E?鈣粘蛋白激動多肽及其應用制造技術

本發明專利技術涉及藥物領域，具體涉及具有促進E?鈣粘蛋白，能治療腫瘤的多肽。其序列為SEQ?ID?NO1。所述多肽的治療腫瘤的應用。其用途可通過多種給藥方式治療腫瘤，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注等實現。有益效果在于，本發明專利技術能夠抑制體外的多種腫瘤細胞增殖、遷移和侵襲的活性，抑制腫瘤模型裸鼠的腫瘤生長，提高荷瘤小鼠生存率。達到治療腫瘤的效果。

【技術實現步驟摘要】
E-鈣粘蛋白激動多肽及其應用
：本專利技術涉及藥物領域，具體涉及用于治療腫瘤的多肽。
技術介紹
鈣粘蛋白是一種同親型結合、Ca依賴的細胞粘著糖蛋白，對胚胎發育的細胞識別、遷移和組織分化以及成體組織器官構成具有重要作用。不同細胞及其發育不同的階段其表面的鈣粘蛋白的種類與數量均有所不同。E-鈣粘著蛋白(E-cadherin)是屬于在表皮組織中的膜整合糖蛋白，E-鈣黏蛋白是哺乳動物發育過程中第一個表達的鈣黏蛋白，當裸鼠發育進入8細胞胚胎時期，E-鈣黏蛋白的表達將松散聯系的分裂球細胞變成緊密黏合的細胞。若用E-鈣黏蛋白的抗體處理細胞則會阻止分裂球細胞間的緊密黏合。因此，在發育過程中通過調控E-鈣黏蛋白，可以決定胚胎細胞的黏著，影響細胞的分化，參與器官的形成等。研究發現，多種人上皮來源的腫瘤中有E-cadherin功能喪失，如乳腺小葉癌、彌漫型胃癌、結直腸癌、前列腺癌、肝癌、食管癌、皮膚癌、腎癌和肺癌。越來越多的研究表明，在病理條件下E-cadherin也參與腫瘤細胞的侵襲和轉移過程，且與腫瘤的預后密切相關。研究發現，E-cadherin的表達程度與多種惡性腫瘤的腫瘤臨床分級呈負相關。缺乏E-cadherin的侵襲性腫瘤細胞在轉染E-cadherin基因后，其侵襲性喪失。許多癌組織中均出現E-cadherin的表達缺失或基因突變，E-cadherin表達降低可引起細胞與細胞之間粘附破壞，E-cadherin的過表達可引起細胞粘附性增加，如用單克隆抗體對E-cadherin受體進行封閉，則能導致細胞的分離和表型改變。E-cadherin能與淋巴細胞樣增強因子1(LEF1)競爭性結合β-catenin，使后者不能轉位到細胞核，從而干擾啟動細胞增殖相關基因轉錄。既往認為，大腸癌發生時，先是APC基因突變，然后是E-cadherin。新近發現大腸癌組織中APC，E-cadherin，β-catenin基因都是突變的，即它們可以同時發生突變。AJ的磷酸化使E-cadherin的功能喪失，β-catenin，γ-catenin和P120ctn的磷酸化均會影響E-cadherin功能。腫瘤細胞在體外重新培養后，E-cadherin重新表達，細胞也失去侵襲性。E-cadherin介導的細胞內粘附功能的喪失與腫瘤發生有關，如失去接觸抑制功能，可使細胞無限度地分裂增殖，也使癌細胞易于脫離原發位向遠處轉移。一般來說，在分化較好的癌組織多表達E-cadherin，侵襲和轉移也少；而分化較差的癌組織則相反，傾向于侵襲和遠處轉移。因此，E-cadherin是調控腫瘤生長和轉移的重要靶點。專利技術人認為如果找到一種靶向性的E-cadherinATF3激活劑，可以在機體內提高E-cadherin表達的藥物，整體上恢復細胞內粘附功能，從而達到治療癌癥的目的。盡管如此，并沒有成熟開發的E-鈣粘蛋白激動制劑，尤其是E-鈣粘蛋白蛋白激動多肽被開發，臨床上用于治療腫瘤。本專利技術人設計出E-鈣粘蛋白激動多肽，用于治療腫瘤患者，為腫瘤患者的治療找到了新的突破口。
技術實現思路
：本專利技術目的是針對現有腫瘤患者治療的藥物特點，設計一種E-鈣粘蛋白激動多肽，能有效治療腫瘤。技術方案一種E-鈣粘蛋白激動多肽，其序列為SEQIDNO1。所述多肽的治療腫瘤的應用。其用途可通過多種給藥方式治療腫瘤，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注等實現。所述E-鈣粘蛋白激動多肽用于促進E-鈣粘蛋白的活性。有益結果：本專利技術中的E-鈣粘蛋白激動多肽序列SEQIDNO1，可以靶向促進E-鈣粘蛋白功能恢復，達到治療腫瘤的效果。試驗結果表明：E-鈣粘蛋白激動多肽能夠抑制體外的多種腫瘤細胞增殖、遷移和侵襲的活性，抑制腫瘤模型裸鼠的腫瘤生長，提高荷瘤小鼠生存率。