The present invention relates to protease variants and methods for obtaining protease variants. The present invention also relates to polynucleotides encoding these variants, nucleic acid constructs comprising these polynucleotides, vectors, and host cells, and methods of using these variants.
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】蛋白酶變體以及對其進行編碼的多核苷酸對序列表的引用本申請包含計算機可讀形式的序列表，將其通過引用結合在此。專利技術背景專利
本專利技術涉及相對于親本蛋白酶在一種或多種特性中展示出改變的多種新穎蛋白酶變體，所述特性包括：洗滌性能、洗滌劑穩定性和/或儲存穩定性。本專利技術的變體適合用于在例如清潔過程或清潔劑組合物中使用，例如洗衣組合物和餐具洗滌組合物，包括手洗和自動餐具洗滌組合物。本專利技術還涉及編碼這些變體的分離的DNA序列、表達載體、宿主細胞以及用于產生和使用本專利技術的蛋白酶變體的方法。相關領域描述幾十年來已經在洗滌劑工業中使用多種酶作為洗滌配制品的部分。從商業視角看，蛋白酶在這樣的配制品中是最相關的酶，而其他酶(包括脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶、半纖維素酶或多種酶的混合物)也是通常使用的。為了改進蛋白酶的成本和/或性能，對具有改變的性質，如在低溫下增加活性、增加的穩定性、在給定的pH下增加比活性、改變的Ca2+依賴性、在存在其他洗滌劑成分(例如漂白劑、表面活性劑等)的情況下增加的穩定性等的蛋白酶進行著持續搜尋。廣泛用于洗滌劑中的一個蛋白酶家族是枯草桿菌酶。這個家族先前已經進一步由西埃澤恩(Siezen)RJ和洛因伊森(Leunissen)JAM，1997，蛋白質科學(ProteinScience)，6，501-523被分組為6個不同亞組。這些亞組之一是枯草桿菌蛋白酶家族，它包括枯草桿菌酶，例如BPN’、枯草桿菌蛋白酶309(諾維信公司(NovozymesA/S))、枯草桿菌蛋白酶嘉士伯(Carlsberg)(諾維信公司(NovozymesA/S))、枯...
【技術保護點】
一種蛋白酶變體，包括在對應于以下位置的一個或多個位置的取代：SEQ?ID?NO:3的1、2、3、4、5、7、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、36、38、39、40、41、46、47、48、49、50、54、57、58、59、60、61、62、63、65、67、69、70、71、77、79、80、81、82、83、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、105、107、109、111、113、114、116、119、123、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、136、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、156、157、159、160、161、162、163、164、165、166、171、173、174、175、176、179、183、185、187、192、197、199、201、202、207、21...
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2014.10.30 EP 14191091.91.一種蛋白酶變體，包括在對應于以下位置的一個或多個位置的取代：SEQIDNO:3的1、2、3、4、5、7、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、36、38、39、40、41、46、47、48、49、50、54、57、58、59、60、61、62、63、65、67、69、70、71、77、79、80、81、82、83、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、105、107、109、111、113、114、116、119、123、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、136、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、156、157、159、160、161、162、163、164、165、166、171、173、174、175、176、179、183、185、187、192、197、199、201、202、207、212、217、219、221、222、223、224、226、228、229、230、231、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、253、254、255、256、257、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、290、291、293、294、295、296、297、298、308、309、310或311，其中該變體與SEQIDNO:3具有至少70％序列一致性，并且該變體具有蛋白酶活性。2.