒進行快速診斷。但是通過檢測試劑盒進行快速診斷對操作的要求和成本均比較高，限制了檢測試劑盒的推廣應用。第二種，也就是目前最常見的方法，是利用培養(yǎng)基對取得的樣品進行培養(yǎng)，然后通過直接觀察法、革蘭氏染色法、觸酶試驗、協(xié)同溶血(CAMP)試驗等判斷是否感染GBS。但是孕婦生殖道和直腸有多種細菌存在，而目前的培養(yǎng)基不能有效抑制GBS以外的其他菌的生長，這些細菌生長速度快，常使GBS菌生長受到抑制，造成GBS菌漏檢。為此，臨床檢測中使用現(xiàn)有的B族鏈球菌鑒別培養(yǎng)基進行B族鏈球菌鑒定時，需要先對取樣的菌株純化增殖培養(yǎng)，然后才能進行鑒定，這樣程序繁瑣，且浪費時間和人力。目前臨床使用的梅里埃公司的B族鏈球菌篩查培養(yǎng)基，其主要采用的是底物顯色的方法，成本較高，價格貴。
技術實現(xiàn)思路
為了克服現(xiàn)有技術存在的問題，本專利技術提供了一種能夠快速鑒定B族鏈球菌的培養(yǎng)基。本專利技術所采用的技術方案為：一種B族鏈球菌鑒別培養(yǎng)基，每100ML水中包括以下質量的成分：月示蛋白胨3g，KH2PO40.2g，Na2HPO40.4g，粗制米粉4g，瓊脂1.3g，抗生素0.2g，腦-心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基0.2g，馬血清2g。進一步地，所述抗生素包括慶大霉素、萘啶酮酸和兩性霉素B。進一步地，所述抗生素在培養(yǎng)基中的的含量分別為：慶大霉素：8×10-4g/ml，萘啶酮酸：10×10-4g/ml，兩性霉素B：2×10-4g/ml。進一步地，所述粗制米粉為將糙米粉碎后制成。進一步地，所述培養(yǎng)基的制備方法包括以下步驟：(1)將配方量的粗制米粉、月示蛋白胨、KH2PO4、Na2HPO4、瓊脂和腦-心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基溶于100mL單蒸水，用10mol/L氫氧化鈉矯正PH到7.2±0.2；(2)高溫高壓滅菌、待冷卻到60℃左右時移入生物安全柜中；(3)加入抗生素和馬血清搖勻，然后將上述液體培養(yǎng)基傾入無菌平皿內，凝固后包裝，于4℃保存。本專利技術的有益效果為：本專利技術的B族鏈球菌鑒別培養(yǎng)基使用粗制米粉而非市售深加工米粉。研究發(fā)現(xiàn)，粗制米粉才能使B族鏈球菌顯色。本專利技術的培養(yǎng)基可以利用采樣的待檢拭子直接進行劃線檢測，相對現(xiàn)有技術需對純種菌株進行鑒定，本專利技術的培養(yǎng)基提高了B群鏈球菌的檢測正確率和檢測效率，且本專利技術使用方法操作簡單，不需要特殊的儀器設備。適合在醫(yī)院，尤其是基層醫(yī)療機構應用，方便了樣品的采樣工作，同時保證了B群鏈球菌的檢出效果。為了更好地理解和實施，下面詳細說明本專利技術。具體實施方式【實施例1】B族鏈球菌鑒別培養(yǎng)基的配制本實施例中的B族鏈球菌鑒別培養(yǎng)基，每100ML水中包括以下質量的成分：月示蛋白胨3g，KH2PO40.2g，Na2HPO40.4g，粗制米粉4g，瓊脂1.3g，抗生素0.2g，腦-心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基0.2g，馬血清2g。其配制方法為：在錐形瓶中將配方量的粗制米粉、月示蛋白胨、KH2PO4、Na2HPO4、瓊脂和腦-心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基溶于100mL單蒸水，用10mol/L氫氧化鈉矯正PH到7.2±0.2；。