一種楊梅葉多酚的提取方法技術

本發明專利技術公開了一種楊梅葉多酚的提取方法，包括以下步驟：1)打漿、酶解，得到楊梅葉酶解液；2)用乙醇對楊梅葉酶解液進行粗提；3)將粗提液經膜過濾，得澄清液；4)將澄清液上大孔樹脂柱純化，洗脫、干燥，即為楊梅葉多酚。本發明專利技術制得的楊梅葉多酚純度高，收率高，與現有技術相比，本發明專利技術制得的楊梅葉多酚純度在97％以上，楊梅葉多酚的得率為6.4mg/g以上，是現有技術的2-5倍。

Method for extracting polyphenol from Myrica rubra Leaves

The invention discloses a method for extracting polyphenols from Myrica rubra leaf, which comprises the following steps: 1) beating, enzymatic hydrolysis, from Myrica rubra leaf enzyme solution; 2) of crude extract of Myrica rubra leaf enzyme solution with ethanol; 3) the crude extract by membrane filtration, have clear liquid; 4) will clear liquid macroporous resin column purification, washing, drying, namely bayberry polyphenols. The prepared Yang Meiye polyphenol has high purity, high yield, compared with the prior art, the invention made Yang Meiye polyphenol purity more than 97%, the yield of polyphenols Yang Meiye is more than 6.4mg/g, is 2-5 times the existing technology.