如權利要求1所述的變體，其包括一個或多個選自下組的取代，該組由以下各項組成：根據SEQIDNO:3編號的A1S、A1Y、A1G、A1Q、A1R、V2M、V2K、V2S、P3S、P3L、P3T、S4M、S4G、S4W、S4D、S4F、S4R、T5W、T5C、T5Y、T5L、T5P、T5V、T5S、T7L、T7F、I11L、I11M、K12S、K12E、K12W、K12C、K12L、S13R、I14L、I14F、I14V、Y15C、Y15G、N16L、N16C、D17R、D17Q、D17L、D17M、D17E、D17C、D17A、D17V、D17K、D17S、D17T、Q18R、Q18E、Q18G、Q18C、Q18T、S19Q、I20W、T21R、K22L、K22C、K22V、K22T、K22F、T23W、T23G、T24V、T24A、T24N、T24M、T24W、T24C、T24F、T24G、G25A、G25D、G25Q、G26S、S27G、S27P、S27L、S27R、S27C、G28R、G28C、G28Q、G28E、G28A、G28L、I29L、I29S、K30A、K30V、K30G、K30W、K30L、K30C、K30H、V31G、V31S、A32N、A32G、V33Q、L34T、L34A、T36G、T36A、T36C、V38I、Y39S、Y39F、Y39V、T40I、T40M、T40G、T40A、T40Q、T40R、T40V、S41R、S41V、S41M、A46G、A46F、A46V、G47L、G47C、G47Q、G47V、G47R、G47S、S48W、S48F、A49G、A49Y、A49L、A49W、A49I、A49S、A49R、A49K、A49V、A49C、A49N、A49E、E50R、D54S、D54A、Q57L、Q57G、S58F、S58E、N59V、P60R、P60F、P60A、L61R、V62M、D63C、D63V、D63R、S65R、T67S、T67P、R69V、Q70G、G71W、G71A、A77V、A77S、A77C、A77G、A77I、A77L、A77M、T79L、T79A、T79G、T79N、T79V、V80H、V80T、V80L、V80N、L81T、L81N、A82C、A82T、H83Y、H83V、H83P、H83G、H83W、H83S、H83L、H83C、H83E、H83R、G85L、S86G、S86A、S86V、S86C、S86W、N87D、N87V、N87A、N87R、N87T、N87E、N87H、N87W、G88N、G88W、G88K、G88E、G88L、G88R、G88A、Q89R、Q89L、Q89C、Q89G、Q89S、Q89A、Q89K、Q89W、G90L、G90R、G90K、V91G、V91L、V91D、Y92W、Y92T、Y92F、Y92G、Y92V、G93S、G93A、V94P、V94L、A95N、A95S、P96G、P96A、P96L、P96S、P96W、P96E、Q97T、Q97W、Q97M、Q97R、Q97F、Q97A、Q97G、A98S、A98G、A98V、A98S、A98R、K99W、K99L、K99H、K99A、K99Q、K99C、K99R、K99V、K99T、L100E、L100S、L100G、W101L、A102M、A102C、A102S、A102F、Y103F、Y103H、Y103D、Y103V、V105A、G107R、N109R、N109S、S111A、S111F、S111W、S111Q、S111E、S111L、S111D、S111G、S111V、S111T、S111Y、Y113E、Y113C、Y113F、S114Y、S114L、D116V、A119G、A119T、H123S、H123E、H123Y、A125R、A125S、A125V、A125I、A125V、D126I、D126E、D126Q、D126F、D126L、D126C、D126P、D126S、D126V、E127V、A128C、A128G、A128V、S129G、S129H、S129W、R130V、R130W、R130C、R130G、R130P、R130L、R130Q、R130M、R130I、R130T、T131E、T131R、T131F、T131A、T131S、T131G、T131V、T131C、T131W、G132T、S133V、S133R、S133L、S133F、K134C、K134R、K134A、K134Y、K134W、K134L、K134G、V136M、V136S、V136L、S143G、S143Q、S144D、S144G、S144C、S144Y、A145E、A145I、A145R、A145S、A145W、A145V、K146M、K146R、D147T、D147L、D147I、D147V、D147Y、S148F、S148L、S148C、S148Y、S148R、S148T、S148A、S148D、S148V、S148Q、S148G、S148M、S148N、S148W、L149G、L149M、L149F、L149S、L149R、I150R、I150Q、I150G、A151V、A151T、A151E、S152M、S152W、S152E、S152G、S152T、S152K、S152L、S152A、A153W、A153G、A153S、Y156G、A157G、A157S、G159M、G159A、G159W、G159L、G159C、G159T、K160G、K160V、G161N、G161C、G161R、G161V、G161M、G161S、G161W、G161L、G161D、G161Y、G161A、G161I、V162C、V162W、V162N、L163Y、L163V、L163C、L163I、L163T、I164S、I164L、V165H、V165A、V165L、V165C、A166V、S171M、S171W、S171H、S171C、S171G、S173H、S173W、S173A、G174A、G174C、G174E、S175I、N176D、G179R、G183W、V185I、V185L、A187S、A187C、A192S、Q197C、N199C、T201P、T201C、Y202L、F207W、N212R、G217A、G217S、Y219F、I221V、Q222G、Q222H、E223Q、R224A、I226L、V228S、S229A、A230W、A230C、A230S、A230T、P231S、P231A、A233I、A233G、A233T、A233C、A233D、A233L、A233V、A233W、A233E、S234G、S234H、S234V、S234M、S234L、S234C、S234E、S234A、S234D、S234R、V235I、E