包扎好放121℃高壓鍋滅菌20min，待冷卻到60℃左右時將錐形瓶移入生物安全柜中。加入抗生素和馬血清搖勻，然后將上述液體培養(yǎng)基傾入內徑9cm的無菌平皿內，培養(yǎng)基高度約為0.5cm。待凝固后包裝，于4℃保存。【實施例2】B族鏈球菌鑒別培養(yǎng)基的應用試驗步驟:待檢拭子采用分區(qū)劃線法接種該培養(yǎng)基。第一區(qū)直接用拭子進行劃線，第二、三、四區(qū)用接種環(huán)進行劃線；37℃培養(yǎng)18h～24h觀察結果。結果判定:典型B族鏈球菌為橙色菌落，檢測時平板上有典型菌落即可報告檢出B族鏈球菌。B族鏈球菌快速鑒定培養(yǎng)基結果判定表【實施例3】B族鏈球菌鑒別培養(yǎng)基對其他菌類的抑制作用在本專利技術的培養(yǎng)基平板上接種各種類的細菌和真菌，觀察其生長情況如下菌種名稱生長情況菌種名稱生長情況金黃色葡萄球菌-傷寒沙門菌-甲型鏈球菌-痢疾桿菌D15-丙型鏈球菌+大腸埃希菌-綠膿桿菌-輕型白喉桿菌-產(chǎn)氣腸桿菌-表皮葡萄球菌-變形桿菌-乙型副傷寒沙門菌-肺炎鏈球菌-白色念珠菌-菌種未生長用(-)表示；菌種有生長用(+)表示其中，丙型鏈球菌生長，菌落顯白色，不影響觀察結果。【實施例4】臨床試驗于南華大學附屬第一醫(yī)院隨機選擇19-65歲女性183例，用普通棉拭子采集生殖道的分泌物標本，分別使用本專利技術的B族鏈球菌鑒別培養(yǎng)基和梅里埃(上海)生物制品有限公司生產(chǎn)的B族鏈球菌篩查培養(yǎng)基進行檢測，對于結果不同組，再使用第三方試劑進行檢測。檢測結果，本專利技術檢出率19.13％(35/183)，對比試劑檢測率為21.88％(40/183)的B族鏈球菌鑒別培養(yǎng)基檢出率92％，假陽性率0％。本專利技術并不局限于上述實施方式，如果對本專利技術的各種改動或變形不脫離本專利技術的精神和范圍，倘若這些改動和變形屬于本專利技術的權利要求和等同技術范圍之內，則本專利技術也意圖包含這些改動和變形。本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術保護點】
一種B族鏈球菌鑒別培養(yǎng)基，其特征在于，每100ML水中包括以下質量的成分：月示蛋白胨3g，KH2PO4?0.2g，Na2HPO4?0.4g，粗制米粉4g，瓊脂1.3g，抗生素0.2g，腦?心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基0.2g，馬血清2g。

【技術特征摘要】
1.一種B族鏈球菌鑒別培養(yǎng)基，其特征在于，每100ML水中包括以下質量的成分：月示蛋白
胨3g，KH2PO40.2g，Na2HPO40.4g，粗制米粉4g，瓊脂1.3g，抗生素0.2g，腦-心浸
萃液態(tài)培養(yǎng)基0.2g，馬血清2g。
2.根據(jù)權利要求1所述的B族鏈球菌鑒別培養(yǎng)基，其特征在于，所述抗生素包括慶大霉素、
萘啶酮酸和兩性霉素B。
3.權利要求2所述的的B族鏈球菌鑒別培養(yǎng)基，其特征在于，所述抗生素在培養(yǎng)基中的的含
量分別為：慶大霉素：8×10-4g/ml，萘啶酮酸：10×10-4g/ml，兩性霉素B：2×...

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：賴小敏，李有生，
申請(專利權)人：廣州瑞輝生物科技股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：廣東;44