達到治療腫瘤的效果。具體實施方式E-鈣粘蛋白激動多肽由上海生工吉爾合成。實施例1E-鈣粘蛋白激動多肽對體外培養人黑色素瘤細胞的生長和存活IC50。采用MTT比色法。將對數生長的人黑色素瘤細胞，以1.0×105加入96孔培養板中，培養24h，實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物E-鈣粘蛋白激動多肽(上海生工合成)和陽性對照藥物紫杉醇；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設五個復孔，培養48h，分別在0h、2h、8h、14h、20h、24h、36h、，48h每孔加入MTT，作用4h后，加入DMSO，孵育30min，在酶標儀620nm處測定吸光度A值，按公式人黑色素瘤細胞生長抑制率＝(1-實驗組吸光值/對照組吸光值)×100％。計算出實驗藥物的IC50為8.50μM。實施例2E-鈣粘蛋白激動多肽對體外培養人肝癌干細胞的生長和存活IC50。采用MTT比色法。將對數生長的人肝癌干細胞，以1.0×105加入96孔培養板中，培養24h，實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物E-鈣粘蛋白激動多肽(上海生工合成)和陽性對照藥物紫杉醇；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設五個復孔，培養48h，分別在0h、2h、8h、14h、20h、24h、36h、，48h每孔加入MTT，作用4h后，加入DMSO，孵育30min，在酶標儀620nm處測定吸光度A值，按公式人肝癌干細胞生長抑制率＝(1-實驗組吸光值/對照組吸光值)×100％。計算出實驗藥物的IC50為12.03μM。實施例3E-鈣粘蛋白激動多肽乳腺癌細胞MCF-7遷移的作用。采用劃痕實驗。先用marker筆在24孔板背后，用直尺比著，均勻得劃橫線，大約每隔0.5～1cm一道，橫穿過孔。每孔穿過3條線；將成對數生長的MCF-7細胞，以1.0×105加入24孔培養板中，培養24h。第二天用10μl槍頭比著直尺，垂直于背后的橫線劃痕，以劃痕和背后橫線的交叉點為固定觀察位點；實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物E-鈣粘蛋白激動多肽(上海生工合成)和陽性對照藥物長春新堿；空白組加入相同體積的溶劑，每孔設五個復孔；放入37℃、5％CO2培養箱，培養。按0，6，12，24，36小時，拍照；測量0，6，12，24，36h劃痕寬度。以不同的時間點，記錄每孔三個固定位置處劃痕寬度的變化，即為細胞遷移距離。按照公式計算遷移率(migrationrate，MR)：遷移率(MR)＝(實驗第n小時的劃痕寬度－實驗第0小時的劃痕寬度)×100％/實驗第0小時的劃痕寬度。結果，隨E-鈣粘蛋白激動多肽濃度增加，遷移抑制率逐漸下降，說明E-鈣粘蛋白激動多肽能夠抑制乳腺癌細胞MCF-7遷移，抑制率為85.3％。實施例4E-鈣粘蛋白激動多肽對人卵巢癌細胞OVCAR-3T侵襲的影響：將10mg/mlMatrigel用無血清的OVCAR-3T培養液以1:2稀釋，涂布于Transwell小室膜上，室溫風干。將培養到對數生長期的OVCAR-3T細胞用胰蛋白酶消化，收集，用無血清RPMI1640培養液重懸，于顯微鏡下計數，將細胞濃度調整到1×105個/ml。實驗設空白對照組、E-鈣粘蛋白激動多肽各劑量(5、10、20mg/ml)組。將細胞接種到Transwell小室中，每孔100μl，并將各組試驗用液加入小室中。24孔板中加入0.6ml含5％胎牛血清和1％VEGFRPMI1640培養液刺激細胞侵襲，于5％CO2，37℃孵育24h。2本文檔來自技高網...

【技術保護點】
E?鈣粘蛋白激動多肽，其特征在于其序列為SEQ?ID?NO1。

【技術特征摘要】
1.E-鈣粘蛋白激動多肽，其特征在于其序列為SEQIDNO1。2.權利要求1的抑制多肽在治療腫瘤的應用。3.根據權...

【專利技術屬性】
技術研發人員：不公告發明人，
申請(專利權)人：羅瑞雪，
類型：發明
國別省市：江蘇,32