236A、S237C、S237V、S237G、T238G、T238H、T238V、W239G、W239R、Y240F、Y240P、Y240S、Y240C、Y240R、Y240V、Y240L、Y240H、T241Q、T241E、T241S、T241W、T241D、G242H、G242S、G242V、G242K、G243T、G243N、G243F、G243A、G243V、Y244R、Y244W、N245E、N245L、N245A、N245R、T246G、T246R、T246V、T246I、I247A、I247G、I247W、I247L、I247M、I247Y、I247Q、S248F、A253S、T254G、P255A、H256M、H256A、V257I、V257L、V257T、V257D、V257S、V257C、G259A、L260G、L260Y、L260C、A261L、A261S、A262I、A262G、K263V、I264F、I264V、W265A、W265I、W265L、S266Y、S266T、S266G、S266I、S266W、A267W、A267M、A267K、A267G、N268C、N268L、N268E、N268W、N268V、N268G、N268R、N268A、T269C、T269M、T269V、T269W、T269L、T269G、T269S、S270G、S270H、S270V、S270R、S270L、S270C、L271C、L271V、L271A、L271Y、L271R、L271E、L271F、L271T、L271K、L271S、L271G、S272G、S272N、S272D、S272V、S272R、H273F,H273L、H273G、H273W、H273A、H273R、H273D、H273K、H273Q、S274R、S274W、S274A、S274G、S274F、S274E、S274M、S274H、Q275L、Q275T、Q275K、Q275H、Q275G、Q275V、Q275S、Q275E、Q275C、Q275W、Q275P、L276G、T278V、T278C、T278G、T278L、T278Q、T278Y、T278R、E279R、E279G、E279C、E279V、L280V、L280K、L280G、Q281S、Q281G、N282G、N282C、N282D、N282A、N282S、N282R、N282E、N282K、N282L、R283G、R283A、R283C、R283K、R283M、A284S、K285P、K285C、K285V、K285R、V286P、V286R、V286D、V286C、V286M、V286E、Y287L、Y287Q、Y287M、K290L、K290R、K290V、K290H、G291S、I293V、G294C、A295M、G296V、G296R、G296Y、G296R、T297V、T297S、G298L、P308C、P308T、P308G、R309L、V310C、V310A、V310H、V310G、V310Q、V310R、V310T、K311Y、K311H、K311C和K311V，其中該變體與SEQIDNO:3具有至少70％序列一致性，并且該變體具有蛋白酶活性。3.如權利要求1-2中任一項所述的變體，其中該變體與親本相比或與具有SEQIDNO:3的蛋白酶相比具有改進的洗滌劑穩定性。4.如權利要求1-3中任一項所述的變體，其中該變體是選自下組，該組由以下各項組成：a)與SEQIDNO:2的成熟多肽具有至少75％序列一致性的多肽；b)由多核苷酸編碼的多肽，該多核苷酸在中、或高嚴格條件下與(i)SEQIDNO:1的成熟多肽編碼序列、(ii)編碼SEQIDNO:2的成熟多肽的序列、或(iii)(i)或(ii)的全長補體雜交；c)由與SEQIDNO:1的成熟多肽編碼序列或者編碼SEQIDNO:2的成熟多肽的序列具有至少75％一致性的多核苷酸編碼的一種多肽；以及d)SEQIDNO:2的成熟多肽的片段，該片段具有蛋白酶活性。5.如權利要求1-4中任一項所述的變體，其中該變體與SEQIDNO:3的成熟多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列一致性。6.如權利要求1-5中任一項所述的變體，其中相比于SEQIDNO:3，改變的總數為1-20個，例如1-10個和1-5個，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個改變。7.一種洗滌劑組合物，其包括根據權利要求1至6中任一項所述的變體。8.如權利要求7所述的洗滌劑組合物，其進一步包括一種或多種洗滌劑組分。9.根據權利要求7-8中任一項所述的洗滌劑組合物，其進一步包括一種或多種選自下組的另外的酶，該組由以下各項組成：蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角質酶、纖維素酶、內切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果膠酶、果膠裂解酶、黃原膠酶、過氧化物酶、鹵代過氧合酶、過氧化氫酶以及甘露聚糖酶，或其任何混合物。10.根據權利要求7-9中任一項所述的洗滌劑組合物，其處于條、均勻的片劑、具有兩個或更多個層的片劑、具有一個或多個室的袋、規則的或壓縮的粉末、顆粒、膏、凝膠、或規則的、壓縮的或濃縮的液體的形式。11.根據權利要求7-10中任一項所述的洗滌劑組合物在清潔過程例如洗衣或硬表面清潔例如餐具洗滌中的用途。12.一種用于獲得蛋白酶變體的方法，該方法包括將在對應于以下位置的一個或多個位置的取代引入親本蛋白酶：SEQIDNO:3的1、2、3、4、5、7、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、36、38、39、40、41、46、47、48、49、50、54、57、58、59、6...
【專利技術屬性】
技術研發人員：S克羅格斯加德，RT倫哈德，EP弗里斯，
申請(專利權)人：諾維信公司，
類型：發明
國別省市：丹麥,DK
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。