【技術實現步驟摘要】
一種楊梅葉多酚的提取方法
本專利技術屬于植物活性成分提取
，具體涉及一種楊梅葉多酚的提取方法。
技術介紹
植物多酚是目前功能食品與天然產物研究開發等領域研究的熱點，國內外不斷有發現植物多酚新功能及從新植物資源中開發利用植物多酚的報道。按照自由基能力，目前所報道的植物多酚眾多的功能，如預防心腦血管疾病、調節免疫能力、抗腫瘤等，都與植物多酚清除自由基的能力有關。在體內危害人體健康的主要自由基是超氧陰離子自由基與羥基自由基。植物多酚是廣泛存在于植物體內的重要次生代謝產物，廣泛分布于植物體的根、葉、皮、果肉和殼中，具有抗氧化、抗腫瘤、保護肝臟等多種生理功能，是人體每天必須從食物中攝取的抗氧化物質，被稱為繼膳食纖維之后的第七營養素?，F有技術中，植物多酚的提取方法主要有溶液浸提法、超聲提取法、微波法等，但是單一的提取方法產率低。本專利技術引入生物酶解技術，同時采用改進的超聲提取工藝，破壞楊梅葉細胞，促使其中的多酚物質溶出并向外擴散，可以減少溶劑的用量，提高提取率，提高純度。楊梅（MyricarubraSieb.etZucc.）屬楊梅科楊梅屬植物，是我國的特色果樹之一，在我國東南部地區已經有2000多年的種植歷史。楊梅的果實、樹葉和樹皮均可入藥，具有較高的經濟價值。古代醫書記載楊梅葉味苦、微辛、性溫，可用于治療腹瀉、黃膽肝炎、淋巴結核、慢性咽喉炎等疾病。重慶是楊梅種植大市，為調節生長與結實的關系，促進楊梅的持續、優質、高產，每年都需對楊梅樹進行整形修剪，因而產生大量廢棄楊梅枝葉。開發利用楊梅葉資源，不僅解決了廢物處理所帶來的環境污染問題，而且增加了楊梅的產業價值。
技術實現思路
本專利技術要解決的技術問題是提供一種楊梅葉多酚的提取方法，該方法制得的楊梅葉多酚純度高，收率高。本專利技術提供的技術方案是提供一種楊梅葉多酚的提取方法，包括以下步驟：1)打漿、酶解：采用料液比1:3-5，用打漿機將洗凈瀝干的楊梅葉打漿3-5min，然后加入蛋白酶充分攪拌后靜置1-2h進行酶解后，用800-1000目濾網過濾取上清酶解液備用；2)粗提：用乙醇對楊梅葉酶解液進行超聲浸提，離心，收集上清液，減壓回收乙醇，得到楊梅葉粗提液；3)過膜：將上清液過膜過濾裝置進行過濾，得到澄清液；4)純化：將澄清液上大孔樹脂柱，上樣流速為0.4～0.6BV/h，上大孔樹脂柱，水洗柱，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，即得楊梅葉多酚。上述步驟1)中，所述的酶解是每100克楊梅葉加入0.2-0.4g蛋白酶，45-55℃酶解1-2h。步驟2)中，楊梅葉中含有蛋白質和碳水化合物，采用乙醇為溶媒，不利于蛋白質和碳水化合物的溶解，可減少雜質成分的溶出，對后續純化有益。乙醇體積濃度為40～50％及酶解液與乙醇的料液比為1ml：1～3ml為佳，乙醇濃度過高會對蛋白質產生凝聚作用，使得蛋白質滯留在顆粒的內部孔道中，反而增加楊梅葉多酚的擴散阻力，降低終產品的收率。乙醇濃度過低則雜質含量較大，影響終產品的純度。步驟3)中，所述膜過濾裝置為50000道爾頓微濾膜。步驟4)中,水洗流速為2.5～3BV/h，水的洗脫量為5～6BV；乙醇的洗脫流速為2～2.5BV/h，乙醇的洗脫量為4～5BV；乙醇的體積濃度為65～85％。與現有技術相比，本專利技術制得的楊梅葉多酚純度在97％以上，楊梅葉多酚的得率為6.4mg/g以上，是現有技術的2-5倍。具體實施方式以下具體實施例對本專利技術作進一步闡述，但不作為對本專利技術的限定。實施例11)打漿、酶解：取洗凈瀝干楊梅葉1000g,采用料液比1:3加入純凈水，用打漿機將洗凈瀝干的楊梅葉打漿3min，然后加入2g蛋白酶充分攪拌后在45℃酶解1h，然后用800目濾網過濾取上清酶解液備用；2)粗提：按酶解液與乙醇的料液比為1ml：1ml加入40％乙醇對楊梅葉酶解液進行超聲浸提，離心，收集上清液，減壓回收乙醇，得到楊梅葉粗提液；3)過膜：將上清液50000道爾頓微濾膜裝置進行過濾，得到澄清液；4)純化：將澄清液上DA201大孔樹脂柱，上樣流速為0.4BV/h，先水洗柱，水洗流速為2.5BV/h，水的洗脫量為5BV；然后用65％乙醇洗脫，乙醇的洗脫流速為2BV/h，乙醇的洗脫量為4BV，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，即得9.4g楊梅葉多酚。經HPLC檢測，成品中楊梅葉多酚的純度為98.4％，楊梅葉多酚的得率為6.4mg/g以上。實施例21)打漿、酶解：取洗凈瀝干楊梅葉1000g,采用料液比1:5加入純凈水，用打漿機將洗凈瀝干的楊梅葉打漿5min，然后加入4g蛋白酶充分攪拌后在55℃酶解2h，然后用1000目濾網過濾取上清酶解液備用；2)粗提：按酶解液與乙醇的料液比為1ml：3ml加入50％乙醇對楊梅葉酶解液進行超聲浸提，離心，收集上清液，減壓回收乙醇，得到楊梅葉粗提液；3)過膜：將上清液50000道爾頓微濾膜裝置進行過濾，得到澄清液；4)純化：將澄清液上DA201大孔樹脂柱，上樣流速為0.6BV/h，先水洗柱，水洗流速為3BV/h，水的洗脫量為6BV；然后用85％乙醇洗脫，乙醇的洗脫流速為2.5BV/h，乙醇的洗脫量為5BV，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，即得9.7g楊梅葉多酚。經HPLC檢測，成品中楊梅葉多酚的純度為97.8％，楊梅葉多酚的得率為6.4mg/g以上。實施例31)打漿、酶解：取洗凈瀝干楊梅葉1000g,采用料液比1:4加入純凈水，用打漿機將洗凈瀝干的楊梅葉打漿4min，然后加入3g蛋白酶充分攪拌后在50℃靜置酶解1.5h，然后用900目濾網過濾取上清酶解液備用；2)粗提：按酶解液與乙醇的料液比為1ml：2ml加入45％乙醇對楊梅葉酶解液進行超聲浸提，離心，收集上清液，減壓回收乙醇，得到楊梅葉粗提液；3)過膜：將上清液50000道爾頓微濾膜裝置進行過濾，得到澄清液；4)純化：將澄清液上DA201大孔樹脂柱，上樣流速為0.5BV/h，先水洗柱，水洗流速為2.8BV/h，水的洗脫量為5.5BV；然后用75％乙醇洗脫，乙醇的洗脫流速為2.3BV/h，乙醇的洗脫量為4.5BV，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，即得9.6g楊梅葉多酚。經HPLC檢測，成品中楊梅葉多酚的純度為98.4％，楊梅葉多酚的得率為6.4mg/g以上。實施例4將上述實施例1-3得到的楊梅葉多酚對超氧陰離子O2-·清除效果的測定：在試驗濃度范圍內,楊梅葉多酚對O2-·的清除能力較強,0.5mg/mL～2.5mg/mL濃度范圍內清除率隨濃度上升而提高的趨勢明顯。當楊梅葉多酚濃度達到2.5mg/mL時,對O2-·的清除率已超過90%。實施例5將上述實施例1-3得到的楊梅葉多酚對羥基自由基·OH清除效果的測定：楊梅葉多酚濃度在0.5mg/mL～2.0mg/mL范圍內對·OH清除率隨濃度上升而顯著提高。當楊梅葉多酚濃度達到2.0mg/mL時,清除率已超過90%。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種楊梅葉多酚的提取方法，其特征在于：包括以下步驟：1)打漿、酶解：采用料液比1:?3?5，用打漿機將洗凈瀝干的楊梅葉打漿3?5min，然后加入蛋白酶充分攪拌后進行酶解，用?800?1000?目濾網過濾取上清酶解液備用；2)?粗提：用乙醇對楊梅葉酶解液進行超聲浸提，離心，收集上清液，減壓回收乙醇，得到楊梅葉粗提液；3)過膜：將上清液過膜過濾裝置進行過濾，得到澄清液；4)純化：將澄清液上大孔樹脂柱，上樣流速為0.4～0.6BV/h，上大孔樹脂柱，水洗柱，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，即得楊梅葉多酚。

【技術特征摘要】
1.一種楊梅葉多酚的提取方法，其特征在于：包括以下步驟：1)打漿、酶解：采用料液比1:3-5，用打漿機將洗凈瀝干的楊梅葉打漿3-5min，然后加入蛋白酶充分攪拌后進行酶解，用800-1000目濾網過濾取上清酶解液備用；2)粗提：用乙醇對楊梅葉酶解液進行超聲浸提，離心，收集上清液，減壓回收乙醇，得到楊梅葉粗提液；3)過膜：將上清液過膜過濾裝置進行過濾，得到澄清液；4)純化：將澄清液上大孔樹脂柱，上樣流速為0.4～0.6BV/h，上大孔樹脂柱，水洗柱，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，即得楊梅葉多酚。2.根據權利要求1所述的一種楊梅葉多酚的提取方法，其特征在于：...

【專利技術屬性】
技術研發人員：萬雪峰，其他發明人請求不公開姓名，
申請(專利權)人：重慶都好生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：重慶,50